利用CUT和LUNCH RIP加速蛋白質(zhì)/RNA相互作用研究

RNA免疫沉淀（RIP）被廣泛用于分析蛋白質(zhì)和RNA之間的相互作用，但無(wú)法實(shí)現(xiàn)高分辨率，再現(xiàn)性差，過(guò)程漫長(zhǎng)復(fù)雜。使用EpiNext?CUT&LUNCH RNA免疫沉淀（RIP）試劑盒，您可以比以往更快地對(duì)靶蛋白/RNA復(fù)合物進(jìn)行高度特異性富集。

極速三步：

CUT&LUNCH（目標(biāo)下裂解和均勻釋放獨(dú)特核酸復(fù)合物）是EpigenTek最近開(kāi)發(fā)的一項(xiàng)技術(shù)，旨在為研究體內(nèi)DNA-蛋白質(zhì)相互作用提供一種比ChIP和CUT&RUN更快速、更高效的替代方法。這一創(chuàng)新技術(shù)現(xiàn)已被整合到新的CUT&LUNCH RIP試劑盒（貨號(hào)：P-2037-24）中，用于超快速、高度特異地富集目標(biāo)蛋白-RNA復(fù)合物。

CUT&LUNCH RIP整合了當(dāng)前RIP檢測(cè)和CUT&RUN的所有優(yōu)勢(shì)，是富集RNA結(jié)合蛋白特異性RNA復(fù)合物最快且最便捷的方法。

1、快速協(xié)議：在不到2小時(shí)內(nèi)完成您的檢測(cè)。

2、低背景：選擇性消除非特異性蛋白-RNA復(fù)合物。

3、高特異性和分辨率：僅回收抗體結(jié)合的復(fù)合物。

4、性價(jià)比高：每反應(yīng)的價(jià)格不到競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手RIP產(chǎn)品的一半。

不要因?yàn)槁L(zhǎng)的協(xié)議而耽誤時(shí)間。用CUT&LUNCH RIP簡(jiǎn)化您的研究，奪回您的時(shí)間——沒(méi)有減速，只有流程化的成功。

EpiNext CUT&LUNCH（目標(biāo)下裂解和均勻釋放獨(dú)特核酸復(fù)合物）RNA免疫沉淀（RIP）試劑盒（貨號(hào)：P-2037-24）提供了一種快速高效的方法來(lái)研究體內(nèi)蛋白質(zhì)-RNA相互作用。它整合了目前使用的RIP和CUT&RUN的所有優(yōu)勢(shì)，CUT&RUN是一種新的蛋白質(zhì)-DNA相互作用分析方法。

CUT&LUNCH RIP試劑盒具有以下優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)：

1、極快速的三步協(xié)議：直接從完整的細(xì)胞開(kāi)始，無(wú)需裂解和交聯(lián)。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程可以在1小時(shí)50分鐘內(nèi)完成，最小化RNA損傷和解離的RNA結(jié)合組分的丟失，保持原生蛋白質(zhì)-RNA結(jié)構(gòu)。

2、提高特異性和最小化背景：獨(dú)特的核酸裂解酶通過(guò)在目標(biāo)蛋白/RNA復(fù)合物兩端切割或移除RNA序列，確保低序列偏好，不影響目標(biāo)蛋白占據(jù)的RNA。釋放的非特異性蛋白-RNA復(fù)合物被選擇性消除，只回收抗體結(jié)合的復(fù)合物。因此，可以通過(guò)高分辨率映射可靠地實(shí)現(xiàn)和識(shí)別目標(biāo)蛋白富集區(qū)域。

3、低輸入材料：強(qiáng)大的未結(jié)合RNA裂解和免疫捕獲都在同一個(gè)管中處理。這種方法使用細(xì)胞和組織，并允許最大限度地保護(hù)目標(biāo)蛋白，最小化樣本損失。結(jié)果，輸入的細(xì)胞數(shù)量可以少至20,000個(gè)細(xì)胞，不到傳統(tǒng)RIP所需最小量的5%。

4、廣泛的適用性：適用于各種物種的培養(yǎng)細(xì)胞以及新鮮和冷凍組織中的不同RNA結(jié)合蛋白，同時(shí)保持檢測(cè)的特異性和靈敏度。

5、高度便捷：試劑盒包含所有必需組分，使EpiNext CUT&LUNCH RNA免疫沉淀（RIP）試劑盒既方便又經(jīng)濟(jì)。

背景信息

體內(nèi)富集與蛋白質(zhì)復(fù)合的RNA，然后進(jìn)行qPCR和/或下一代測(cè)序，為研究表觀轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)-RNA相互作用提供了一個(gè)有利的工具。長(zhǎng)期以來(lái)用于實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的主要方法是傳統(tǒng)的RIP（RNA免疫沉淀）后跟PCR（RIP-PCR）或測(cè)序（RIP-Seq）。這些方法已被廣泛使用，但無(wú)法實(shí)現(xiàn)高分辨率，需要交聯(lián)，并且存在重復(fù)性差和過(guò)程復(fù)雜的問(wèn)題。特別是，這些方法耗時(shí)（從8小時(shí)到2天）且成本高昂。

原理與程序

該試劑盒提供了所有必要的試劑，以富集RNA結(jié)合蛋白特異性RNA復(fù)合物，通過(guò)qRT-PCR或NGS從各種細(xì)胞樣本中分析蛋白質(zhì)-RNA相互作用。在這個(gè)檢測(cè)中，細(xì)胞被滲透處理，并用針對(duì)感興趣蛋白的RIP級(jí)抗體處理。然后，一種獨(dú)特的核酸裂解酶混合物選擇性地切割目標(biāo)蛋白區(qū)域周圍的RNA序列，移除非特異性RNA-蛋白復(fù)合物。只有抗體結(jié)合的復(fù)合物被選擇性保留。捕獲的蛋白/RNA復(fù)合物中的RNA片段被純化，可以直接用于qRT-PCR或cDNA庫(kù)構(gòu)建，以分析蛋白質(zhì)和RNA之間的相互作用。

起始材料

起始材料可以包括各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞樣本，如培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的培養(yǎng)細(xì)胞、原代細(xì)胞、從血液、體液中分離的稀有細(xì)胞群體、新鮮/冷凍組織，以及從整個(gè)細(xì)胞群體中分選的特定細(xì)胞和胚胎細(xì)胞等。