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品牌專題RNA-蛋白質(zhì)相互作用在細(xì)胞中具有重要作用,包括結(jié)構(gòu)、催化和調(diào)節(jié)功能。RNA免疫沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)是一種強(qiáng)大的方法,用于研究體內(nèi)單個(gè)蛋白質(zhì)和RNA分子之間的相互作用。RIP的基本原理與染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)非常相似,這種方法基于使用針對(duì)感興趣蛋白質(zhì)的特異性抗體來拉下RNA結(jié)合蛋白(RBP)和目標(biāo)RNA復(fù)合物。富集蛋白復(fù)合RNA后進(jìn)行qPCR或下一代測(cè)序,為研究表觀轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)的蛋白-RNA相互作用提供了一種有利的工具。

傳統(tǒng)的RNA免疫沉淀(RIP)高分辨低,且需要交聯(lián),并且存在重復(fù)性差和過程復(fù)雜的問題,特別是,耗時(shí)較長(zhǎng),且成本較高。為了解決這些問題,EpigenTek開發(fā)了一種新的檢測(cè)方法,即EpiNext CUT&LUNCH RNA免疫沉淀(RIP)試劑盒,用于研究體內(nèi)蛋白-RNA相互作用,它整合了目前使用的RIP和CUT&RUN的所有優(yōu)勢(shì)。

貨號(hào) | |
名稱 | EpiNext CUT&LUNCH RNA Immunoprecipitation (RIP) Kit RNA-蛋白免疫共沉淀試劑盒 |
原理 | 試劑盒提供了所有必要的試劑,以富集特定RNA結(jié)合蛋白的RNA復(fù)合物,從而能夠通過qRT-PCR或NGS分析各種細(xì)胞樣本中的蛋白-RNA相互作用。在這個(gè)檢測(cè)中,細(xì)胞被滲透處理,并用針對(duì)感興趣蛋白的RIP級(jí)抗體處理。然后,一種獨(dú)特的核酸切割酶混合物選擇性地切割目標(biāo)蛋白區(qū)域周圍的RNA序列,移除非特異性的RNA-蛋白復(fù)合物。只有抗體結(jié)合的復(fù)合物被選擇性保留。捕獲的蛋白/RNA復(fù)合物中的RNA片段被純化,可以直接用于qRT-PCR或cDNA庫(kù)構(gòu)建,以分析蛋白質(zhì)與RNA之間的相互作用。 |
圖片 |
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結(jié)果示例:

使用EpiNext CUT&LUNCH RNA免疫沉淀(RIP)試劑盒進(jìn)行目標(biāo)蛋白/RNA富集:從200,000個(gè)MCF-7細(xì)胞中,使用陽性對(duì)照抗體捕獲了SNRNP70/RNA復(fù)合物。非免疫IgG用作陰性對(duì)照。富集的RNA被純化,并通過Qubit進(jìn)行熒光定量。
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