AnaSpec：SensoLyte 520 HCV蛋白酶檢測試劑盒

發(fā)布者：艾美捷科技發(fā)布時(shí)間：2025-02-13

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丙型肝炎病毒（HCV）屬于黃病毒科（Flaviviridae），HCV基因組為9.6 kb的正鏈RNA，編碼一個(gè)長約3000個(gè)氨基酸的多聚蛋白前體。該多聚蛋白在翻譯過程中通過宿主細(xì)胞和病毒蛋白酶的蛋白水解作用被加工成至少10種獨(dú)立的蛋白質(zhì)，包括4種結(jié)構(gòu)蛋白（C、E1、E2和p7）和6種非結(jié)構(gòu)（NS）蛋白（NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）。NS3蛋白是一種多功能蛋白，其N端三分之一為絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域，C端三分之二為解旋酶結(jié)構(gòu)域。NS3-4A絲氨酸蛋白酶是由兩種HCV編碼蛋白形成的非共價(jià)異二聚體復(fù)合物，即NS3的N端絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域（催化亞單位）和NS4A輔助因子（激活亞單位）。NS3-4A絲氨酸蛋白酶負(fù)責(zé)HCV多聚蛋白前體在四個(gè)連接位點(diǎn)的蛋白水解切割：NS3/NS4A（自身切割）、NS4A/NS4B、NS4B/NS5A和NS5A/NS5B。由于這些切割過程對于病毒蛋白的成熟至關(guān)重要，因此抑制NS3/4A蛋白酶被認(rèn)為是開發(fā)高效抗HCV藥物的重要靶點(diǎn)之一。

SensoLyte 520 HCV蛋白酶檢測試劑盒（貨號AS-71145）可用于高通量篩選HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑，并通過5-FAM/QXL?520熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）肽定量檢測HCV NS3/4A蛋白酶活性。這種FRET肽的序列源自NS4A/NS4B的切割位點(diǎn)。在FRET肽中，5-FAM的熒光被QXL?520猝滅。當(dāng)被HCV NS3/4A蛋白酶切割成兩個(gè)獨(dú)立片段時(shí)，5-FAM的熒光得以恢復(fù)，并可在激發(fā)波長/發(fā)射波長為490 nm/520 nm處進(jìn)行監(jiān)測。由于具有更高的熒光量子產(chǎn)率和更長的波長，5-FAM的信號受細(xì)胞成分和測試化合物自身熒光的干擾較小。該檢測方法能夠檢測到低至1.56 ng/mL的活性HCV NS3/4A蛋白酶。

貨號

AS-71145

名稱

SensoLyte520 HCV Protease Assay

HCV 蛋白酶檢測試劑盒

應(yīng)用

1. 生物樣品中HCV NS3/4A蛋白酶活性測定；

2. 使用純化的HCV NS3/4A蛋白酶篩選蛋白酶抑制劑；

除了可提供高質(zhì)量的HCV NS3/4A蛋白酶分析試劑盒，AnaSpec還可以提供HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑，HCV NS3/4A蛋白酶底物等：

貨號	名稱	應(yīng)用
AS-60798	HCV NS3/4A Protease Substrate HCV NS3/4A蛋白酶底物	一種檢測丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶活性的高靈敏度FRET底物。檢測HCV NS3/4A蛋白酶< 0.1pmol。裂解后，可以在Abs/Em = 490/512 nm處監(jiān)測熒光。
AS-22991	HCV Protease FRET Substrate HCV蛋白酶FRET底物	廣泛用于NS3蛋白酶活性的連續(xù)檢測。底物的切割與酶濃度成正比，NS3的檢測限在1 nM到250 pM之間。在該底物被切割后，可以在吸收/發(fā)射波長為355/500 nm處監(jiān)測熒光。
AS-25346	HCV NS3 Protease Inhibitor 2 HCV NS3蛋白酶抑制劑2	一種強(qiáng)效的丙型肝炎病毒NS3蛋白酶肽抑制劑。
AS-71126	SensoLyte490 HCV Protease Assay kit HCV 蛋白酶檢測試劑盒	可用于高通量篩選HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑，并通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）肽連續(xù)定量檢測HCV NS3/4A蛋白酶活性。這種FRET肽的序列源自NS4A/NS4B的切割位點(diǎn)。在自然切割位點(diǎn)上的半胱氨酸被氨基丁酸（Abu）取代，且可切割的酰胺鍵被酯鍵取代。這些修飾使kcat/Km值提高了100倍以上，并能夠檢測到亞納摩爾濃度的NS3/4A蛋白酶活性。在FRET肽中，EDANS的熒光被DABCYL猝滅。當(dāng)HCV NS3/4A蛋白酶在Abu-Ala位點(diǎn)將肽切割成兩個(gè)獨(dú)立片段時(shí)，EDANS的熒光得以恢復(fù)，并可在激發(fā)波長/發(fā)射波長為340 nm/490 nm處進(jìn)行監(jiān)測。該檢測方法能夠檢測到低至25 ng/mL的活性HCV NS3/4A蛋白酶。