由于其的安全性、穩(wěn)定性和便利性，半抗原生物素（Biotin）和地高辛（Digoxin）是用于生成用于原位雜交、基因表達(dá)分析或電泳遷移率變化實(shí)驗(yàn)（Electrophoretic Mobility Shift Assays，簡(jiǎn)稱EMSA）的核酸探針的極為常見標(biāo)簽之一。

這些標(biāo)簽通過標(biāo)記的核苷酸，可以直接（使用生物素化/地高辛化的核苷酸）或間接（通過合并帶有活性基團(tuán)的核苷酸類似物，隨后進(jìn)行生物素化/地高辛化）酶促反應(yīng)引入到DNA和RNA中。隨后，生物素標(biāo)記的探針可以通過與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的鏈霉親和素、堿性磷酸酶（AP）或熒光染料檢測(cè)，而地高辛化通常通過HRP或AP修飾的抗體來可視化。

對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用來說，生物素是首選標(biāo)簽。然而，在某些情況下，生物樣本中內(nèi)源性的生物素可能會(huì)干擾檢測(cè)，導(dǎo)致高背景或甚至假陽性。在這些情況下，建議使用地高辛，這是一種僅在洋地黃植物中存在的類固醇。

核酸標(biāo)記是通過體外聚合反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的，例如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。四種天然脫氧核苷酸（dNTPs）或核苷酸（NTPs）中的一種（或多種）被部分替換為帶有連接物的類似物，該連接物將標(biāo)簽連接到核苷酸部分的特定位置。這要求核苷酸類似物與聚合酶以及目標(biāo)序列兼容。由于這種兼容性取決于：1）被替換的核苷酸類型和連接物附著位置，2）連接物的類型（結(jié)構(gòu)）以及連接物的長度。

理論上，可能存在非常多的類似物。然而，在實(shí)踐中，這被減少到一組已被證明對(duì)大多數(shù)都能產(chǎn)生良好標(biāo)記結(jié)果的類似物。特別突出的類似物是在其5位被修飾的尿苷三磷酸，其次是5位被修飾的胞苷三磷酸，以及在7-去氮或N6位置有替換的腺苷三磷酸。關(guān)于連接物的類型（結(jié)構(gòu)），脂肪族氨基烯丙基、炔丙基氨基和氨基己基連接物已被證明不會(huì)參與Watson-Crick堿基配對(duì)，因此能夠產(chǎn)生良好的雜交結(jié)果。

除了連接物的結(jié)構(gòu)，連接物的實(shí)際長度也顯著影響探針的產(chǎn)量、標(biāo)簽的結(jié)合以及標(biāo)簽可視化的靈敏度和可重復(fù)性。一般來說，短連接物會(huì)產(chǎn)生豐富的探針產(chǎn)量，但可能會(huì)阻礙標(biāo)簽的結(jié)合和/或探針表面標(biāo)簽的充分可及性，而長連接物則會(huì)增加標(biāo)簽對(duì)檢測(cè)試劑的可及性，但會(huì)導(dǎo)致探針產(chǎn)量降低。目標(biāo)是在結(jié)合率和檢測(cè)效率之間達(dá)到合適的平衡，這通常通過使用11個(gè)原子或16個(gè)原子的連接物來實(shí)現(xiàn)。

DNA/cDNA標(biāo)記（DNA/cDNA Labeling）：

通過標(biāo)準(zhǔn)的酶促技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、缺口翻譯（Nick Translation）、引物延伸（Primer Extension）或末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal deoxynucleotidyl Transferase，簡(jiǎn)稱TdT）介導(dǎo)的3'端標(biāo)記和逆轉(zhuǎn)錄（cDNA探針），可以生成隨機(jī)和定點(diǎn)生物素化/地高辛化的DNA和cDNA探針。DNA探針標(biāo)記主要通過PCR、缺口翻譯或引物延伸進(jìn)行，并應(yīng)用于原位雜交或DNA微陣列技術(shù)。3'端標(biāo)記的典型應(yīng)用包括TUNEL（凋亡的原位定位）或電泳遷移率變化實(shí)驗(yàn)（EMSA）實(shí)驗(yàn)。逆轉(zhuǎn)錄法標(biāo)記cDNA通常用于基因表達(dá)分析的DNA實(shí)驗(yàn)中。

Jena Bioscience提供了多種具有不同連接體長度的半抗原標(biāo)記的((d)d)NTP類似物，這使得能夠?yàn)樘囟☉?yīng)用選擇合適匹配的產(chǎn)品。

用于DNA標(biāo)記的生物素化核苷酸：

用于DNA標(biāo)記的地高辛/二硝基苯酚修飾的核苷酸：

特殊備注說明：

PCR: Polymerase chain reaction with Taq Polymerase（Taq聚合酶的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）;

NT: Nick Translation with DNAse I / DNA Polymerase I（DNA酶I/DNA聚合酶I的Nick翻譯）;

Primer Extension: Primer Extension with Klenow 3'-5'exo-（Klenow 3'-5'exo-引物延伸法）;

3'-End Labeling: Incorporation with Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT)（摻入末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT））;

RT: Reverse Transcription with Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase (MMLV RT)（用莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶（MMLV RT）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄）.

1: in-house tested（內(nèi)部測(cè)試）

2: external reference (see datasheet)（外部參考(見數(shù)據(jù)表)）

n/a: no data available（無資料）

- : not applicable（不適用） 

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Jena Bioscience成立于1998年，由德國馬普研究所（MPI）的分子生理學(xué)家共同創(chuàng)立。該生物公司致力于為全球科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院、醫(yī)學(xué)院、制藥企業(yè)和診斷試劑盒生產(chǎn)企業(yè)提供各種研發(fā)和臨床前生物試劑。憑借其強(qiáng)大的科研實(shí)力和前沿的學(xué)術(shù)研究水平，Jena Bioscience已發(fā)展成為一個(gè)擁有完整生物試劑產(chǎn)品線、超過7500種產(chǎn)品的跨國企業(yè)，為全球50多個(gè)國家的客戶提供生物試劑服務(wù)。

Jena Bioscience的主要產(chǎn)品包括核苷/核酸制品系列（包括合成的類似物）、重組蛋白及蛋白表達(dá)系統(tǒng)、點(diǎn)擊化學(xué)產(chǎn)品系列、在結(jié)構(gòu)學(xué)研究方面全面提供晶體篩選試劑盒、優(yōu)化試劑、工具和各類耗材等。此外，還提供分子生物學(xué)和生物化學(xué)研究的定制試劑與研究服務(wù)。

武漢艾美捷科技有限公司，簡(jiǎn)稱艾美捷，擁有進(jìn)出口資質(zhì)和自己的國際物流，與國內(nèi)外90余家知名的試劑、原料及技術(shù)服務(wù)供應(yīng)商深度合作，是國內(nèi)生物制藥企業(yè)、診斷企業(yè)、跨國藥企、各大高校院所采購平臺(tái)的首選定供應(yīng)商。