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來了來了！小編來了！帶著科研寶寶們的常見問題走來了！

Tips：

1.Worthington多數(shù)產(chǎn)品為凍干粉：凍干粉粘附在瓶壁上，可以用刮勺取量，并分裝；

2.外觀正常，內(nèi)部若有結(jié)塊現(xiàn)象：因為小瓶是原廠人工灌裝，致使內(nèi)部粉末狀的酶結(jié)塊是正常的（或可能濕氣較大進入瓶內(nèi)）。

以下是熱銷貨號為例，常見問題作參考：

一、膠原蛋白酶：

以 LS004174  Collagenase, Type 2 膠原酶，2 為例：

1.膠原酶可以溶解在大多數(shù)中性平衡鹽溶液中(如PBS, Hanks, EBSS等)，最佳pH范圍為6.3-7.5（不含鈣鎂即可）。

2.稀釋劑的選擇取決于具體的應(yīng)用。酶在凍干狀態(tài)下非常穩(wěn)定，所以我們通常建議保持凍干狀態(tài)（現(xiàn)配現(xiàn)用）。膠原酶在濃度為1- 20mg /ml時可溶。使用的濃度是特定于應(yīng)用的。

3.大多數(shù)均衡的鹽溶液都含有鈣和鎂。稀釋劑的選擇是根據(jù)具體應(yīng)用而定的。膠原酶在沒有鈣和鎂溶液的情況下也能起作用，因為鈣和鎂都存在于組織中。

注：CLS-2比CLS-1更容易消化一個非常致密或纖維性的腫瘤。

二、木瓜蛋白酶

以 LS003176  Papain 木瓜蛋白酶 為例：

1. 木瓜蛋白酶的正常工作溶液通常約為20 u/ml (1-2 mg/ml)，酶可溶于大多數(shù)中性平衡鹽溶液（例如 PBS, Hanks, EBSS）。在>2.5 mg/ml時，溶解度可能受到限制。常見的情況是20 u/ml木瓜蛋白酶加1mM半胱氨酸和0.5mM EDTA。2.在其天然狀態(tài)下，木瓜蛋白酶可能表現(xiàn)出較低的活性，因為一些游離巰基可能被阻斷。通常建議使用半胱氨酸或巰基乙醇等還原劑進行輕度還原，以達到充分活性。使用EDTA是因為它能結(jié)合被認為是木瓜蛋白酶抑制劑的重金屬。即便在不添加半胱氨酸或EDTA的情況下，木瓜蛋白酶仍具有活性。

注：木瓜蛋白酶是懸浮液，為白色至灰白色乳白色懸浮液，應(yīng)保存在2-8℃，在冷藏時是粘性的，未稀釋的原液打開后，還是在2-8℃保存。作為懸液，它不是均勻的，如果放著不動，這種酶可能會沉淀下來。加樣前一定要翻轉(zhuǎn)幾次?；蛘呖梢杂檬旨訜崞孔?室溫)，使它更容易處理。

【注意】

LK003178是5支 LK003176（木瓜蛋白酶）；

LK003178  是凍干的，成分含有L-cysteine 和 EDTA，這種用5ml EBSS重新溶解，以制備一個含有約20單位/毫升的工作溶液，其中包含1mmol的L-半胱氨酸和0.5毫摩爾的EDTA；

若您想要購買的是：LK003150（完整木瓜蛋白酶解離試劑盒） 

LK003150  這個試劑盒有四種組分（木瓜蛋白酶，脫氧核糖核酸酶，EBSS平衡鹽溶液 和抑制劑），

LK003178  木瓜蛋白酶  PDS Kit, Papain Vial  是組織分離試劑盒LK003150的組分之一，不要買錯啦！。

三、彈性蛋白酶

以 LS002279  Elastase  彈性蛋白酶 為例：

1.關(guān)于彈性蛋白酶的重組/稀釋，緩沖液的選擇、濃度和pH值通常取決于應(yīng)用。彈性蛋白酶是相對疏水的，因此在濃度大于0.25%和中性pH下的溶解度是具有挑戰(zhàn)性的。

2.懸浮液在冷藏（2-8℃）6個月內(nèi)保持穩(wěn)定。這是一種乳白色懸浮液，必須將其置于至少室溫再移液。在移液之前，應(yīng)將懸浮液倒置幾次，以確保均勻性。稀釋的酶在使用前應(yīng)過濾0.22微米，確保過濾前酶晶體溶解。

3.彈性蛋白酶在pH值4-10.4范圍內(nèi)穩(wěn)定。最佳pH值接近8.5。對于細胞培養(yǎng)應(yīng)用，當(dāng)材料溶解在中性平衡鹽溶液中且需要更高濃度（>2.5%）時，將pH值提高至9-10有助于溶解，然后將pH值降低至中性以保持細胞健康。

注：大多數(shù)實驗室都直接溶解在選擇的平衡鹽溶液中。最好根據(jù)需要制備新的溶液，但如果必須儲存稀釋的溶液，則可以在-20℃或-80℃下分裝并冷凍?？蛻舯仨毟鶕?jù)其條件確定冷凍的穩(wěn)定性。

四、中性蛋白酶

以 LS02100  Neutral Protease 中性蛋白酶 為例：

1.中性蛋白酶的常規(guī)工作液濃度為 0.5-3.0 u/ml，但該濃度差異較大，具體取決于應(yīng)用場景、稀釋液類型、孵育時間及溫度。

2.中性蛋白酶通常溶解于所選的中性平衡鹽溶液中，例如磷酸鹽緩沖液（PBS）、漢克斯液（Hanks）、厄爾液（Earles）等。

3.我們通常建議根據(jù)需要稀釋該酶，因為其凍干粉在 2-8℃條件下穩(wěn)定性極佳。如有必要，可將復(fù)溶后的酶液分裝，并在 - 20℃下冷凍保存。具體條件下的穩(wěn)定性需由使用者自行測定。

四、脫氧核糖核酸酶

以 LS002006  Deoxyribonuclease I 脫氧核糖核酸酶I 為例：

1. 脫氧核糖核酸酶I可以溶解在pH值4.5至9.0的多種緩沖液中。選擇緩沖液和濃度通常是基于特定應(yīng)用的。最好在較低的pH值下制備母液（例如，使用1mM鈣的5mM醋酸緩沖液，pH 4.5），分裝，并冷凍。

2. 對于細胞培養(yǎng)應(yīng)用，一些實驗室會將DP在中性平衡鹽溶液中溶解，0.22um過濾，分裝，并在-20或-80℃下冷凍，效果良好。您可以制備的濃度越高越好（1mg/ml及以上是好的），并且應(yīng)避免反復(fù)凍融。我們不建議在2-8℃下儲存重新溶解的材料。

注：DNase I的失活方法：用5mM EDTA加75℃加熱10分鐘

以 LS002425  Deoxyribonuclease II 脫氧核糖核酸酶II為例：

1.DNase II（脫氧核糖核酸酶 II）可根據(jù)具體應(yīng)用需求，溶解于水或您選擇的緩沖液中。請注意，已有研究表明，DNase II 的最適 pH 值為 4.5-5.0。

2.該酶的抑制劑包括碘乙酸（Iodoacetic acid）、N - 溴代琥珀酰亞胺（N-bromosuccinimide）和過氧化氫（hydrogen peroxide），硫酸鹽同樣具有抑制作用。

3.在進行活性檢測時，我們會先將該酶以 1mg/ml 的濃度溶解于水中，再進行進一步稀釋。對于復(fù)溶后酶的穩(wěn)定性，我們不做保證；但如果您確實需要儲存復(fù)溶后的酶液，建議將其分裝成小份后冷凍保存，以避免反復(fù)凍融。

五、核糖核酸酶 A

以 LS002132 Ribonuclease A, DNase核糖核酸酶 A為例：

1. 核糖核酸酶 A以液體形式提供，溶解于 50 mM 醋酸鈉、0.3 mM EDTA、50% 甘油（pH 5.0）中。稀釋緩沖液的選擇取決于具體應(yīng)用；

2. 核糖核酸酶 A 在多種反應(yīng)條件下均保持活性。核糖核酸酶 A 可溶于水或緩沖液（如 Tris 或醋酸鹽緩沖液，pH 范圍 5–7，可含或不含 NaCl 或 CaCl?）。為防止蛋白酶長期作用導(dǎo)致問題，我們通常建議在較低 pH 下重溶?？砂?nbsp;1–10 mg/ml 的濃度溶于 0.01 M 醋酸鈉緩沖液（pH 5.0）或水中。

注：本產(chǎn)品不含 DNase 和 RNase，如需稀釋，稀釋緩沖液也應(yīng)無 DNase 和 RNase。

以上就是幫小伙伴們整理出來的常見問題，如還有需要，隨時可咨詢哦！

DSHB于1986年由國家兒童健康與人類發(fā)展研究所建立，自1997年起設(shè)在愛荷華大學(xué)，其使命是作為國際研究界的抗體資源。目標(biāo)始終不變：為科學(xué)進步儲存雜交瘤和單克隆抗體。

產(chǎn)品形式說明

上清液（-s）

由雜交瘤細胞條件培養(yǎng)基構(gòu)成，主要成分為無動物源成分（ADCF）的單克隆抗體生長培養(yǎng)基。雜交瘤培養(yǎng)初期殘留的胎牛血清（FBS）濃度低于1.5-2.0%，且未添加牛血清白蛋白（BSA）作為抗體穩(wěn)定劑。

濃縮液（-c）

通過50kD超濾膜制備，雖非純化抗體，但免疫球蛋白含量為上清液的10倍。換算關(guān)系為：100ul濃縮液≈1ml上清液的抗體量。推薦僅用于需高濃度小體積抗體的實驗（如免疫沉淀、顯微注射或抗體偶聯(lián)）。常規(guī)免疫染色/印跡實驗建議優(yōu)先選用上清液。

純化單抗（-y）

供應(yīng)量有限，具體推薦稀釋比例詳見網(wǎng)站各抗體頁面的提交者注釋。產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)注抗體濃度，技術(shù)資料可從官網(wǎng)下載。

例如：

凍存細胞（-f）

每管1ml凍存液含5×10⁶至1×10⁷個細胞，干冰運輸。接收后需立即復(fù)蘇培養(yǎng)或轉(zhuǎn)入液氮長期保存。

活細胞（-g）

由單支凍存管復(fù)蘇擴增而來，含2×10⁷至4×10⁷個活細胞。經(jīng)質(zhì)檢確認生長狀態(tài)良好后，以T25培養(yǎng)瓶（含65ml培養(yǎng)基）形式運輸。收貨后需立即轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

關(guān)鍵生物參數(shù)說明

FBS殘留量：<2%的濃度設(shè)計既保留必要生長因子（如胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白），又最大限度降低動物源成分干擾

超濾標(biāo)準：50kD截留分子量確保有效富集IgG類抗體（分子量~150kD）

細胞活率保障：凍存細胞采用程序降溫（-1℃/min）結(jié)合90%FBS+10%DMSO凍存液，活細胞運輸時培養(yǎng)基含15%特級胎牛血清（經(jīng)70項質(zhì)控檢測）

（注：實際應(yīng)用中建議對濃縮液進行Bradford法蛋白定量驗證，活細胞培養(yǎng)時需維持37℃、5%CO₂的恒溫恒濕環(huán)境）

產(chǎn)品儲存建議

最佳儲存確保抗體活性隨時間保持。對于立即使用，建議在4°C下短期儲存長達兩周。如需長期保存，應(yīng)將溶液分裝成不小于20ul的體積，在-20°C或-80°C冷凍。小體積的等分液應(yīng)能提供足夠的試劑供短期使用。應(yīng)避免凍融循環(huán)。對于濃縮物或生物反應(yīng)器產(chǎn)品，可在冷凍前加入等量的甘油（一種冷凍保護劑）。

產(chǎn)品使用建議

每種應(yīng)用的最佳免疫球蛋白（Ig）濃度因物種和抗體親和力而異。對于每種產(chǎn)品，最終用戶實驗室必須針對每種應(yīng)用優(yōu)化抗體滴度。使用小鼠 Ig 進行免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫熒光（IF）和免疫細胞化學(xué)（ICC）時，良好的起始濃度為 2 - 5 ug/ml。對于蛋白質(zhì)印跡（WB），推薦的小鼠 Ig 濃度范圍為 0.2 - 0.5 ug/ml。通常，兔抗體具有更高的親和力，在初始測試時使用的 Ig 濃度要低得多。兔 Ig 的推薦濃度為：0.2 - 0.5 微克/毫升（IF、IHC 和 ICC）和 20 - 50 ng/ml（WB）。

一、產(chǎn)品問題

問：你們的試劑盒可以用于診斷目的嗎？ 

答：我們目前所有的檢測試劑盒僅用于研究目的，不能用于診斷。

問：一個試劑盒可以進行多少次測試？ 

答：試劑盒的總測試次數(shù)可以在目錄編號中找到。例如，QuantiChrom?肌酐檢測試劑盒（目錄編號DICT-500）足夠在96孔板中進行500次測試。試劑盒的大小指的是標(biāo)準96孔格式下的總測試次數(shù)，包括樣品以及所需的對照品和標(biāo)準品。

問：檢測是否具有物種特異性？ 

答：BioAssay Systems的大多數(shù)生化檢測試劑盒不具有物種特異性，已測試過人類、小鼠、大鼠、牛等樣本。在極少數(shù)情況下，不同物種的酶的生化特性可能需要對協(xié)議進行調(diào)整，例如改變pH值，才能進行檢測。

問：可以使用哪些類型的樣本？ 

答：通常，我們的檢測可以用于多種類型的樣本，包括生物、食品、飲料和環(huán)境樣本，前提是存在合適的樣本制備方法。通常，感興趣的分析物應(yīng)為澄清液體或易于提取到澄清液體中，最好是水溶液。

問：在哪里可以找到試劑盒的有效期？ 

答：有效期因具體試劑盒而異。請閱讀檢測協(xié)議或訪問我們的網(wǎng)站（www.bioassaysys.com）并搜索您感興趣的試劑盒。有效期從交付日期開始計算。-yu8fs6b0y4cq6dv4as2t9w8c10ac41dl70c7wf.xn--tlqud5a264gokgt6jr5av7dyfe6578c0h0b./)

問：每次檢測運行是否需要使用標(biāo)準品或標(biāo)準曲線？ 

答：是的，強烈建議使用。

問：你們的一些檢測試劑盒既可以用熒光法也可以用比色法。我應(yīng)該使用哪種方法？ 

答：這取決于您的設(shè)備。熒光檢測通常比比色檢測靈敏度高10倍以上。這意味著如果您使用熒光檢測，可以使用更少的樣本，這在樣本量有限的情況下非常理想。

問：我可以將未使用的試劑儲存起來以備將來使用嗎？ 

答：可以，未使用的試劑可以根據(jù)檢測協(xié)議儲存。應(yīng)避免試劑的反復(fù)凍融循環(huán)。

問：在哪里可以找到使用你們產(chǎn)品的出版物參考文獻？ 

答：引用文獻可以在我們的網(wǎng)站上找到，網(wǎng)址為http://www.bioassaysys.com/support.php。如果您搜索您感興趣的產(chǎn)品，可以點擊“出版物”鏈接查看引用列表。每種產(chǎn)品的引用文獻都會定期更新。

問：什么是檢測限（LOD）？它與定量限（LOQ）有什么區(qū)別？ 

答：在分析化學(xué)中，檢測限（LOD）是指可以與空白值區(qū)分開來的最低物質(zhì)含量。檢測限通常根據(jù)空白值的均值、標(biāo)準偏差和置信因子來估算。通常，LOD定義為3倍空白值的標(biāo)準偏差。定量限（LOQ）的確定方法與LOD類似，但定義為10倍空白值的標(biāo)準偏差。

問：為什么我的讀數(shù)與你們的檢測協(xié)議上的數(shù)據(jù)不同？ 

答：讀數(shù)可能會因多種因素而不同：您的儀器（分光光度計、酶標(biāo)儀）和配件（濾光片或單色器）、板的類型（透明、白色或黑色）及其幾何形狀（圓形孔、方形孔、平底或V形底）以及移液的準確性。因此，強烈建議在每次檢測運行中與樣品一起運行標(biāo)準品。

二、設(shè)備和配件

問：我沒有酶標(biāo)儀，可以用我們的分光光度計和比色皿代替嗎？ 

答：可以。我們的檢測可以在所有使用比色皿的分光光度計或使用微孔板（如96孔板）的酶標(biāo)儀上進行。大多數(shù)檢測可以根據(jù)比色皿、96孔或384孔格式的不同體積進行調(diào)整。

問：如何將微孔板格式的測試數(shù)量轉(zhuǎn)換為比色皿格式？ 

答：轉(zhuǎn)換取決于比色皿的大小和96孔板中檢測的最終體積。例如，對于DICT-500，96孔格式的最終體積為205 μL。對于1 mL比色皿，5個孔相當(dāng)于1個比色皿。因此，1 mL比色皿的檢測次數(shù)為500 ÷ 5 = 100次/試劑盒。或者，如果使用小體積比色皿（例如可容納200 μL體積的比色皿），可以使用與96孔板相同的體積。

問：推薦使用哪種板進行檢測？ 

答：對于比色檢測，使用透明平底板進行光密度（OD）測量。對于熒光檢測，推薦使用黑色板。對于發(fā)光檢測，使用白色不透明板。

問：檢測協(xié)議建議在550-620 nm讀取，但我最接近的濾光片是540 nm。我還能在酶標(biāo)儀上運行檢測嗎？

答：我們通常建議在檢測按規(guī)格工作范圍內(nèi)使用波長。我們不建議在給定范圍外測量，因為檢測的靈敏度通常會降低。在某些情況下，在狹窄的波長范圍外進行準確測量是不可能的。

問：我應(yīng)該使用哪個濾光片來測量發(fā)光？ 

答：使用我們的檢測進行發(fā)光檢測時，不需要使用濾光片。

三、樣本處理

問：我的樣本很渾濁。我還能使用它嗎？ 

答：所有樣本都應(yīng)該是澄清的，沒有沉淀物或顆粒。如果有顆粒，應(yīng)通過離心（例如14,000 rpm離心5分鐘）或通過0.45 μm濾器過濾來去除。

問：我今天不能進行檢測。樣本可以冷凍嗎？ 

答：原則上，建議使用新鮮制備的樣本進行檢測。然而，大多數(shù)分析物在適當(dāng)儲存（例如4°C、-20°C、-80°C或液氮中）時是穩(wěn)定的。

問：我應(yīng)該使用血清樣本還是血漿樣本？ 

答：通常，血清樣本比血漿樣本更受歡迎，因為血清樣本中不含抗凝劑。然而，對于我們的大多數(shù)檢測，可以使用血清或血漿。

問：如果數(shù)據(jù)表中沒有描述，如何為檢測制備細胞和組織樣本？ 

答：樣本制備方法可能因樣本類型和分析物而異。建議查閱相關(guān)文獻。以下是一般指南，適用于大多數(shù)情況：

組織樣本：從20-100 mg組織開始，加入200-1000 μL冰冷的PBS。通過在冰上使用Dounce勻漿器（10-20次）或在冰水浴中進行超聲處理來實現(xiàn)組織裂解?？梢栽陲@微鏡下檢查組織裂解程度。以14,000 g離心10分鐘。將澄清的上清液轉(zhuǎn)移到干凈的管中。最好對不同稀釋度的樣本進行預(yù)測試。選擇讀數(shù)在標(biāo)準曲線檢測范圍內(nèi)的稀釋度進行進一步檢測。大多數(shù)樣本如果未立即檢測，可以儲存在-80°C。

細胞樣本：將約兩百萬（2 × 10^6）收獲的細胞在冰上懸浮在400 μL PBS中。通過在冰上使用Dounce勻漿器（10-20次）或在冰水浴中進行超聲處理來實現(xiàn)細胞裂解?？梢栽陲@微鏡下檢查細胞裂解程度。以14,000 g離心10分鐘。將澄清的上清液轉(zhuǎn)移到干凈的管中。最好對不同稀釋度的樣本進行預(yù)測試。選擇讀數(shù)在標(biāo)準曲線線性范圍內(nèi)的稀釋度進行進一步檢測。大多數(shù)樣本如果未立即檢測，可以儲存在-80°C。

如果要使用裂解緩沖液，建議先進行檢測以測試裂解緩沖液中的成分是否干擾檢測。這可以通過運行兩個標(biāo)準曲線來實現(xiàn)：一個在H2O（或數(shù)據(jù)表要求的緩沖液）中制備，另一個在與樣本相同比例的裂解緩沖液中制備。如果兩個標(biāo)準曲線相同，則沒有干擾，可以安全使用裂解緩沖液。如果標(biāo)準曲線有差異，仍然可以使用裂解緩沖液，前提是標(biāo)準曲線保持線性；然而，用于分析裂解樣本的標(biāo)準曲線需要在裂解緩沖液中制備。

問：我應(yīng)該使用多少樣本進行檢測？ 

答：對于未知樣本，應(yīng)進行預(yù)測試以評估最佳稀釋度。制備樣本的系列稀釋，并選擇讀數(shù)在檢測范圍內(nèi)的稀釋度（理想情況下在標(biāo)準曲線的中間）。然后按此稀釋因子稀釋樣本并重新運行檢測，將結(jié)果乘以稀釋因子。

四、訂購、運輸、接收和儲存

問：你們的產(chǎn)品是冰運的嗎？ 

答：有些產(chǎn)品在室溫下運輸，而有些產(chǎn)品則在冰墊或干冰上運輸（這適用于目錄編號以字母“E”開頭的試劑盒，例如ETGA-100）。

問：我們?nèi)绾螐膰赓徺I你們的產(chǎn)品？ 

答：我們建議您聯(lián)系您所在國家或附近的國家的分銷商（http://www.bioassaysys.com/distributors.php）。如果您的國家未列出，您可以直接從我們這里訂購。請在下訂單前聯(lián)系我們（info@bioassaysys.com）。

問：我收到試劑盒后應(yīng)該做什么？

答：立即打開試劑盒并確定適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件。請參考檢測協(xié)議中的“試劑盒內(nèi)容”下的“儲存條件”。相應(yīng)地儲存試劑盒組件。

【缺氧探針】Hypoxyprobe正確使用 FAQs

常見問題解答（FAQs）：

注：Pimonidazole：吡莫硝唑

1.問：什么是 pimonidazole HCl（Hypoxyprobe-1）的最佳溶劑？

答：pimonidazole HCl 是弱堿 pimonidazole 的鹽酸鹽，在水溶液中非常易溶，包括中性緩沖鹽水（116 mg/mL 或 400 mmol）。這允許在動物研究中使用小體積（0.1-0.5 mL）進行腹腔內(nèi)或靜脈注射 pimonidazole HCl。

2.問：用于缺氧標(biāo)記的 pimonidazole HCl 劑量應(yīng)該是多少？

答：pimonidazole HCl 在缺氧組織中的結(jié)合程度將取決于生物還原激活的速率以及組織對 pimonidazole HCl 的接觸程度（接觸 = 濃度 x 時間）。還原代謝的速率很難預(yù)測，但可以檢查接觸的影響。在以下計算中，濃度以 pimonidazole HCl（分子量 290.7）為單位給出。

體外接觸于 58mg/kg（培養(yǎng)基中的濃度）1 小時的球狀體觀察到強烈的缺氧染色。接觸 = 58mg/kg x 1 小時 = 58mg/kg-小時。

在人體中，使用 0.5gm/m²（約 14mg/kg）的劑量可以獲得腫瘤組織和正常上皮中的強染色，其中 pimonidazole 的血漿半衰期為 5 小時。接觸 = 14 mg/kg x 5 小時 = 70 mg/kg-小時。

在小鼠腫瘤組織中，使用 60 mg/kg 可以獲得缺氧的強染色，其中 pimonidazole 的血漿半衰期為 0.25 小時。接觸 = 60mg/kg x 0.25 小時 = 15 mg/kg-小時。

總結(jié)來說，對于體型統(tǒng)一的小動物，如實驗室大鼠和小鼠，推薦使用 60 mg/kg 體重的 pimonidazole HCl 劑量，這是效果和經(jīng)濟性之間的良好平衡。在小鼠和大鼠中使用了 30 mg/kg 至 400 mg/kg 的劑量，沒有毒性或由于血流效應(yīng)導(dǎo)致的氧氣水平改變，但使用超過 100 mg/kg 的 pimonidazole 劑量時，觀察到在小鼠后腿植入的腫瘤中出現(xiàn)血流效應(yīng)。因此，在使用后腿腫瘤模型時，劑量 > 100 mg/kg 必須小心。對于體型不均勻的較大動物，劑量通?；诒砻娣e計算。對于人類，推薦劑量為 0.5 gm/m2，而狗的使用劑量為 0.28 gm/m2。

3.問：Hypoxyprobe-1 是否能穿透缺氧的大腦和腦腫瘤組織？

答：盡管 Hypoxyprobe-1 是水溶性的，但其相應(yīng)的游離堿（pimoindazole）具有 8.5 的辛醇-水分配系數(shù)，因此該標(biāo)記物可以自由穿透大腦和腦腫瘤組織。

大鼠腦腫瘤冰凍切片的免疫熒光染色。大鼠腦腫瘤冰凍切片的免疫熒光染色。血管：ME 9F1；紅色。缺氧：Pimonidazole 加合物；綠色。灌注：Hoechst 33342；藍色。正常大腦（N）和腫瘤組織（T）。原始放大倍數(shù)為 x 200。注意正常大腦中血管的規(guī)則模式與腫瘤組織中血管的無序排列（Bernsen et al, Journal of Neurosurgery 93: 449-454, 2000; by permission）。

4.問：pimonidazole HCl 是檢測體內(nèi)缺氧的最佳探針嗎？

答：pimonidazole HCl，即“金標(biāo)準”免疫組化缺氧標(biāo)記物，具有真正的優(yōu)勢，包括高水溶性（在鹽水中為 116 mg/mL），允許以小體積注射 ip 或 iv 給藥。像六氟化 CCI-103F 這樣的標(biāo)記物水溶性為 10 毫摩爾或更低，通常作為 ip 花生油和 DMSO 的乳液給藥，以避免血液稀釋。

固體 pimonidazole HCl 在室溫或 4°C 下非常穩(wěn)定（多年）。在 4°C 下避光保存的 pimonidazole HCl 濃縮水溶液也非常穩(wěn)定（多年）。小鼠和兔子對 pimonidazole 加合物的抗體在 4°C 下保存至少一年穩(wěn)定。

小鼠中 pimonidazole 的 LD50(7天) 為 728 mg/kg，將其歸類為低毒性的非危險品。

盡管 pimonidazole HCl 非常水溶性，但作為游離堿的 pimonidazole 具有 8.5 的高辛醇-水分配系數(shù)，并且容易穿透所有組織，包括大腦。實際上，它在大多數(shù)組織中的積累比血漿水平高 3 倍，使其有效的組織濃度遠高于其他 2-硝基咪唑缺氧標(biāo)記物。

Pimonidazole 的結(jié)合可以通過多種技術(shù)檢測，包括：冷凍固定組織切片中的免疫熒光；福爾馬林固定石蠟包埋組織切片中的免疫過氧化物酶染色；ELISA；或流式細胞術(shù)。

5.問：單克隆抗體對 pimonidazole 加合物是否可以用于小鼠組織？

答：是的。對于福爾馬林固定石蠟包埋的組織，我們推薦使用過氧化物酶 F(ab)2 二級抗體策略（見產(chǎn)品手冊），它提供了非常干凈的背景，適用于多種動物物種。

6.問：pimonidazole HCl 激活和結(jié)合到缺氧細胞的機制是什么？

答：Varghese et al.表明，缺氧細胞將 2-硝基咪唑結(jié)合到肽硫醇，如谷胱甘肽。目前對 pimonidazole 代謝的看法總結(jié)在下面的方案中。O₂ 與 pimonidazole 的第一個電子的添加競爭，這解釋了激活和結(jié)合的 pO2 依賴性。根據(jù)試管實驗，估計大約 20% 的活化 pimonidazole 結(jié)合到細胞硫醇上，大約 80% 不結(jié)合但通過與水的反應(yīng)而斷裂。Pimonidazole 受氧化代謝的影響，導(dǎo)致容易排泄的 N-氧化物、硫酸鹽和葡萄糖醛酸衍生物（ST = 硫酸轉(zhuǎn)移酶；GT = 葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶）。這些氧化途徑似乎不影響 pimonidazole 作為缺氧標(biāo)記物的效用。

7.問：Hypoxyprobe 試劑盒中提供的 IgG1 抗體濃度是多少？

答：Hypoxyprobe-1 試劑盒中提供的耗盡雜交瘤溶液中小鼠 IgG1 單克隆抗體的濃度約為 60 ug/mL。

Hypoxyprobe-1 Plus 試劑盒中的 FITC 偶聯(lián) MAb；Hypoxprobe-1 Green 試劑盒；Hypoxyprobe-1 Red549 試劑盒；Hypoxyprobe-1 RedAPC 試劑盒；和 Hypoxyprobe-1 Biotin 試劑盒中的親和純化 IgG1 的濃度約為 500 ug/mL。

親和純化的兔子抗血清對 pimonidazole 加合物和未純化的兔子抗血清對 Hypoxyprobe-F6（CCI-103F）加合物中的活性 IgG 分子的濃度未知。

8.問：pimonidazole 結(jié)合是否能檢測慢性和急性缺氧？

答：在固體組織中發(fā)生兩類缺氧 - 擴散限制的慢性缺氧和灌注限制的急性缺氧。慢性缺氧出現(xiàn)在由靠近血管的細胞消耗氧氣而產(chǎn)生的氧梯度的遠端，腫瘤的情況是由血管樹中的 pO2 縱向梯度引起的局部氧氣供應(yīng)不足而加劇的（ Dewhirst et al., Temporal changes in pO2 of R3230AC tumors in Fischer-344 rats, Int J Radiat Oncol Biol Phys 42: 723-726, 1998）。慢性缺氧的存在意味著組織中的細胞以與氧氣供應(yīng)無關(guān)的速率消耗氧氣，從而在遠離血管的微小區(qū)域?qū)?pO2 推向非常低的水平。也就是說，大多數(shù)細胞具有“調(diào)節(jié)”的細胞表型特征，通過平穩(wěn)過渡到基于糖酵解的能量產(chǎn)生而適應(yīng)低 pO2（Dewhirst et al., Temporal changes in pO2 of R3230AC tumors in Fischer-344 rats, Int J Radiat Oncol Biol Phys 42: 723-726, 1998）。

與具有靜態(tài)、代謝控制的 pO2 梯度的慢性缺氧相比，急性缺氧與由血流不穩(wěn)定性引起的 pO2 波動相關(guān)，腫瘤的情況是由短暫的血管阻塞造成的。急性缺氧的腫瘤細胞，由于是增殖的，可能比靜止的、慢性缺氧的細胞在治療上更相關(guān)。在正常組織中，波動的缺氧與缺氧再灌注損傷相關(guān)。關(guān)于 pimonidazole 是否能檢測到慢性和急性缺氧，結(jié)合弱堿性取代基（pKa ≥ 8.0）的化合物在組織中濃縮約 3 倍于循環(huán)血水平。弱堿性化合物的這種性質(zhì)是基于細胞內(nèi)外 pH 差異對弱堿性化合物細胞內(nèi)濃度的影響。特別是，在 pH 7.4 時，弱堿性 2-硝基咪唑在細胞內(nèi)的濃度比細胞外濃度高 2 倍。這種濃度增加直接反映在缺氧細胞的放射增敏和用缺氧標(biāo)記物標(biāo)記的增加上。因為經(jīng)歷波動缺氧的細胞靠近血管并且 pH 相對較高，弱堿性、2-硝基咪唑缺氧標(biāo)記物如 pimonidazole 在這些細胞中濃縮，因此急性缺氧發(fā)作導(dǎo)致與缺乏弱堿性官能團的缺氧標(biāo)記物相比，結(jié)合水平更高。通過這種方式，pimonidazole 及其類似物在檢測急性缺氧方面更優(yōu)越（Kleiter, et al. A comparison of oral and intravenous pimonidazole in canine tumors using intravenous CCI-103F as a control hypoxia marker. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 64: 592-602, 2006 for further discussion and literature cited）。

9.問：在 pimonidazole HCl 給藥后多久可以收獲感興趣的組織？

答：在收獲過程中組織變得缺氧，循環(huán)中的 pimonidazole 結(jié)合可能會在原則上給出缺氧的錯誤測量。答案在于比較標(biāo)記和收獲期間組織對 pimonidazole 的接觸程度。接觸（pimonidazole 濃度 x 37°C 下的時間）在標(biāo)記期間很大，在收獲期間非常短，因為 pimonidazole 濃度限于收獲時組織中的濃度。低標(biāo)記濃度、快速收獲和立即在冷介質(zhì)中固定將消除可測量的非特異性結(jié)合水平。

在人類腫瘤研究中，活檢通常在 pimonidazole HCl 輸注后 16-24 小時進行。人類中 pimonidazole 的血漿半衰期約為 5 小時，因此 16 到 24 小時代表循環(huán) pimonidazole 的 3 到 5 個血漿半衰期。這意味著在收獲時 pimonidazole 的初始濃度為 1/8 到 1/32。這與活檢材料快速轉(zhuǎn)移到冷固定劑相結(jié)合，最小化了非特異性 pimonidazole 結(jié)合，如大多數(shù)靠近血管的細胞的低背景結(jié)合所示。

在一些人類腫瘤研究中，活檢在 pimonidazole HCl 輸注后 1.5 到 4 小時進行，并立即在液氮中固定。這種方法也給出了靠近血管的細胞的低背景結(jié)合。盡管在輸注后 1.5 到 4 小時循環(huán)中的 pimonidazole 水平相對較高，但收獲的組織中對 pimonidazole 的接觸與體內(nèi)標(biāo)記期間對 pimonidazole 的接觸相比非常短。

人類腫瘤的經(jīng)驗可以指導(dǎo)實驗研究。小鼠中 pimonidazole 的血漿半衰期通常為 0.25 小時。在這種情況下，收獲時間為 1-2 小時，與快速加入冷固定劑相結(jié)合，有效地消除了非特異性結(jié)合。這一結(jié)論對于涉及二氧化碳窒息的實驗尤為重要，因為全局缺氧的持續(xù)時間定義不清。更快速的安樂死技術(shù)適用于較短的收獲時間，只要進行快速組織收獲并在冷固定劑中固定。

10.問：為什么將 pO2 閾值 ≤ 10 mmHg 設(shè)置為 pimonidazole 結(jié)合的基礎(chǔ)？

答：在固體組織中測量 2-硝基咪唑結(jié)合的 Km(O2) 是困難的。迄今為止最好的實驗是 Gross 等人。在固體組織球狀體模型中，通過放射自顯影測量放射性標(biāo)記的 misonidazole 結(jié)合，與氧微電極測量的 pO2 進行比較。由于 misonidazole 結(jié)合導(dǎo)致的顆粒密度在 10 mm Hg 以下急劇增加（Gross et al. Calibration of misonidazole labeling by simultaneous measurement of oxygen tension and labeling density in multicellular spheroids, Int. J. Cancer 61: 567-573, 1995）。Chou 等人發(fā)現(xiàn) pimonidazole 結(jié)合的 Km(O2) 與 HeLa 細胞中的 misonidazole 類似，并得出結(jié)論，10 mm Hg 也是固體組織中 pimonidazole 結(jié)合的合理閾值（Chou et al. Evidence that involucrin, a marker for differentiation, is oxygen regulated in human squamous cell carcinomas. Br. J. Cancer, 90: 728-735, 2004）。

固體組織的一個特征在稀疏的細胞培養(yǎng)中是不存在的，即氧氣消耗創(chuàng)造了非常陡峭的 O₂ 梯度，以至于不同 Km(O₂₎ 被穿越的距離被縮短。例如，在肝組織中觀察到陡峭的 pO2 梯度，其中 pimonidazole 加合物的免疫染色從背景到強烈染色僅跨越幾個細胞直徑。與組織中存在陡峭的 pO2 梯度一致的是，氧氣調(diào)節(jié)蛋白如 involucrin 和碳ic anhydrase IX 的免疫染色模式與 pimonidazole 結(jié)合的模式非常相似，盡管氧氣調(diào)節(jié)蛋白的 Km(O₂) 約為 15 mm Hg，而體外 pimonidazole 結(jié)合的 Km(O₂) 為 2-4 mm Hg（Chou et al. Evidence that involucrin, a marker for differentiation, is oxygen regulated in human squamous cell carcinomas. Br. J. Cancer, 90: 728-735, 2004 for further discussion）。

11.問：關(guān)于小鼠中 pimonidazole 藥代動力學(xué)有哪些已知信息？

答：

1. Stratford et al. Pharmacokinetic studies of some novel (2-nitro-1-imidazolyl) propanolamine radiosensitizers. In: A. Breccia, C. Rimondi, and G. E. Adams (eds.), Advanced Topics on Radiosensitization of Hypoxic Cells, pp. 165-169. New York: Plenum, 1982.

2. Williams et al. In vivo assessment of basic 2-nitroimidazole radiosensitizers. Br J Cancer, 46: 127-137, 1982.

3. Walton et al. The reversible N-oxidation of the nitroimidazole radiosensitizer Ro 03- 8799. Biochem Pharmacol, 34: 3939-3940, 1985.

4. Walton et al. The effects of whole body hyperthermia on the pharmacokinetics and toxicity of the basic 2-nitroimidazole radiosensitizer Ro 03-8799 in mice. Br J Cancer, 55: 469-476, 1987.

5. Walton et al. Effects of localised tumour hyperthermia on pimonidazole (Ro 03-8799) pharmacokinetics in mice. Br J Cancer, 59: 667-673, 1989.

6. Workman, P. Accelerated elimination of pimonidazole following microsomal enzyme induction in mice: a possible approach to reduced neurotoxicity of the pimonidazole-etanidazole combination. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 16: 1011-1014, 1989.

12.問：體內(nèi) N-氧化是否會影響 pimonidazole 作為缺氧標(biāo)記物？

答：pimonidazole 中的哌啶基團很容易被氧化成其 N-氧化物代謝物。原則上，這可能會影響 pimonidazole 作為缺氧標(biāo)記物的有效性。（Arteel et al. Reductive metabolism of the hypoxia marker pimonidazole is regulated by oxygen tension independent of the pyridine nucleotide redox state. Eur J Biochem, 253: 743-750, 1998 for a detailed discussion of the metabolism of pimonidazole）。在體內(nèi)，pimonidazole N-氧化物是通過黃素單加氧酶（FMO）的作用形成的。FMO 同工酶的分布因物種而異，產(chǎn)生不同的 N-氧化物血漿水平。有趣的是，pimonidazole 給藥的途徑（iv 或口服）對 N-氧化物的血漿水平影響很小（Kleiter et al. A comparison of oral and intravenous pimonidazole in canine tumors using intravenous CCI-103F as a control hypoxia marker. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 64: 592-602, 2006 for further discussion）。像過氧亞硝酸鹽這樣的強氧化劑，由超氧陰離子與一氧化氮（NO）反應(yīng)形成，也可以氧化 pimonidazole。然而，N-氧化物的形成似乎并沒有損害 pimonidazole 作為缺氧標(biāo)記物的有效性。

首先，N-氧化物的形成可以通過血液中的血紅蛋白-鐵復(fù)合物的還原作用以及組織還酶如黃嘌呤脫氫酶和還原型細胞色素 P-450 來逆轉(zhuǎn)，從而限制了 pimonidazole 因氧化而丟失（Walton et al. The reversible N-oxidation of the nitroimidazole radiosensitizer Ro 03- 8799. Biochem Pharmacol, 34: 3939-3940, 1985）。

其次，通過使用第二種缺氧標(biāo)記物，已經(jīng)表明 pimonidazole 標(biāo)記的缺氧程度與推薦用于缺氧標(biāo)記的 pimonidazole 血漿濃度無關(guān)。

第三，因為 pimonidazole 及其 N-氧化物衍生物對 anti-pimonidazole 抗體沒有交叉反應(yīng)性，N-氧化物不會干擾缺氧組織中 pimonidazole 加合物的檢測（Kleiter et al. A comparison of oral and intravenous pimonidazole in canine tumors using intravenous CCI-103F as a control hypoxia marker. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 64: 592-602, 2006 for further discussion）。

13.問：如果 pimonidazole 染色模式似乎與組織缺氧不一致怎么辦？

答：到目前為止，pimonidazole 加合物的免疫染色模式通常與組織缺氧的存在一致。然而，英國病理學(xué)家 Leon Cobb 曾經(jīng)質(zhì)疑，例如肝臟中心區(qū)域的高濃度硝基還原酶是否可能壓倒 pimonidazole 結(jié)合的氧氣抑制，并導(dǎo)致對該區(qū)域缺氧存在的錯誤的結(jié)論。我們通過檢查大鼠肝臟中心區(qū)域在正常（順行）和反向（逆行）灌注中 pimonidazole 的結(jié)合來應(yīng)對這一重要挑戰(zhàn)（Arteel et al. Evidence that hypoxia markers detect oxygen gradients in liver: pimonidazole and retrograde perfusion of rat liver. Br J Cancer, 72: 889-895, 1995）。逆行灌注導(dǎo)致中心靜脈周圍的肝臟區(qū)域氧化，而門靜脈周圍的區(qū)域缺氧。如果中心區(qū)域的高濃度氧化還原酶導(dǎo)致 pimoindazole 在氧氣存在下結(jié)合，那么我們將期望在逆行灌注期間看到中心區(qū)域高水平的 pimonidazole 結(jié)合。實際上，逆行灌注將 pimonidazole 結(jié)合從氧化的中心區(qū)域轉(zhuǎn)移到現(xiàn)在缺氧的門靜脈周圍區(qū)域，明確表明中心區(qū)域的高濃度細胞色素氧化還原酶本身并不取消 pimonidazole 結(jié)合的氧氣抑制。這一概括的一個有趣的例外是圍繞中心靜脈的單層細胞。導(dǎo)致這些細胞在氧氣存在下 pimonidazole 結(jié)合的生物化學(xué)仍然是一個謎?？赡苁撬鼈兙哂邢趸€原酶，有效地將還原當(dāng)量（電子，氫化物離子）轉(zhuǎn)移給硝基咪唑缺氧標(biāo)記物，通過兩個電子步驟，分子氧不能攔截它們。“二氫吡啶”就是這樣一種酶，研究者在進入新領(lǐng)域時必須注意這一警告，關(guān)于 pimonidazole 結(jié)合。可以想象，例如，炎癥細胞可以在沒有組織缺氧的情況下結(jié)合 pimonidazole。首先，炎癥細胞可以具有以對氧氣不敏感的方式減少 pimonidazole 的硝基還原酶。此外，炎癥細胞可以以足夠高的速度消耗氧氣以產(chǎn)生細胞內(nèi)缺氧。在未標(biāo)記細胞的海洋中標(biāo)記的單個炎癥細胞肯定會引起人們對標(biāo)記細胞是否缺氧的擔(dān)憂。

與 Cobb 的擔(dān)憂類似，一些研究者詢問，將細胞驅(qū)動到還原狀態(tài)的高濃度 NADH 和 NADPH 是否可能取消 pimonidazole 結(jié)合的氧氣抑制。答案再次是，不，在推薦的用于缺氧標(biāo)記研究的 pimonidazole 濃度下（Arteel et al. Reductive metabolism of the hypoxia marker pimonidazole is regulated by oxygen tension independent of the pyridine nucleotide redox state. Eur. J. Biochem., 253: 743-750, 1998）。

一般來說，當(dāng) pimonidazole 結(jié)合的機制受到質(zhì)疑時，有意識地操縱感興趣的組織的缺氧是有用的。一種技術(shù)是讓動物在 pimonidazole 接觸期間呼吸 10% 的氧氣。如果 pimonidazole 結(jié)合的程度超過了在空氣中呼吸的動物，那么很可能缺氧是 pimonidazole 結(jié)合的原因。Parliament 及其同事在研究 misonidazole（pimonidazole 的密切相關(guān)類似物）的組織缺氧時利用了這種方法（Parliament et al. Nitroimidazole adducts as markers for tissue hypoxia: mechanistic studies in aerobic normal tissues and tumour cells. Br. J. Cancer, 66: 1103-1108, 1992）。使用“二氫吡啶”抑制劑，他們證明 misonidazole 的結(jié)合并非由于氧氣不敏感的“二氫吡啶”型硝基還原酶的存在。同樣，當(dāng)通過氧氣呼吸、碳酸氫鹽呼吸、肼屈嗪注射或組織夾閉有意識地操縱腫瘤缺氧時，觀察到 pimonidazole 結(jié)合和氧微電極測量之間有很好的相關(guān)性（r² = 0.85）（Raleigh et al. Comparisons among pimonidazole binding, oxygen electrode measurements, and radiation response in C3H mouse tumors. Radiat Res, 151: 580-589, 1999）。

還可以使用雙重標(biāo)記方法（見 Hypoxyprobe Gemini Kit）來檢測改變組織 pO2 的干預(yù)措施之前和之后的單個組織中的變化。Van der Kogel 及其在尼姆根的團隊在動物腫瘤中使用這兩種標(biāo)記物，pimonidazole pimonidazole HCl（Hypoxyprobe-1）和 CCI-103F（Hypoxyprobe-F6（Ljungkvist et al. Changes in tumor hypoxia measured with a double hypoxic marker technique. Int J Radiat Oncol Biol Phys, 48: 1529-1538, 2000）。

GERBU公司在原材料采購和制造領(lǐng)域有超過25年的豐富經(jīng)驗。GERBU提供廣泛的精細化學(xué)品，生物試劑，緩沖液，洗滌劑，介質(zhì)等。例如ACES、AEBSF、白蛋白、氨芐青霉素、抗生物素蛋白、DTT、甘氨酸、HEPES、IPTG、煙酰胺衍生物等。GERBU完美的生物相容性佐劑已經(jīng)越來越成為單克隆和多克隆抗體生產(chǎn)的標(biāo)準。

以下為GERBU佐劑的一些常見問題解答：

混合抗原肽FAQ:

Question：抗原-佐劑混合物是如何制備的?

Answer：將抗原溶液與佐劑按1:1的體積比加入無菌試劑瓶中，搖勻。避免泡沫形成。每只動物使用一根單獨的無菌針。

Question：注射的最佳pH值是多少?

Answer：GERBU佐劑的pH值范圍為5.6 - 5.8。推薦注射pH值為7.0-7.3。

Question：推薦使用哪些緩沖液?

Answer：我們推薦10 ~ 25 mM (pH = 7.3)范圍內(nèi)的Tris作為緩沖液。確切的濃度取決于蛋白質(zhì)(抗原性)。

Question：根據(jù)說明書，應(yīng)避免使用多價緩沖液(磷酸鹽/檸檬酸鹽)。助劑會絮凝嗎?

Answer：如果可能的話，使用水(去礦化水)來稀釋抗原。聚陰離子化合物會導(dǎo)致沉淀。如果不可避免，使用盡可能少的PBS。注射前請確保抗原/佐劑混合物沒有凝固。

Question：我的抗原是稀溶的。你推薦哪種溶劑?

Answer：乙醇。將不溶于水的抗原溶解在乙醇中。然后用合適的水緩沖體系將乙醇預(yù)溶液緩慢稀釋至10倍體積，再與佐劑配制成1:1的混合物。請不要超過5%乙醇的終濃度。

Question：哪些添加劑和溶劑不應(yīng)該使用?

Answer：我們強烈建議不要注射變性劑(如SDS，尿素)和螯合劑(如EDTA)，以及大分子緩沖物質(zhì)(如HEPES)。

抗原特性FAQ

Question：蛋白質(zhì)復(fù)合物的非共價鍵被破壞了嗎?

Answer：蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)不受影響。通過這種方式，可以保留功能并相應(yīng)呈現(xiàn)特定的表位。

Question：GERBU佐劑是否與細胞或DNA作為抗原混合?

Answer：您可以將GERBU佐劑與DNA或任何質(zhì)?；旌?。

Question：是否有將牛血清白蛋白溶解為抗原的處方?當(dāng)必須使用弱抗原性的小分子進行免疫時，GERBU佐劑是否適合作為BSA的載體蛋白?

Answer：BSA作為小分子載體，增強抗原的抗原性和小分子表位的呈現(xiàn)。將500 mg粉狀牛血清白蛋白溶于0.5 ml水(50% w / v)中，或350 mg牛血清白蛋白溶于0.65 ml 0.85% NaCl (35% w / v)中，配制成透明可給藥的混合物。在免疫過程中，事先將這些溶液與GERBU佐劑直接按1:1的體積比混合。

Question：對于抗原性較弱的抗原，如何改進檢測結(jié)果?

Answer：弱抗原比強抗原需要更有效的免疫啟動物。但免疫時使用的抗原劑量不宜過高，以免宿主動物對抗原產(chǎn)生免疫耐受。建議更頻繁地加強注射。

Question：有關(guān)于蛋白質(zhì)結(jié)合能力的信息嗎?

Answer：具體問題請聯(lián)系技術(shù)支持。

注射FAQ

Question：免疫過程是如何進行的?

Answer：將免疫懸液置于室溫或體溫(20°C至37°C)。確保它不含任何大顆粒。使用無菌注射設(shè)備，將劑量緩慢地注入每個免疫部位。該應(yīng)用是皮下實施到皮下脂肪組織。如果可能的話，在個體上形成一個皮膚褶皺，以便在那里注射。請按照相應(yīng)的使用說明注射部位的數(shù)量和各自的最大體積。

Question：幼齡動物可以服用多少劑量?

Answer：根據(jù)方案與其他動物進行體重比較。

Question：也可以肌肉注射嗎?

Answer：肌肉內(nèi)注射通常是耐受良好的，但我們不建議這樣做，因為它會給動物帶來更多的壓力。雞可能會停止下蛋。

Question：為什么不靜脈注射GERBU佐劑?

Answer：靜脈注射違反了動物福利法。它不會提高整體效率。

Question：注射部位是否有免疫反應(yīng)?

Answer：復(fù)合疫苗的作用可能有延遲效應(yīng)，短期免疫原性反應(yīng)是可能的。佐劑建立了一個倉庫，并在皮膚下保持可見的短時間。

保質(zhì)期FAQ

Question：GERBU佐劑保存在冰箱(4-8°C)中，原始包裝未打開。在那里，可以看到細小的沉淀和凝集，并且看起來很粘稠。這個產(chǎn)品還可以注射嗎?

Answer：GERBU佐劑自生產(chǎn)之日起穩(wěn)定3年(2-8°C)。如果GERBU佐劑在不攪拌的情況下長時間存放在陰涼的地方，成分可能會分離和結(jié)晶。這對產(chǎn)品質(zhì)量沒有影響。一旦被帶到室溫和充分混合，得到均勻的懸浮液。

Question：GERBU佐劑在第一次收集后的保質(zhì)期是多長?

Answer：在冰箱無菌條件下存放至少1/2年。

Question：佐劑-抗原混合物呈泡沫狀/沉淀狀/塊狀。它還能被使用嗎?

Answer：不，因為期望的抗原性不再存在。此外，動物可能會受到傷害。

Question：GERBU佐劑與抗原混合后，這種乳劑在什么條件下可以保存多久?

Answer：當(dāng)佐劑與抗原混合時，應(yīng)直接注射乳劑。如果抗原穩(wěn)定，乳劑可在室溫下保存3個月。抗原/佐劑混合物的穩(wěn)定性取決于抗原和緩沖液的性質(zhì)。

與其它佐劑的比較FAQ

Question：GERBU佐劑的處理是否與弗氏佐劑(FCA/FIA)相當(dāng)?

Answer：使用GERBU佐劑時，不需要用兩支注射器制備乳劑。兩種情況下抗原/佐劑的混合比例均為1:1。詳細說明請參閱協(xié)議。

Question：不同品種的GERBU佐劑的批號是否存在差異?也就是說，不同批次在體內(nèi)產(chǎn)生抗體的速率不同嗎?

Answer：生產(chǎn)過程按GMP規(guī)范進行。所有的GERBU佐劑批號都要經(jīng)過內(nèi)部質(zhì)量控制。檢查佐劑的具體參數(shù)是否在規(guī)定范圍內(nèi)。特異性抗體滴度的產(chǎn)生不依賴于GERBU佐劑的特定批號?？贵w的產(chǎn)生總是取決于動物的體質(zhì)和所用抗原的性質(zhì)。

Question：我之前使用的是GERBU佐劑10/100 / LQ。為什么它不再可用?

Answer：當(dāng)時的配方差別不大，主要在于包裝尺寸。我們進一步改進了配方，將三種產(chǎn)品合二為一。今天它被稱為佐劑P。

Question：我之前用了不同的佐劑?，F(xiàn)在我想切換到GERBU。我可以簡單地繼續(xù)給動物注射GERBU佐劑嗎?

Answer：使用不同的佐劑系統(tǒng)會以意想不到的方式影響結(jié)果和動物的狀況。我們建議在更換佐劑之前暫停注射一段適當(dāng)?shù)臅r間，以使動物的免疫系統(tǒng)有時間再生。但在短期實驗中，無論如何不應(yīng)改變佐劑。

特定應(yīng)用FAQ

Question：通常會生成哪個抗體子類?

Answer：原則上，所有的抗體亞類都可以產(chǎn)生。實驗裝置必須作相應(yīng)的調(diào)整。

Question：GERBU佐劑適合體外應(yīng)用嗎?

Answer：根據(jù)我們的經(jīng)驗，GERBU佐劑適用于產(chǎn)生重組抗體、嵌合抗體、合成抗體等。

Question：在體內(nèi)使用GERBU佐劑是否可能在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生高質(zhì)量和足夠數(shù)量的針對天然表位的單克隆和多克隆抗體?

Answer：可以與活性物質(zhì)(靶標(biāo))結(jié)合的生物分子類型和所使用的免疫原的三級/四級結(jié)構(gòu)對免疫反應(yīng)有很大影響，即抗原的三維形狀及其復(fù)雜結(jié)構(gòu)非常重要。

Question：我想使用GERBU佐劑進行商業(yè)抗體生產(chǎn)。除了產(chǎn)品價格外，我還需要支付許可費嗎?

Answer：GERBU佐劑是為商業(yè)用途而開發(fā)的。沒有額外的許可費。

Synaptic Systems（SySy）品牌成立于德國，專注于研發(fā)和生產(chǎn)針對突觸和神經(jīng)科學(xué)相關(guān)抗體，以及用于細胞生物學(xué)、組織病理學(xué)和高分辨率顯微鏡的各種抗體，除此之外，還推出與SySy抗體配套使用的試劑盒、試劑等產(chǎn)品組合，全方面滿足客戶的各種需求?？贵w產(chǎn)品線主要有：突觸活性區(qū)域相關(guān)抗體、突觸后蛋白相關(guān)抗體、RNA修飾如m6A抗體、突觸粘附蛋白抗體、SNARE相關(guān)抗體、Alzheimer's相關(guān)抗體、細胞骨架、離子通道相關(guān)抗體等。

那么接下來為各位同學(xué)整理出常見問題，希望這能幫到您。（重組以及儲存）

1. 我應(yīng)該如何重組抗體?

我們所有純化的抗體都是從PBS中凍干的。

所以這也就解釋了為什么好多同學(xué)疑問：我加了水以后到底是PBS溶液，還是正常溶液。

①為了在PBS中重組抗體，加入說明書中給出的去離子水的量。

所有的抗體都是在PBS中凍干，加了水，也就變成了PBS溶液，加水復(fù)溶到對應(yīng)濃度即可，然后分裝保存避免反復(fù)凍融~

如果需要更大的體積，按上述方法加水，然后加入所需量的PBS和穩(wěn)定載體蛋白(如BSA)至最終濃度為2%。

注：由于一些抗體已經(jīng)含有白蛋白。在添加更多的載體蛋白時要考慮到這一點。

②如果需要，添加少量疊氮化物或硫柳汞，以防止微生物生長。如果你想保持4°C的溫度儲存，特別建議這樣做！

③重組熒光標(biāo)記抗體后，加入1:1 (v/v)的甘油至終濃度為50%。這降低了你的抗體的凝固點，使你的抗體在-20°C時保持液態(tài)。

注：甘油也可以添加到未標(biāo)記的一抗中。這是一種避免凍融循環(huán)的合適方法。

2. 我應(yīng)該如何儲存抗體?

收到抗體時：

我們所有的抗體和對照蛋白/肽都是凍干(真空冷凍干燥)粉末運輸?shù)模诃h(huán)境溫度下保持穩(wěn)定，幾周內(nèi)不會損失質(zhì)量。

①未標(biāo)記和生物素標(biāo)記的抗體和對照蛋白在重組前應(yīng)保存在4°C。當(dāng)它們還在凍干狀態(tài)時，千萬不要儲存在冰箱里! 溫度低于0°C可能會導(dǎo)致性能下降。

②收到熒光標(biāo)記抗體后應(yīng)立即重組。長期儲存(幾個月)可能導(dǎo)致聚集。

③對照肽重組前，應(yīng)保存在-20°C。

重組后的長期儲存(一般考慮)

①儲存冷凍室不能是無霜(“無霜冷凍室”)：這種凍結(jié)和解凍之間的循環(huán)(以減少結(jié)霜)，正是應(yīng)該避免的。出于同樣的原因，抗體小瓶應(yīng)放在冷凍室溫度波動最小的區(qū)域，例如靠后而不是放在門架上。

②將抗體等分，并冷凍保存(-20°C至-80°C)：避免非常小的等分(低于20ul)，并使用盡可能小的儲存瓶或管。等分越小，抗體在儲存瓶或管表面的蒸發(fā)和吸附對儲存液濃度的影響越大。

注：抗體在表面的吸附會導(dǎo)致活性的大量喪失。

③將甘油添加到最終濃度為50%時，并將抗體保持在-20°C的液態(tài)。這有效地避免了凍結(jié)和解凍循環(huán)。

產(chǎn)品存儲的具體提示

Control proteins / peptides

儲存于-20°C~ -80°C

Monoclonal Antibodies

Ascites和hybridoma supernatant應(yīng)保存在-20°C ~ -80°C。

不建議在4°C下長時間儲存! 與血清不同，腹水可能含有蛋白酶，可降解抗體。
Purified IgG應(yīng)保存在-20°C~ -80°C。添加像BSA這樣的載體蛋白會增加長期穩(wěn)定性。我們的許多抗體已經(jīng)含有載體蛋白。詳細資料請參閱數(shù)據(jù)表。

Polyclonal Antibodies

Crude antisera:添加抗微生物藥物后，可在4℃保存。 然而，最佳儲存(-20°C ~ -80°C)。

Affinity purified antibodies

不如抗血清穩(wěn)定。建議在-20°C ~ -80°C下保存。添加像BSA這樣的載體蛋白會增加長期穩(wěn)定性。我們的大多數(shù)抗體已經(jīng)含有載體蛋白。詳細資料請參閱數(shù)據(jù)表。

Fluorescence-labeled Antibodies

用1:1 (v/v)甘油，在-20°C下保存。保護這些抗體免受光照。

重點：避免所有抗體重復(fù)凍融循環(huán)!

概述

3Helix由約翰霍普金斯大學(xué)（Johns Hopkins University）的2位博士Yang Li & Michael Yu成立，是一家專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)、銷售膠原蛋白雜交肽（collagen hybridizing peptides）的高科技公司。為科學(xué)家和臨床醫(yī)生提供新的工具來研究膠原蛋白病理，并開發(fā)具有高膠原蛋白重塑活性的疾病的診斷和治療方法。

http://m.zihai029.com/brand/3Helix.shtml

在科研和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，準確檢測損傷膠原蛋白對于理解組織修復(fù)、疾病進展和治療響應(yīng)至關(guān)重要。艾美捷科技在此分享關(guān)于新型多肽探針CHP檢測損傷膠原蛋白的原理、優(yōu)勢及使用過程中可能遇到的常見問題。

CHP探針的適用性

Q1: CHP探針能否用于冰凍切片和石蠟切片染色？能否區(qū)分不同類型膠原蛋白？

A1: CHP探針適用于冰凍切片和石蠟切片的染色。它主要檢測受損的膠原蛋白分子，而不區(qū)分膠原蛋白的具體類型。

CHP產(chǎn)品的穩(wěn)定性

Q2: CHP產(chǎn)品在4°C溶液中的穩(wěn)定性如何？溶解后能否在-20°C或-80°C下分裝保存？

A2: CHP產(chǎn)品在4°C溶液中非常穩(wěn)定，可保存一年而純度幾乎不下降。所有CHP產(chǎn)品均可在-20°C或-80°C下分裝保存，但無需分裝，因為肽在多次凍融循環(huán)后仍保持穩(wěn)定。

CHP探針的使用

Q3: 是否每次使用CHP探針前都需要加熱？

A3: 是的，每次使用前都需要加熱CHP探針。加熱后的CHP探針在化學(xué)和物理上都非常穩(wěn)定，但不建議加熱儲備溶液，以免多次熱冷循環(huán)。

染色操作的注意事項

Q4: 如果在組織切片染色時操作時間超過3分鐘，會有影響嗎？

A4: 操作時間超過3分鐘不會影響實驗結(jié)果。但建議盡量縮短CHP冷卻時間以及加入CHP試劑的操作時間，以獲得極高的結(jié)合率。

染色條件的選擇

Q5: 為什么建議在4°C下進行CHP探針染色孵育？

A5: 在4°C下進行孵育可以增強CHP對變性膠原蛋白的親和力，并且適用于冷凍組織切片的染色。

固定劑和染色時間的選擇

Q6: 建議使用哪種固定劑或固定技術(shù)？染色結(jié)果是否取決于固定？

A6: 固定步驟不會決定染色結(jié)果。CHP染色不需要固定。如果需要固定，建議使用甲醛而非多聚甲醛或戊二醛。

共染色和抗原修復(fù)的影響

Q7: 如何在載玻片上進行CHP與抗體共染色？抗原修復(fù)是否會影響CHP染色？

A7: CHP與抗體共染色操作簡單，可直接混合后進行孵育?？乖迯?fù)處理會增強CHP染色，但建議在未經(jīng)AR處理的組織上進行CHP染色以檢測自然降解或變性的膠原。

信號增強和對照選擇

Q8: 使用生物素標(biāo)記的CHP（B-CHP）是否可以增強信號？

A8: B-CHP可以通過熒光標(biāo)記的鏈霉親和素檢測增強信號。對于陰性對照，建議使用未經(jīng)預(yù)熱的CHP溶液。

背景熒光的解釋

Q9: 為什么在正常組織中會檢測到一些熒光？

A9: 在正常組織中檢測到背景熒光可能是由于CHP與天然組織中低含量降解膠原結(jié)合或組織的自發(fā)熒光。

推薦產(chǎn)品

艾美捷科技推薦以下產(chǎn)品用于膠原蛋白檢測：

· CHP探針

· 熒光標(biāo)記的鏈霉親和素

· 甲醛固定劑

參考文獻

1. In situ imaging of tissue remodeling with collagen hybridizing peptides. ACS Nano, 2017, 11, 9825-9835.

2. Visualizing collagen proteolysis by peptide hybridization: From 3D cell culture to in vivo imaging. Biomaterials, 2018, 183, 67-76.

艾美捷科技致力于提供高質(zhì)量的科研產(chǎn)品和解決方案，助力科研和醫(yī)學(xué)診斷的發(fā)展。如有任何疑問或需求，請隨時聯(lián)系我們。

       1.收到BioXCell產(chǎn)品后應(yīng)如何處理？

收到抗體后，在分裝儲存及使用時需在生物安全柜中進行，并使用無菌槍頭、離心管、注射器和緩沖液等，降低污染率。另外，使用前抗體要處于低溫狀態(tài)。 

2.如何正確保存BioXCell抗體產(chǎn)品？

請將抗體置于4℃避光儲存。無菌操作。即使分裝后，也不推薦將抗體冷凍保存。避免將抗體稀釋至工作濃度后在4℃條件下儲存超過一天，建議現(xiàn)用現(xiàn)配。  

3.萬一沒注意說明書上的儲存要求，將抗體置于室溫儲存了一段時間，是否還可以繼續(xù)使用？

一般來說，室溫下放置幾個小時不會影響抗體的活性，但是放置幾天或者更長時間則有可能會導(dǎo)致蛋白降解，影響抗體活性，不建議使用。  

4.BioXCell抗體的保質(zhì)期有多久？

按說明書要求儲存，BioXCell抗體有效期為1年。  

5.BioXCell抗體是凍干粉還是液體形式？

BioXCell抗體均以無菌PBS緩沖液的形式提供。該溶液中不含穩(wěn)定劑、防腐劑、載體蛋白、甘油或任何其他添加劑?？贵w的pI值決定了PBS緩沖液的pH值。  

6.抗體收到后有漂浮物、絮狀沉淀或聚集物是否正常？應(yīng)如何處理？

存在聚集物或沉淀物屬于正常現(xiàn)象，不會影響抗體的活性?？梢栽谑覝叵螺p輕搖晃使其溶解，或過濾或離心去除。  

7.Bioxcell抗體的濃度是多少？BioXCell不同批次抗體的濃度不同，但一般來說是在4到11mg/mL之間。包裝的離心管上會標(biāo)記抗體的具體濃度。如果需要在訂購之前知道產(chǎn)品的確切濃度，請聯(lián)系艾美捷科技。  

8.應(yīng)如何稀釋抗體至工作濃度？

建議使用官網(wǎng)推薦的InVivoPure系列專用稀釋緩沖液來稀釋BioXCell抗體，艾美捷在每個產(chǎn)品頁面上都列出了每種抗體的推薦InVivo Pure 稀釋緩沖液。在沒有InVivoPure稀釋緩沖液的情況下，可以使用與抗體PBS緩沖液pH相同或相近的的無菌PBS，以避免蛋白聚集。稀釋時，建議使用預(yù)冷緩沖液，并在生物安全柜中操作，使用無菌槍頭、試管、注射器和緩沖液來保持抗體的無菌性。應(yīng)避免將抗體稀釋至工作濃度后在4℃條件下儲存超過一天。 

9.BioXCell抗體的氨基酸或DNA序列是什么？

我們的抗體是使用標(biāo)準雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的，因此抗體的AA或DNA序列通常是未知的。  

10.BioXCell抗體的抗原表位是什么？

BioXCell不提供抗原表位信息，請客戶自行參考文獻。  

11.BioXCell抗體在體內(nèi)的半衰期是多久？

廠家內(nèi)部并沒有抗體在體內(nèi)的半衰期數(shù)據(jù)。因為抗體的半衰期是高度可變的，并且受到物種、同型、抗原分布、抗原濃度和許多其他因素的影響。建議閱讀感興趣抗體已發(fā)表的相關(guān)文獻，參考與您實驗條件及設(shè)計相近的實驗數(shù)據(jù)，預(yù)估抗體的半衰期。 

12.BioXCell抗體是否適用于體內(nèi)注射實驗？

BioXCell所有的產(chǎn)品都是專門為體內(nèi)使用而配制的。所有抗體均在無菌 InVivoPure緩沖液中配制。抗體溶液不含穩(wěn)定劑、防腐劑、載體蛋白、甘油或任何其他添加劑。內(nèi)毒素水平 <2EU/mg ( InVivoMab)，這使它們有資格進行大多數(shù)體內(nèi)研究。為了滿足最嚴格的要求，BioXCell還提供內(nèi)毒素水平較低的抗體：<1EU/mg ( InVivoPlus)。  

13.BioXCell抗體是否適合體外應(yīng)用？

可用于體外應(yīng)用，例如細胞培養(yǎng)實驗和診斷測定，包括蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀、IHC、流式細胞術(shù)等。請參閱各個產(chǎn)品頁面以獲取已批準的列表每種抗體的應(yīng)用。另外所有BioXCell抗體都是未偶聯(lián)的，因此流式細胞術(shù)和免疫熒光等應(yīng)用需要使用熒光染料偶聯(lián)的二抗。  

14.小老鼠體內(nèi)注射實驗，應(yīng)該多久注射一次？每次注射多少抗體？？

任何給定實驗和抗體的最佳給藥劑量和頻率可能會因?qū)嶒炏到y(tǒng)（即小鼠品系、疾病模型等）、實驗持續(xù)時間、靶組織、抗原濃度和許多其他因素而有很大差異細節(jié)。出于這個原因，最佳劑量最好通過閱讀與您感興趣的抗體相關(guān)的產(chǎn)品參考文獻來確定，以查找與您的實驗系統(tǒng)類似的實驗系統(tǒng)中的已發(fā)布數(shù)據(jù)。以此現(xiàn)有研究為起點，您可以通過實驗優(yōu)化給藥劑量和頻率。BioXCell的每種產(chǎn)品在產(chǎn)品網(wǎng)頁上都有最新的參考列表。  

15.體內(nèi)實驗中同種型對照組是否重要？如何選擇合適的同種型對照？

考慮同型對照處理組需要生成可靠的數(shù)據(jù)，因為它允許研究人員準確地區(qū)分以抗原特異性方式從初級抗體結(jié)合觀察到的結(jié)果和從非抗原特異性結(jié)合或抗體注射的其他非特異性作用觀察到的結(jié)果。同型對照抗體必須與一抗的宿主物種、同種型和亞類相匹配。為了方便我們的客戶，我們在每個產(chǎn)品頁面上列出了每種抗體的推薦的同型對照貨號。  

16.如果覺得自己的抗體效果不佳，怎么辦？

如果您懷疑您的抗體沒有發(fā)揮最佳功能，請務(wù)必認真填寫并提交技術(shù)服務(wù)申請表。您填寫的實驗信息越充分，BioXCell技術(shù)團隊的建議才更可靠。  

17.如何申請和查詢產(chǎn)品的COA？

官網(wǎng)自助鏈接：https://apps.bioxcell.com/certificate-of-analysis 

18.應(yīng)該如何購買BioXCell抗體？

艾美捷科技是BioXCell中國區(qū)代理，歡迎咨詢購買：400-6800-868  

19.Bioxcell InVivoMab和InVivoPlus兩種級別的抗體有什么區(qū)別？

尊敬的客戶：

感謝您選用艾美捷科技代理品牌的產(chǎn)品，您的信任和支持是我們的動力！ 

您可能注意到了部分產(chǎn)品的運輸條件和保存條件不一致，也許這會讓您擔(dān)心產(chǎn)品的質(zhì)量。我們非常 理解您的顧慮，對此我們特別說明如下： 

運輸條件是根據(jù)在短期運輸過程中不影響產(chǎn)品質(zhì)量的原則，經(jīng)由對應(yīng)品牌廠家測試后制定的，可能 有別于推薦的長期儲存條件（為了更長的保存時間）。某些產(chǎn)品在短期內(nèi)（如運輸時）不按長期保存條 件保存并不會影響到其質(zhì)量。而那些在短期內(nèi)對溫度條件敏感的產(chǎn)品則將加藍冰（冰袋）或干冰運輸， 以防止溫度驟變給產(chǎn)品穩(wěn)定性造成影響。 

客戶在收到產(chǎn)品包裹的時候，冰袋會出現(xiàn)融化的正?，F(xiàn)象，它主要在整個運輸過程中起到延緩溫度 驟變的作用，廠家生產(chǎn)試劑時會有穩(wěn)定性處理，不會影響效能。 

絕大部分試劑在實驗開始前，需要將試劑恢復(fù)到室溫。如果您收到貨時溫度為常溫，不用擔(dān)心，這 些都在廠家產(chǎn)品開發(fā)時的考慮范疇內(nèi)。如果當(dāng)日即用，就不用再解凍可以盡快實驗，如當(dāng)下不用，就盡 快按照產(chǎn)品長期儲存溫度保存即可，如果后續(xù)是多次使用則建議先分裝后再保存，避免多次反復(fù)凍融。 如使用中遇到問題可以及時聯(lián)系艾美捷科技。 

艾美捷以產(chǎn)品的品質(zhì)為第一位，完全按照品牌廠家的運輸條件執(zhí)行，以最大的努力滿足客戶，贏得客戶信賴。如您有任何關(guān)于產(chǎn)品保存和運輸條件相關(guān)的疑問，請撥打我司服務(wù)熱線：400-6800-868 或 027-59626688，我們將竭誠為您服務(wù)。 

此致，

敬禮！

武漢艾美捷科技有限公司         時間：2022 年 8 月 18 日星期四

儲存：凍干粉原裝儲存在 2-8℃（不開封原裝保存 3-5 年）。

溶解：加入一定體積 dH2O（參考特定說明書），溶解完全。工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。

保存：

（短期保存）未稀釋的液體，在 2-8℃下穩(wěn)定約 6 周；

（長期保存）

方法一、水化后分裝，置于-70°C 或以下冷凍保存，避免重復(fù)凍融。

方法二、添加等體積的甘油(ACS 級或更高)，終濃度變?yōu)樵瓉淼?50%，以液體形式儲存于-20℃。

注意：加入甘油后使蛋白質(zhì)濃度和稀釋的范圍都減半（比如：重溶后抗體的濃度是 0.8mg/ml，

體積 2ml，抗體稀釋比例 1:5,000 - 1:100,000 for WB, 加入等體積（2ml）的甘油后, 抗體濃

度變成 0.4mg/ml，體積 4ml,抗體稀釋比例變成 1:2500-1:50000 for WB）。

水化后保質(zhì)期：自補水之日起一年。如果測試結(jié)果符合預(yù)期用途，則可以延長有效期