腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α），也稱為惡病質(zhì)素，是一種由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的多肽細(xì)胞因子。 它作為一種多能免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)因子發(fā)揮作用，并且還是一種強(qiáng)效致熱原。TNF-α在體內(nèi)循環(huán)，響應(yīng)刺激（如病原體或組織損傷），激活中性粒細(xì)胞，改變血管內(nèi)皮細(xì)胞的特性，調(diào)節(jié)其他組織的代謝活動(dòng)，并通過(guò)誘導(dǎo)局部血栓形成發(fā)揮抗腫瘤活性。此外，TNF-α抑制脂肪蛋白脂肪酶的活性，從而導(dǎo)致惡病質(zhì)，這是一種身體消耗的狀況。由于TNF-α在免疫系統(tǒng)中的多樣化作用，它可能在許多疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用。

TNF-α的產(chǎn)生是由淋巴因子和內(nèi)毒素對(duì)巨噬細(xì)胞的作用介導(dǎo)的。 純化的單核細(xì)胞在重組IL-2刺激后4小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生TNF-α，并且有體外證據(jù)表明，TNF-α在通過(guò)CD2和CD28刺激的T細(xì)胞中以高水平和延長(zhǎng)的動(dòng)態(tài)學(xué)表達(dá)。γ干擾素增強(qiáng)了TNF-α的分泌，TNF-α隨后誘導(dǎo)或增強(qiáng)I類MHC抗原、GM-CSF和IL-1的特異性產(chǎn)生。

Assay Genie的大鼠TNF-α ELISpot是一種高度特異性的免疫分析方法，用于在接近體內(nèi)環(huán)境的條件下，以最小的細(xì)胞操作分析T細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α的生成和分泌情況，能夠檢測(cè)到單個(gè)細(xì)胞水平的變化。該技術(shù)旨在確定在特定刺激下產(chǎn)生TNF-α的細(xì)胞頻率，并將其與特定治療或病理狀態(tài)下的頻率進(jìn)行比較。利用夾心免疫酶技術(shù)，Assay Genie 大鼠TNF-α ELISpot檢測(cè)方法不僅可以檢測(cè)分泌的TNF-α（定性分析），還可以檢測(cè)產(chǎn)生TNF-α的單個(gè)細(xì)胞（定量分析）。細(xì)胞分泌的TNF-α被包被抗體捕獲，避免了其在上清液中的擴(kuò)散、蛋白酶降解或與可溶性膜受體結(jié)合。

大鼠TNF-α ELISpot試劑盒檢測(cè)原理：高度特異性地針對(duì)TNF-α的捕獲抗體，包被于PVDF（聚偏氟乙烯）96孔微孔板的孔底。接下來(lái)，對(duì)微孔板進(jìn)行封閉處理，以最大限度減少非抗體依賴的非特異性結(jié)合，然后進(jìn)行洗滌。加入細(xì)胞懸浮液和刺激物后，將微孔板孵育，使特異性抗體能夠結(jié)合任何產(chǎn)生的TNF-α。通過(guò)洗滌去除細(xì)胞后，加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，這些抗體與之前捕獲的TNF-α結(jié)合。隨后，加入酶偶聯(lián)的鏈霉親和素，使其與檢測(cè)抗體結(jié)合。經(jīng)過(guò)孵育和洗滌后，將底物加入孔中，產(chǎn)生可被適當(dāng)分析軟件定量或通過(guò)顯微鏡手動(dòng)計(jì)數(shù)的有色斑點(diǎn)。