基質(zhì)膠作為一種重要的細胞外基質(zhì)，具有廣泛的應(yīng)用價值。它可以用于各種研究領(lǐng)域，如細胞生物學(xué)、組織工程、腫瘤研究等。基質(zhì)膠的特殊成分和結(jié)構(gòu)為細胞提供了理想的生長環(huán)境，促進細胞的黏附、遷移和增殖。同時，基質(zhì)膠還可以模擬人體組織的結(jié)構(gòu)和功能，為研究人員提供了重要的工具。

基底膜基質(zhì)膠的應(yīng)用廣泛，不僅可以促進細胞的生長和分化，還可以模擬真實的組織環(huán)境，為研究細胞行為和疾病機制提供重要工具。無論是進行管狀結(jié)構(gòu)形成實驗、類器官形成實驗還是腫瘤類器官形成實驗，基底膜基質(zhì)膠都能發(fā)揮重要作用。

突破干細胞培養(yǎng)的界限，開啟無限可能！您是否在干細胞培養(yǎng)過程中遇到了困難？您是否希望找到一種可靠、高效的基質(zhì)膠來支持您的研究？那么，我們向您推薦一款創(chuàng)新的產(chǎn)品——Biogradetech貨號A-MGL77干細胞專用的基質(zhì)膠！

如果您對干細胞培養(yǎng)研究感興趣，那么Biogradetech干細胞專用的基底膜絕對是您的得力助手。它將為你的實驗提供可靠的支持，幫助你揭開細胞行為和組織發(fā)育的奧秘。趕快嘗試Biogradetech干細胞專用基底膜，開啟細胞培養(yǎng)的新篇章吧！

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產(chǎn)品英文名稱：For iPSC/Stem Cell, Basement Membrane Matrix

產(chǎn)品中文名稱：干細胞專用，基質(zhì)膠（體外/體內(nèi)，干細胞分化）

貨號：A-MGL77

規(guī)格：5mL、10mL

儲存條件：≤-20°C

產(chǎn)品描述：

Biogradetech貨號A-MGL77干細胞專用的基質(zhì)膠是一種連續(xù)的特殊細胞外基質(zhì)薄膜，形成了內(nèi)皮細胞、上皮細胞、肌肉細胞或神經(jīng)細胞與其相鄰基質(zhì)之間的界面。基質(zhì)膠在發(fā)育和傷口愈合過程中會被降解和再生。它不僅支持細胞和細胞層，還對組織結(jié)構(gòu)起著重要作用，影響細胞的粘附、遷移、增殖和分化。基質(zhì)膠能夠成為轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞侵襲的主要屏障。

Biogradetech貨號A-MGL77干細胞專用的基質(zhì)膠是從Engelbreth-Holm-Swarm（EHS）腫瘤中純化得到的可溶性基質(zhì)膠。此基質(zhì)膠在37°C下形成重組基底膜基質(zhì)膠。此基質(zhì)膠的主要成分包括層粘連蛋白、IV型膠原、粘連素和肝素硫酸酯蛋白聚糖。

適用范圍：

它是一種成熟的無飼養(yǎng)層的人類胚胎干細胞（hES）培養(yǎng)基質(zhì)。它與特定培養(yǎng)基結(jié)合用來培養(yǎng)干細胞（如人類胚胎干細胞hESC、誘導(dǎo)多能干細胞iPSC）。經(jīng)過篩選的干細胞基質(zhì)膠提供了人類胚胎干細胞和誘導(dǎo)多能干細胞滋養(yǎng)層培養(yǎng)所需的可重復(fù)性和一致性，也可用于體內(nèi)分化研究，如畸胎瘤形成。  

產(chǎn)品參數(shù)：

來源：小鼠腫瘤；

1.顏色：含酚紅的基質(zhì)膠呈黃粉色，無酚紅的基質(zhì)膠呈半透明淡黃色；

2.形態(tài)：標準型基質(zhì)膠在4°C下溶解為透明液體；高濃度基質(zhì)膠在0°C下溶解后為透明液體，長時間放置于4°C后會半凝膠化。

3.濃度：蛋白質(zhì)濃度范圍為8至26 mg/mL。

4.內(nèi)毒素：≤ 4.5 EU/mL

5.凝膠時間：室溫下5-30分鐘凝膠，當溫度從22°C升至37°C時，凝膠形成速度加快。

包被涂層方法：

打造成功的干細胞培養(yǎng)環(huán)境，關(guān)鍵在于選擇合適的基質(zhì)膠。其中，基質(zhì)膠的包被涂層方法對于不同的應(yīng)用需求有所不同。下面，我們將介紹基質(zhì)膠的包被涂層步驟，幫助您輕松應(yīng)對各種細胞培養(yǎng)挑戰(zhàn)。

首先，讓我們來了解一下基質(zhì)膠的解凍過程。將Biogradetech貨號A-MGL77干細胞專用的基質(zhì)膠在2-8°C的冰箱中過夜解凍。由于冰箱溫度可能有所不同，因此建議在解凍過程中將基質(zhì)膠放在冰上保持低溫，以防止過早凝膠化。解凍后的基質(zhì)膠在15°C以上的溫度下會迅速凝固，因此在使用時要保持冰上狀態(tài)，以避免不必要的凝膠形成。

Biogradetech貨號A-MGL77干細胞專用的基質(zhì)膠有許多應(yīng)用場景，需要不同的厚度和濃度。例如，用于內(nèi)皮細胞形成類似毛細血管的結(jié)構(gòu)（管狀結(jié)構(gòu)形成實驗）、大鼠主動脈組織分化為類似毛細血管的結(jié)構(gòu)（主動脈環(huán)形成實驗）、上皮類器官形成或腫瘤類器官結(jié)構(gòu)形成，需要較厚的凝膠，也就是厚層凝膠法。而一些應(yīng)用，如原代細胞的傳代培養(yǎng)，需要薄層涂層而不是厚凝膠，因此應(yīng)采用薄層凝膠法。

厚層凝膠法：

1.按上述方法解凍基質(zhì)膠；

2.緩慢上下移液將基質(zhì)膠混勻，注意不要引入空氣泡；

3.向細胞培養(yǎng)板表面加入200-300μL/cm²基質(zhì)膠，平鋪均勻，注意避免產(chǎn)生氣泡；

4.將培養(yǎng)板放置在 37 ℃，等待 30 min 形成凝膠即可使用。

薄層包被法：

1.按上述方法解凍基質(zhì)膠；

2.緩慢上下移液將基質(zhì)膠混勻，注意不要引入空氣泡；

3.根據(jù)實驗需求使用預(yù)冷的培養(yǎng)基稀釋。建議將基質(zhì)膠稀釋為1:100以用于原代細胞的擴增。對于您的應(yīng)用，可能需要經(jīng)驗性地確定最佳涂層濃度；

4.加入適量體積的該溶液覆蓋整個細胞培養(yǎng)板表面。建議加入300μL/cm²的溶液；

5.將培養(yǎng)板放置在室溫，孵育至少1h；

6.吸去上清即可使用。不要讓涂層表面干燥。

我們的干細胞專用基底膜是您研究和應(yīng)用干細胞的理想選擇。它為您提供了一個可靠的平臺，支持干細胞的生長、分化和研究。無論是進行基礎(chǔ)研究還是藥物篩選，我們的產(chǎn)品都能滿足您的需求。使用我們的基底膜，您可以更好地模擬體內(nèi)環(huán)境，促進干細胞的正常生長和發(fā)育。它的成分經(jīng)過精心篩選和純化，確保了高質(zhì)量和可重復(fù)性的結(jié)果。

我們致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和客戶服務(wù)。我們的干細胞專用基底膜將成為您研究的有力助手，助您取得突破性的發(fā)現(xiàn)和成果。立即選擇我們的產(chǎn)品，開啟您的干細胞研究之旅！

實驗操作示例：以誘導(dǎo)多能干細胞iPSC培養(yǎng)為例

1. 設(shè)備、試劑和耗材

1.1 試劑：基質(zhì)膠（貨號：A-MGL77），ROCK抑制劑 (Y-27632)，DMEM/F12，mTeSR1/E8培養(yǎng)基，Accutase解離劑，PBS (D-PBS)；

1.2 耗材：無菌移液器槍頭、6孔板（或其它孔數(shù)的板，本方案將以6孔板為例)，無菌EP管。

2. 實驗前準備

2.1. 材料預(yù)冷

2.1.1 將基質(zhì)膠放入冰盒中，在4°C的冰箱中慢慢融化過夜（在操作過程中不要讓產(chǎn)品溫度超過4°C。始終保持產(chǎn)品在冰上，并使用冰冷的溶液或細胞懸液稀釋。）

2.1.2 與基質(zhì)膠接觸的耗材或試劑，如無菌離心管、無菌移液槍頭和DMEM/F12，需提前在4°C冷藏。

2.2. 稀釋基質(zhì)膠（貨號：A-MGL77）以1:80 - 1:100的比例

（提示：1:80 - 1:100都是可以的，相當于基質(zhì)膠濃度為0.1mg/mL。對于iPSC培養(yǎng)，我們建議以約0.013 mg/cm?的濃度包被，例如，將12.5 mg/mL的基質(zhì)膠稀釋1:100后，每個6孔板的包被體積為1 mL。）

2.2.1 將適量的4°C預(yù)冷的DMEM/F12轉(zhuǎn)移至冷卻的EP管中；

2.2.2 使用預(yù)冷的槍頭將DMEM/F12轉(zhuǎn)移到分裝好的基質(zhì)膠中，充分混合后轉(zhuǎn)移到另一個EP管中（保持在冰上）。重復(fù)此步驟2-3次，直到基質(zhì)膠完全移液至EP管中，然后稀釋至滿足自己設(shè)計要求的最終濃度；

2.2.3 此基質(zhì)膠混合液作為后續(xù)鋪板包被使用。

2.3. 包被涂層步驟

2.3.1 將1 mL/孔的基質(zhì)膠混合液加入預(yù)冷的6孔板中，輕輕搖動板子以確保混合液均勻地覆蓋在板上；

2.3.2 將6孔板轉(zhuǎn)移到37°C的培養(yǎng)箱中過夜孵育（孵育1-2小時后即可使用板子，但過夜孵育更適合細胞培養(yǎng)。涂層的板子可在4°C保存，并在涂層后的一周內(nèi)使用。使用板子前應(yīng)將涂層液吸去）；

2.3.3 使用前吸去涂層上方的液體。

2.4. 制備ROCK抑制劑（Y-27632）工作液

使用無菌PBS溶解Y-27632，并配置成10mM的溶液（1000X），工作濃度為10uM。

2.5. 制備含ROCK抑制劑的培養(yǎng)基：

將10mM的ROCK抑制劑（Y-27632）加入mTeSR1/E8培養(yǎng)基中，使最終濃度為10uM。

注意：4°C的基質(zhì)膠會逐漸聚合成膠。請嚴格控制操作溫度和操作時間。

3. 細胞培養(yǎng)

3.1. iPSC復(fù)蘇

3.1.1 從液氮或干冰中取出iPSC，并在37°C的水中迅速解凍；

3.1.2 用75%的酒精消毒凍存管，然后將其轉(zhuǎn)移到工作臺上；

3.1.3 將細胞溶液轉(zhuǎn)移到新的15ml EP管中，并用DMEM/F12/DMEM沖洗凍存管兩次；

3.1.4 在室溫下，以300g的速度離心15ml EP管，離心5分鐘（iPSC對200-300g的速度有很好的耐受性，推薦使用300g以最大化細胞捕獲，標準程序中推薦使用200g）；

3.1.5 丟棄上清液，用2mL含有ROCK抑制劑的培養(yǎng)基輕輕重懸iPSC，然后將其轉(zhuǎn)移到鋪好的6孔板中。輕輕搖動板子以均勻分布細胞（每孔細胞密度調(diào)整為1×10⁶個細胞）；

3.1.6 將6孔板放回37°C的培養(yǎng)箱中（請在細胞轉(zhuǎn)移后立即執(zhí)行，以避免細胞中心密度增加）；

3.1.7 第二天移除ROCK抑制劑，并使用無抑制劑的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)細胞。

注意：不推薦在細胞培養(yǎng)中使用抗生素，因為它們可能干擾細胞及其分化潛能。培養(yǎng)環(huán)境應(yīng)與其他細胞隔離，并在兩次傳代后進行支原體檢測。如果冷凍保存液中含有DMSO，DMSO 在室溫下對細胞有毒，復(fù)蘇步驟應(yīng)快速完成。

3.2. iPSC傳代

3.2.1 丟棄培養(yǎng)上清液，用1mL PBS沖洗，然后加入1mL Acuutase；

3.2.2 將培養(yǎng)板放入37°C的培養(yǎng)箱中3分鐘，或者在顯微鏡下觀察，直到大部分細胞脫落（如果細胞仍附著，可將培養(yǎng)板放在手上，用另一只手輕輕放在培養(yǎng)板上，使板輕微震動，使細胞脫落）；

3.2.3 在傳代之前，準備基質(zhì)膠涂層的6孔板；

3.2.4 傾斜培養(yǎng)板，將Acuutase溶液沿著培養(yǎng)層轉(zhuǎn)移兩次，以分離細胞團并將其轉(zhuǎn)移到離心管中；

3.2.5 用DMEM/F12沖洗培養(yǎng)層表面，并與離心管中的細胞溶液混合（用DMEM/F12或PBS洗滌，至少建議使用5%的培養(yǎng)基進行后續(xù)顆粒化和附著）；

3.2.6 在室溫下，以300g的速度離心5min；

3.2.7 丟棄上清液，用含有ROCK抑制劑的培養(yǎng)基懸浮細胞；

3.2.8 將細胞轉(zhuǎn)移到涂層的6孔板中。輕輕搖動板子以均勻分布細胞；

3.2.9 將6孔板放回37°C的培養(yǎng)箱中進行孵育。

注意：當iPSC生長到單層時，它們會迅速分化和死亡。為了保持生長和多能性，需在其長滿前進行傳代。

3.3. iPSC冷凍保存

3.3.1 準備細胞解離液。

3.3.2 細胞分離方法類似于傳代，可以使用細胞計數(shù)器與細胞冷凍保存配合使用；

3.3.3 每管以1×10⁶細胞的密度冷凍，隨后離心、分出培養(yǎng)基，然后在適量的冷凍液中重新懸浮；

3.3.4 將1mL重新懸浮的細胞冷凍物加入1.5mL的凍存管中，進行程序冷卻，然后長期存放在液氮中。

Biogradetech是生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應(yīng)商。他們提供廣泛的產(chǎn)品組合，包括細胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域的試劑。Biogradetech的產(chǎn)品受到全球生物研究機構(gòu)和生物制藥公司的高度追捧，他們以高質(zhì)量、可靠性和服務(wù)而聞名。 

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。其產(chǎn)品均在嚴格的全球標準下生產(chǎn)，Biogradetech還提供專業(yè)的技術(shù)支持，幫助客戶選擇正確的產(chǎn)品，并正確使用產(chǎn)品。Biogradetech致力于為客戶提供高質(zhì)量的產(chǎn)品和服務(wù)，是那些尋求高質(zhì)量試劑和可靠結(jié)果的人值得信賴的合作伙伴。 為了更好地滿足亞太地區(qū)客戶的需求并提升交付速度，Biogradetech在香港設(shè)立現(xiàn)貨中心，將能更迅速地滿足客戶的需求，確保訂單的高效處理，并加速產(chǎn)品的交付和配送，從而提供更快速、可靠的服務(wù)。 

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