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品牌專題阿爾茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）是一種神經(jīng)退行性疾病，其主要病理特征之一是大腦中beta-淀粉樣蛋白（Amyloid-β, Aβ）的沉積。Aβ的積累被認(rèn)為驅(qū)動(dòng)了AD的發(fā)病過程，因此，清除Aβ成為治療AD的一個(gè)重要目標(biāo)。星形膠質(zhì)細(xì)胞（Astrocytes）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的主要膠質(zhì)細(xì)胞類型，具有多種免疫效應(yīng)功能，能夠釋放多種生長因子、細(xì)胞因子和化學(xué)趨化因子，并參與抗氧化應(yīng)激和神經(jīng)元保護(hù)。研究發(fā)現(xiàn)，星形膠質(zhì)細(xì)胞能夠攝取Aβ，從而有助于清除腦中的Aβ沉積。然而，關(guān)于人星形膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的Aβ清除機(jī)制的了解仍相對(duì)有限。特別是在胎兒和成人星形膠質(zhì)細(xì)胞在Aβ攝取方面的差異，以及α1-抗胰凝乳蛋白酶（α1-Antichymotrypsin, ACT）對(duì)Aβ攝取的影響方面，尚需進(jìn)一步研究
“Binding and Uptake of Ab1-42 by Primary Human Astrocytes In Vitro”旨在探討胎兒和成人星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ1-42的攝取能力，并研究ACT是否會(huì)影響這一過程。研究通過流式細(xì)胞術(shù)和共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）技術(shù)，對(duì)胎兒和成人星形膠質(zhì)細(xì)胞攝取FAM標(biāo)記的Aβ1-42的能力進(jìn)行了量化分析，并觀察了ACT對(duì)Aβ1-42攝取的影響。此外，研究還評(píng)估了Aβ1-42和ACT處理對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活性和炎癥因子釋放的影響。
實(shí)驗(yàn)方法
1. 細(xì)胞培養(yǎng)：采用人體原代胎兒和成人星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。胎兒星形膠質(zhì)細(xì)胞在含有特定生長因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。成人星形膠質(zhì)細(xì)胞則從非癡呆和AD患者的死后腦組織中分離并培養(yǎng)。所有細(xì)胞均在無菌條件下培養(yǎng)，并定期更換培養(yǎng)基以保持細(xì)胞活力。
2. Aβ1-42與ACT的準(zhǔn)備：Aβ1-42通過與anaspec品牌的5-(和-6)-羧基熒光素（FAM）標(biāo)記的Aβ1-42混合制備熒光Aβ1-42（FluoAβ）。ACT則來源于血漿，并與FluoAβ以不同的摩爾比混合，以研究其對(duì)Aβ1-42攝取的影響。
貨號(hào) | ||
規(guī)格 | 0.1mg | 0.5mg |
名稱 | β-Amyloid (1-42), FAM-labeled | |
序列 | FAM-DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA | |
CAS號(hào) | 1802087-78-0 | |
圖片 |
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3. 結(jié)合與攝取實(shí)驗(yàn)：通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ1-42的結(jié)合與攝取情況。細(xì)胞與不同濃度的Aβ1-42孵育一定時(shí)間后，收集細(xì)胞并用流式細(xì)胞儀分析熒光強(qiáng)度，從而量化Aβ1-42的結(jié)合與攝取。此外，還通過CLSM觀察Aβ1-42在細(xì)胞內(nèi)的分布和攝取情況。
4. 細(xì)胞活性與炎癥因子檢測(cè)：為了評(píng)估Aβ1-42和ACT對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活性的影響，采用XTT試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活性。同時(shí)，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥因子單核細(xì)胞趨化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1, MCP-1）的水平，以評(píng)估細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。
5. 蛋白質(zhì)分析：通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和蛋白質(zhì)印跡（Western Blotting）分析Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物的蛋白質(zhì)組成。同時(shí)，通過電子顯微鏡觀察Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物的形態(tài)學(xué)特征。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1. Aβ1-42的結(jié)合與攝取：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無論是胎兒還是成人星形膠質(zhì)細(xì)胞，均能夠結(jié)合并攝取Aβ1-42。然而，胎兒星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ1-42的攝取效率顯著高于成人星形膠質(zhì)細(xì)胞。此外，Aβ1-42的攝取量隨著孵育時(shí)間和Aβ1-42濃度的增加而增加。值得注意的是，無論是來自AD患者還是非癡呆患者的成人星形膠質(zhì)細(xì)胞，在Aβ1-42的攝取能力上均未見顯著差異。同時(shí)，ApoE基因型也未對(duì)Aβ1-42的攝取產(chǎn)生顯著影響。
通過流式細(xì)胞術(shù)（FACS）檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)FluoAb的攝取。（A）FluoAb處理濃度（1-20μM）與成年（n=14）和胎兒（n=3）星形膠質(zhì)細(xì)胞在過夜暴露后FluoAb陽性百分比的劑量-反應(yīng)關(guān)系。（B）暴露于10μM FluoAb不同時(shí)間（2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)或過夜）與胎兒（n=3）和成年（n=8）星形膠質(zhì)細(xì)胞FluoAb陽性百分比的時(shí)間-反應(yīng)關(guān)系。結(jié)果以平均值和標(biāo)準(zhǔn)差（須狀線）表示。
2. ACT對(duì)Aβ1-42攝取的影響：盡管ACT在體外和體內(nèi)均被證明能夠影響Aβ的聚集和清除，但在本實(shí)驗(yàn)中，ACT并未顯著影響人體原代星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ1-42的攝取。然而，ACT在一定程度上刺激了成人星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎癥因子MCP-1，而對(duì)胎兒星形膠質(zhì)細(xì)胞則無此作用。這一發(fā)現(xiàn)可能暗示ACT在成人和胎兒星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用機(jī)制存在差異。
3. 細(xì)胞活性與形態(tài)學(xué)觀察：在長時(shí)間暴露于Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物后，星形膠質(zhì)細(xì)胞的活性并未受到顯著影響。然而，電子顯微鏡觀察顯示Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物在形態(tài)上存在差異，這可能與ACT對(duì)Aβ1-42聚集狀態(tài)的影響有關(guān)。
4. 蛋白質(zhì)分析：SDS-PAGE和Western Blotting結(jié)果顯示Aβ1-42主要以單體和高分子量寡聚體的形式存在。在與ACT混合后，Aβ1-42的聚集狀態(tài)發(fā)生變化，形成了不同大小的SDS穩(wěn)定寡聚體。這些變化可能反映了ACT對(duì)Aβ1-42聚集狀態(tài)的調(diào)控作用。
該研究報(bào)道了人體原代胎兒和成人星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ1-42的結(jié)合與攝取能力，并探討了ACT在此過程中的作用。研究結(jié)果表明胎兒星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)Aβ1-42的攝取效率顯著高于成人星形膠質(zhì)細(xì)胞，而ACT并未顯著影響Aβ1-42的攝取但刺激了成人星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎癥因子MCP-1。這些發(fā)現(xiàn)為深入理解Aβ在人體內(nèi)的清除機(jī)制提供了新的視角，并為AD的治療提供了新的思路。
在神經(jīng)退行性疾病，尤其是阿爾茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）的研究中，β-淀粉樣蛋白（Amyloid-β，Aβ）是淀粉樣斑塊的主要成分，在AD患者的大腦神經(jīng)元中積累。從AD大腦中分離出的淀粉樣肽的生物化學(xué)分析表明，Aβ(1-42)是與老年斑淀粉樣蛋白相關(guān)的主要種類,anaspec作為多肽生產(chǎn)專家，可以提供多種Aβ(1-42)：
貨號(hào) | 名稱 |
AS-20276 | β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-20276-25 | β-Amyloid (1-42) - 25 mg |
AS-20276-5 | β-Amyloid (1-42) - 5 mg |
AS-21791 | β-Amyloid (1-42) ? HCl - 0.5 mg |
AS-21793 | β-Amyloid (1-42) ? HCl - 1 mg |
AS-23523-05 | Biotin-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-23524-01 | Biotin-β-Amyloid (1-42) - 0.1 mg |
AS-23537 | Cys-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-23538 | Cys-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-24224- | β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-24640 | Biotin-LC-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-24641-01 | Biotin-LC-β-Amyloid (1-42) - 0.1 mg |
AS-25231 | β-Amyloid Peptide (1-42), mouse, rat - 1 mg |
AS-25381 | β-Amyloid Peptide (1-42), mouse, rat - 0.5 mg |
AS-25382 | Scrambled-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-25383 | Scrambled-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-29903-01 | [Pyr11]-β-Amyloid (11-42) - 0.1 mg |
AS-29903-1 | [Pyr11]-β-Amyloid (11-42) - 1 mg |
AS-60476 | β-Amyloid (1-42), TAMRA-labeled - 0.1 mg |
AS-60479-01 | β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 488-labeled - 0.1 mg |
AS-60480-01 | β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 555-labeled - 0.1 mg |
AS-60883 | β-Amyloid (1-42), sodium salt - 1 mg |
AS-60883-01 | β-Amyloid (1-42), sodium salt - 0.1 mg |
AS-60892 | β-Amyloid (1-42), Scrambled, 5-FAM labeled - 0.1 mg |
AS-61226-05 | GIP (1-42), human - 0.5 mg |
AS-61226-1 | GIP (1-42), human - 1 mg |
AS-61484-01 | β-Amyloid (1-42)-Lys(Biotin)-NH2 - 0.1 mg |
AS-61484-05 | β-Amyloid (1-42)-Lys(Biotin)-NH2 - 0.5 mg |
AS-61967-05 | [Gly22]-β-Amyloid (1-42), Arctic Mutation - 0.5 mg |
AS-62142 | [Gln22]-β-Amyloid (1-42), Dutch mutation - 0.5 mg |
AS-62148 | [Lys22]-β-Amyloid (1-42), Italian Mutation - 0.5 mg |
AS-62478 | [Met(O)35]-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-63317- | β-Amyloid (11-42) - 1 mg |
AS-63323 | [Arg6]-β-Amyloid (1-42), English Mutation - 0.5 mg |
AS-63324 | [Asn7]-β-Amyloid (1-42), Tottori-Japanese Mutation - 0.5 mg |
AS-63327 | β-Amyloid (11-42), HiLyte? Fluor 488-labeled - 0.1 mg |
AS-63672-05 | [Cys26]-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg |
AS-63672-1 | [Cys26]-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-63704 | [Gly21]-β-Amyloid (1-42), Dutch Mutation - 0.5 mg |
AS-63705 | [Asn23]-β-amyloid (1-42), Iowa Mutation - 0.5 mg |
AS-63738 | ClearPoint? β-Amyloid (1-42), 13C, 15N-labeled at Arg & Lys - 50 ?g |
AS-64129-05 | β-Amyloid (1-42) ? HFIP - 0.5 mg |
AS-64129-1 | β-Amyloid (1-42) ? HFIP - 1 mg |
AS-64161 | β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 647-labeled - 0.1 mg |
AS-64519 | [Met]-β-Amyloid (1-42), 5-TAMRA labeled - 0.1 mg |
AS-65178 | [Pro19]-β-Amyloid (1-42) - 1 mg |
AS-72216 | AggreSure β-Amyloid (1-42), human - 0.25 mg |
AS-65627 | ?-Amyloid (1-42), HiLexa? Fluor 488-labeled - 0.1 mg |
AS-65662 | GIP (1-42)-acetate, human - 0.1 mg |
AS-GMP-20276-1 | GMP β-Amyloid (1-42), human - 1 mg NET |
AS-GMP-20276-5 | GMP β-Amyloid (1-42), Human - 5 mg NET |
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