外泌體（Exosome，Extracellular vesicles，EVs）是一類由細(xì)胞釋放到細(xì)胞外的小型膜包裹囊泡。它們起源于細(xì)胞內(nèi)部的多種細(xì)胞器，如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和細(xì)胞膜，并通過融合或分泌途徑釋放到細(xì)胞外。外泌體的大小通常在30到150納米之間，具有豐富的蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)組成。

外泌體在細(xì)胞間的通訊和信號傳遞中起著重要作用。它們可以通過包裹和保護其內(nèi)部的生物活性分子，如小RNA、mRNA、蛋白質(zhì)和代謝產(chǎn)物，將這些分子傳遞到目標(biāo)細(xì)胞。這種傳遞方式可以影響目標(biāo)細(xì)胞的基因表達、蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞功能。因此，外泌體被認(rèn)為是一種重要的細(xì)胞間通訊介質(zhì)，參與了多種生理和病理過程，包括免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖和凋亡、腫瘤轉(zhuǎn)移和神經(jīng)系統(tǒng)功能。

外泌體RNA在細(xì)胞生物學(xué)中具有重要的生物學(xué)意義。以下是外泌體RNA的幾個主要生物學(xué)意義：

細(xì)胞間通訊：外泌體RNA可以通過外泌體的釋放和攝取，在細(xì)胞間進行信息傳遞和通訊。外泌體中的RNA分子，如微RNA（miRNA）、mRNA和長非編碼RNA（lncRNA），可以被目標(biāo)細(xì)胞攝取，并調(diào)節(jié)目標(biāo)細(xì)胞的基因表達和功能。這種方式可以影響細(xì)胞的生理狀態(tài)、細(xì)胞增殖和凋亡、細(xì)胞分化和細(xì)胞遷移等生物學(xué)過程。

疾病診斷和預(yù)后評估：外泌體RNA的組成和表達模式在不同疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)生變化，因此被廣泛研究作為潛在的生物標(biāo)志物用于疾病的診斷和預(yù)后評估。通過分析外泌體中的特定RNA分子的表達水平或突變情況，可以識別出與疾病相關(guān)的特征，并為疾病的早期檢測、分類和治療提供重要信息。

調(diào)控基因表達：外泌體RNA可以在目標(biāo)細(xì)胞中調(diào)控基因表達。例如，miRNA是一類短RNA分子，可以通過與目標(biāo)mRNA結(jié)合，抑制其翻譯或降解。外泌體中的miRNA可以通過外泌體的攝取傳遞到目標(biāo)細(xì)胞，并調(diào)控目標(biāo)細(xì)胞中的基因表達模式。這種調(diào)控機制對于細(xì)胞的生理調(diào)節(jié)、疾病的發(fā)生和發(fā)展具有重要影響。

腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后評估：外泌體RNA在腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后評估中起著重要作用。腫瘤細(xì)胞釋放的外泌體中含有特定的RNA分子，可以通過影響腫瘤微環(huán)境、調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，以及與免疫系統(tǒng)的相互作用等方式，促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。通過分析外泌體中的RNA分子，可以評估腫瘤的侵襲性和預(yù)后風(fēng)險，為腫瘤治療和預(yù)后評估提供重要依據(jù)。

總之，外泌體RNA在細(xì)胞間通訊、疾病診斷、基因表達調(diào)控以及腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后評估等方面具有重要的生物學(xué)意義。它們在細(xì)胞生物學(xué)和疾病研究中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)和調(diào)控作用，為我們深入理解細(xì)胞功能和疾病機制提供了有價值的信息。

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本試劑盒基于自主研發(fā)的均相液體磁珠，能特異性捕獲外泌體而不吸附雜質(zhì)，實現(xiàn)高純度、高回收率外泌體總RNA提取。具有操作簡便、高純度和高回收率等優(yōu)點，特別適用于血漿、血清等復(fù)雜樣本中的外泌體總RNA提取。提取的外泌體RNA可用于反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、RT-qPCR、RIP、NGS等研究。

試劑盒組分：

自備儀器、試劑與耗材：

高速冷凍離心機

側(cè)擺搖床

1.5mL離心管

磁力架、冰盒

氯仿、異丙醇、75%乙醇等

使用方法：

1、樣品預(yù)處理

1）去除細(xì)胞。4℃，300g，離心 5min，轉(zhuǎn)移上清到新的離心管；

對無細(xì)胞的樣品，可以跳過此步驟。

2）去除細(xì)胞及細(xì)胞碎片。4℃，2000g，離心 10min，轉(zhuǎn)移上清到新的離心管；

3）去除大體積顆粒。步驟 2）得到的上清，4℃，14000g，離心 30min，轉(zhuǎn)移上清到新的離心管。

2、富集外泌體

1）取100μL ExoMag Exosome Beads Plus到1.5mL離心管，置于磁力架上30s，吸棄磁珠保護液；

2）向上述磁珠中加入500μL經(jīng)預(yù)處理后的樣品（如果不足500μL，可用Solution A補足），離心管固定在側(cè)擺搖床上，17rpm，室溫旋轉(zhuǎn)孵育30min；

在某些樣本中，磁珠在結(jié)合外泌體過程中，可能會結(jié)團，但不影響分離效果，請放心使用。

3）置于磁力架上，靜置30s，棄上清；

4）加入1mL Solution A，上下顛倒混勻，置于磁力架上，靜置30s，棄上清；

5）重復(fù)上述步驟4）2次，保留磁珠。

3、外泌體RNA提取

1）向磁珠中，加入1mL Extraction Buffer（主要成分為Trizol，注意防護），冰上靜置5min；

2）加入200μL氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15s，冰上靜置5min；

3）4℃，12000g，離心15min；

離心后，溶液分為三層（從上往下，分別是水相層、中間層、有機相層），RNA存在于水相層中。

4）將水相層轉(zhuǎn)移至1.5mL Nuclease-free Tubes中，加入等體積異丙醇，上下顛倒混勻，冰上靜置10min；

水相體積約為所加Extraction Buffer體積的60-70%，建議轉(zhuǎn)移約600μL水相，以防吸到中間層造成DNA污染。

5）4℃，12000g，離心10min，吸棄上清，保留沉淀；

吸棄上清時，用移液器緩慢吸取，最后殘留約50μL，避免吸走RNA沉淀。（在沉淀不明顯時，尤為重要）

6）向沉淀中，加入1mL 75%乙醇，渦旋充分洗滌，并輕彈管底，重懸沉淀；

7）4℃，12000g，離心5min；吸棄上清，保留沉淀；

吸棄上清時，用移液器緩慢吸取，最后殘留少量液體，避免吸走RNA沉淀。（在沉淀不明顯時，尤為重要）

剩余的少量液體可短暫離心，然后用10μL移液器吸出，注意不要吸到沉淀。

8）室溫放置晾干。注意，不要晾的過干，完全干燥會很難溶解，約3min即可；

9）向沉淀中，加入11μL DEPC-treated Water，反復(fù)吹打混勻，充分溶解后取少量檢測，其余溶液置于-80℃保存?zhèn)溆谩?/span>

注意事項：

1）Extraction Buffer中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內(nèi)、接觸皮膚、吞食等會引起中毒、灼傷及其他身體傷害。使用時應(yīng)穿戴防護物，如防護服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛時，應(yīng)立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療；

2）RNA提取操作需要在冰上進行；

3）請穿實驗服并佩戴一次性手套操作，避免RNase污染；

4）RNA提取所用到的耗材，都要預(yù)防RNase酶污染；所用到的溶液應(yīng)使用RNase-free water配制；

5）需自備氯仿、異丙醇（新開封或提取RNA專用）、75%乙醇（DEPC處理水配制）、RNase-free water；

6）RNA半衰期比較短，易降解建議抽提后盡快進行續(xù)實驗；

7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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Biogradetech是全球生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應(yīng)商。他們提供廣泛的產(chǎn)品組合，包括細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域的試劑。Biogradetech的產(chǎn)品受到全球生物研究機構(gòu)和生物制藥公司的高度追捧，他們以高質(zhì)量、可靠性和服務(wù)而聞名。   

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