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蛋白質(zhì)糖基化(glycosylation)是指將糖鏈通過共價方式連接到目標蛋白分子上的過程,是在生物界普遍存在的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾。蛋白質(zhì)糖基化在很多重要的生物學過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,包括細胞黏附、分子轉(zhuǎn)運和清除、受體激活、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。幾乎所有的膜蛋白和分泌蛋白都含有糖基化修飾。常見的兩種糖基化修飾為N-連接糖基化修飾和O-連接糖基化修飾,其中N糖糖基化修飾有多種不同類型的糖鏈,包括復(fù)雜糖鏈(complex,含有以巖藻糖、半乳糖和唾液糖為組分的糖鏈殘基)、高甘露糖鏈(high-mannose,含有多個α-連接的甘露糖殘基)、雜交型糖鏈(hybrid,兼有高甘露糖型、復(fù)雜型特點)。這些糖鏈可以影響生物分子的結(jié)構(gòu)、功能和相互作用,從而調(diào)節(jié)細胞信號傳導(dǎo)、分子識別、免疫應(yīng)答等生物過程。

作為N-糖蛋白去糖基化酶,肽N-糖苷酶F(PNGase F,也稱N-糖肽酶、N-糖酰胺酶、肽-N-糖苷酶)可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位點為糖蛋白內(nèi)側(cè)N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵,同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸,生成含有天冬氨酸的多肽鏈并釋放完整的N-糖鏈。PNGase F廣泛用于抗體及相關(guān)蛋白去糖基化,是目前應(yīng)用最多的糖生物學分析工具酶,N-糖蛋白經(jīng)PNGase F水解,獲得的寡糖鏈可通過質(zhì)譜、毛細管電泳等技術(shù)分析鑒定糖鏈結(jié)構(gòu)及豐度,已在腫瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病與糖基化研究中得到應(yīng)用。

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貨號 | |
名稱 | PNGase F, His-tag 肽N-糖苷酶 F(His標簽) |
規(guī)格 | 15000U & 75000U |
說明 | 本產(chǎn)品通過大腸桿菌重組表達,帶有His標簽,含有50%甘油, 常應(yīng)用于抗體及其相關(guān)蛋白去糖基化。 |
酶活單位定義 | 1 個酶活力單位 (U) 指在 10 μl 反應(yīng)體系中,37℃下反應(yīng) 1 h 從 10 μg 變性 RNase B 中除去超過 95% 碳水化合物所需要的酶量。 |
純度檢測 | 使用 SDS-PAGE 凝膠電泳檢測,蛋白純度不低于95% |
糖苷酶與蛋白酶活性檢測 | 無可檢出的內(nèi)切糖苷酶 F1、F2 或 F3 活性;無可檢出的蛋白酶活性 |
使用方法 | 1. 變性條件下去糖基化 ① 將 1~20 μg 糖蛋白,1 μl 10× Denaturing Buffer 和 ddH2O(如 有必要)混合至總體積 10 μl; 注:10× Denaturing Buffer 在低溫儲存時可能出現(xiàn)白色沉淀,使用前可先在 37℃下溫育使其溶解。 ② 100℃反應(yīng) 10 min 使糖蛋白變性后,冰上冷卻,離心 10 s; ③ 加入 2 μl 10× PNGase F Buffer,2 μl 10% NP-40,補充 ddH2O 使總反應(yīng)體積為 20 μl; ④ 加入 1~2 μl PNGase F,輕輕混勻,37℃孵育 1~3 h。 2. 非變性條件下去糖基化 ① 將 1~20 μg 糖蛋白,2 μl 10× PNGase F Buffer 和 ddH2O(如 有必要)混合至總體積 20 μl; ② 加入 2~5 μl PNGase F, 輕輕混勻; ③ 37℃ 孵育 4~24 h。 |
Biogradetech全球生命科學和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)關(guān)鍵原料與試劑的領(lǐng)先供應(yīng)商:Biogradetech成立于2015年,總部位于美國加利福尼亞州,早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家,逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線,并將其商業(yè)化銷售,包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質(zhì)組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經(jīng)科學、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。
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