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品牌專題
艾美捷科技作為Jackson中國區域總代理,將為您提供Jackson的特色優質產品主要包括各種純化的二抗、標記的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、長臂生物素、辣根酶和堿磷酶標記)、膠體金試劑等。今天主要為您介紹封閉血清,看下文介紹:
想必各位實驗達人對于免疫組化(IHC)和免疫熒光(IF)應該都比較熟悉了,在做免疫組化(IHC)或是免疫熒光(IF)實驗過程中,高背景是我們經常遇見的問題,有的時候盡管我們進行了封閉操作,背景依舊居高不下。想當年我也曾經就被免疫熒光背景問題帶來的恐懼深深支配過,別人做的免疫熒光的結果是這樣的:

我按照同樣的步驟做的免疫熒光,只是沒有染色DAPI,結果是這樣的:

我的細胞你在哪?(是不是上帝在我眼前遮住了臉,忘了掀開)
直到某天我在艾美捷官網上瀏覽到關于IF實驗產生背景的原因及降低背景的常用方法:
IF降低背景:
高背景是免疫熒光常見的問題,解決此問題可以用二抗來源的正常血清代替 BSA 做封閉液,降低抗體濃度,增加洗滌次數,洗滌至少三次,每次五分鐘,推薦洗滌液為 PBS+0.05% Tween。
我們實驗室之前大多數都是使用BSA進行封閉,用正常血清代替BSA進行封閉倒是第一次聽說,血清真的有如此奇效,我迫不及待的趕緊去嘗試了一番,熒光背景確實顯著降低了。
血清作為封閉劑的原理:
強烈建議在PBS中稀釋至5%(v / v)的正常血清作為封閉劑,以減少免疫反應中非特異性,保守序列和/或Fc受體結合的背景。用稀釋的正常血清與標記抗體來自同一宿主,可獲得最佳結果,作為添加一級抗體之前的單獨孵育步驟。
用血清進行封閉效果好嗎?
封閉血清適用于免疫組化或者免疫熒光實驗中樣本的封閉,可以封閉待檢樣本中與蛋白質非特異性結合的位點,另外還可以封閉樣品中內源性的Fc片段結合位點,阻斷抗體與樣品中的Fc受體結合,從而降低背景,減少假陽性。對于適用多抗的實驗,選擇二抗種屬來源的正常血清是封閉處理的金標準。
封閉血清如何使用?
推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在組織切片或者細胞涂片上,37℃度孵育10-30min(或者室溫1h),清除血清,不用洗滌,滴加適當比例稀釋的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃過夜。
通過上面對封閉血清的介紹,您是不是有一種想立刻動手試一試的沖動呢? 心動不如行動,快來動手試一試吧,看看小艾給您介紹的降低背景小技巧對您的實驗有沒有幫助,相信您也可以做出漂亮的圖片!
封閉血清推薦:
| 產品名稱 | 貨號 | 規格 |
| Normal Donkey Serum(驢) | 017-000-121 | 10 ml |
| Normal Alpaca Serum(羊駝) | 028-000-121 | 10 ml |
| Normal Bovine Serum(牛) | 001-000-121 | 10 ml |
| Normal Cat Serum(貓) | 002-000-120 | 5 ml |
| Normal Chicken Serum(雞) | 003-000-120 | 5 ml |
| Normal Dog Serum(狗) | 004-000-120 | 5 ml |
| Normal Goat Serum(山羊) | 005-000-121 | 10 ml |
| Normal Syrian Hamster Serum (敘利亞倉鼠) | 007-000-120 | 5 ml |
| Normal Horse Serum(馬) | 008-000-121 | 10 ml |
| Normal Human Serum(人) | 009-000-121 | 10 ml |
| Normal Mouse Serum(小鼠) | 015-000-120 | 5 ml |
| Normal Rabbit Serum(兔) | 011-000-120 | 5 ml |
| Normal Rat Serum(大鼠) | 012-000-120 | 5 ml |
| Normal Sheep Serum(綿羊) | 013-000-121 | 10 ml |
| Normal Swine Serum(豬) | 014-000-121 | 10 ml |
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