Biotium的總部位于舊金山灣區(qū)，是一家為科學(xué)家提供創(chuàng)新熒光解決方案的領(lǐng)先供應(yīng)商。致力于運(yùn)用化學(xué)原理為生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中未解決的挑戰(zhàn)提供解決方案，本文主要介紹Biotium公司開發(fā)的CF染料。

CF染料是一系列高度水溶性熒光染料，跨越可見光譜和近紅外光譜，可為蛋白質(zhì)和核酸等生物分子貼上標(biāo)簽。具有卓越的亮度、光穩(wěn)定性和信噪比。

CF染料有40多種，穩(wěn)定性高、亮度高、溶解度高，從藍(lán)色到近紅外。

為什么是CF染料？

化學(xué)創(chuàng)新

通過特定的化學(xué)修飾優(yōu)化減少染料聚合和提高溶解度，同時(shí)減少非特異性的結(jié)合和背景熒光(圖1)。

Rhodamine染料具有優(yōu)異的光穩(wěn)定性和熒光量子產(chǎn)量，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)一步改造優(yōu)化，可將發(fā)射光擴(kuò)展到遠(yuǎn)紅和近紅外(近紅外)區(qū)域(圖2)，仍然保持著高穩(wěn)定性、亮度和溶解性。以Rhodamine為基礎(chǔ)修飾而來的CF 633 和 CF 640R 染料比光譜比較接近的AF647具有更好的穩(wěn)定性（圖3-4）。

優(yōu)異的近紅外（NIR）染料

近紅外染料具有卓越的特異性、靈敏度和線性，比傳統(tǒng)可見光染料具有重要優(yōu)勢(shì)。近紅外染料在體內(nèi)應(yīng)用中特別有用，因?yàn)榻M織滲透率更高，組織自熒光干擾更少。然而，近紅外染料往往由于染料聚合過度和溶解性差而出現(xiàn)亮度有限的問題。此外，許多近紅外染料由于硫化而呈高負(fù)電荷，導(dǎo)致非特異性結(jié)合和更大的免疫原性。

由于新的PEG修改，近紅外CF染料限制了分子內(nèi)部的流動(dòng)性，進(jìn)而提高了量子產(chǎn)量和水溶解性，而不會(huì)增加過多的電荷。因此，NIR CF 染料比任何其他近紅外染料（圖5）更明亮、更高光穩(wěn)定性，并且具有遠(yuǎn)大于任何其他近紅外染料的生物相容性。此外，與其他商品化NIR染料相比，NIR CF染料為western blotting和免疫染色提供了更優(yōu)越的信噪比（圖6）。

無與倫比的多功能性

出色的標(biāo)記效率

用于生物標(biāo)記的活性染料通常容易發(fā)生水解，從而降低標(biāo)記效率。重硫化染料，如Alexa Fluor 染料，DyLight 染料和IRDye水解問題尤為嚴(yán)重。相比之下，Biotium 的胺反應(yīng) CF 染料具有相對(duì)穩(wěn)定的 SE 形式，比許多 Alexa Fluor 染料更耐水解。因此，CF染料 SE產(chǎn)品具有更高的標(biāo)記效率，從而為用戶提供了更好的價(jià)值。Biotium提供的Mix-n-Stain?抗體標(biāo)記試劑盒中實(shí)施并簡(jiǎn)化了這項(xiàng)技術(shù)，提供29 種 CF 染料選擇的快速高效的標(biāo)記，只需 30 分鐘，無需純化。此外，Mix-n-Stain?標(biāo)記試劑具有無與倫比的多功能性，擁有專利緩沖系統(tǒng)，可耐受常見的緩沖添加劑，包括BSA、明膠gelatin、甘油glycerol、Tris、腹水a(chǎn)scites fluid和疊氮鈉azide。

顯微鏡下超高分辨率

許多出版物信息顯示，CF染料為多種方法提供了最佳性能。某些 CF  染料所展示的卓越亮度、光敏度和光化學(xué)開關(guān)特性非常適合 3D SIM、3D STORM 和其他超分辨率和單分子成像方法。

圖7.使用常規(guī)寬場(chǎng)顯微鏡（左）和使用CF 染料標(biāo)記的STORM（右）進(jìn)行微管成像的比較。

圖8. CF568（左）產(chǎn)生比Cy3b（右）更好的微管圖像，3-D STORM顯微鏡中。圖片由加州大學(xué)伯克利分校化學(xué)學(xué)院Sam Kenny和Ke Xu教授提供。

多色靈活性

Biotium 目前提供超過 30 種 CF 染料，跨越可見光、遠(yuǎn)紅和近紅外光譜，還有更多染料在開發(fā)中。CF染料產(chǎn)品系列包括活性染料、直標(biāo)和間標(biāo)抗體、核苷酸nucleotides、鏈球菌素streptavidin、鬼筆環(huán)肽phalloidin、凝集素lectins和其他生物結(jié)合。可去官網(wǎng)下載CF  染料手冊(cè)了解更多。

流式應(yīng)用相關(guān)產(chǎn)品

CF Dyes 對(duì)應(yīng)流式應(yīng)用時(shí)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng)

直標(biāo)抗體和其他生物標(biāo)記物

Biotium提供廣泛的CF 染料，以及R-PE、APC、PerCP和生物素標(biāo)記抗體。

1. 多余1000種的單克隆抗體

2. 重組鼠兔單克隆抗體

3. 13種明亮、光穩(wěn)定的CF 染料

4. 其他R-PE、APC、PerCP、HRP、AP或生物素標(biāo)記抗體

5. 相匹配的同型對(duì)照抗體

6. 不含BSA的純化抗體可結(jié)合Mix-n-Stain?標(biāo)記試劑盒使用

7.  Anti-Tag 和 Anti-Hapten 抗體

1) Mouse MonoclonalAnti-GFP

2) Rabbit Anti-RFP

3) Rabbit Anti-GST

4) Rabbit Anti-HA Tag

5) Mouse Monoclonal Anti-6X His Tag

6) Rabbit Anti-Myc Tag

7) Rabbit Anti-V5 Tag

8) Rabbit Anti-FLAG Tag

9) Mouse Monoclonal Anti-Biotin

10) Mouse Monoclonal Anti-Fluorescein 

抗體標(biāo)記試劑盒

抗體標(biāo)記試劑盒Mix-n-Stain? Antibody Labeling Kits

1. 快速高效的標(biāo)記，最少的實(shí)際操作時(shí)間

2. 提供29種 CF 染料、R-PE、APC、PerCP或串聯(lián)染料

3. 其他標(biāo)記選項(xiàng)：生物素Biotin和FITC、HRP、AP和GOx

4. 100%產(chǎn)率，無需純化

5. 標(biāo)記耐受BSA、明膠gelatin、腹水a(chǎn)scitesfluid和Tris

6. 試劑盒可用于標(biāo)記低至1微克和高達(dá)1毫克的IgG抗體

7. 還提供用于納米體體的標(biāo)記試劑盒

圖12.CF Dye Mix-n-Stain? 標(biāo)記流程概覽，標(biāo)記熒光蛋白 (如, R-PE, APC), 復(fù)合染料, 和酶的流程有些不同。

圖13. Mix-n-Stain? APC 標(biāo)記CD3，染色Jurkat 細(xì)胞，Mix-n-Stain? APC 相比其他類似產(chǎn)品有更低的非特異性結(jié)合（粉）和更高的陽性亮度（藍(lán)）。

蛋白試劑盒CF Dye SE Protein Labeling Kit

1. 允許更靈活地進(jìn)行標(biāo)記的優(yōu)化試劑盒

2. 可選擇19種CF dye或生物素

3. 包括用于3 x 1 mg純化標(biāo)記反應(yīng)的試劑

4. 包括確定標(biāo)記程度（DOL）的說明 

細(xì)胞分析試劑

1. 細(xì)胞活力測(cè)定

2. 細(xì)胞增殖與細(xì)胞周期

3. 凋亡與壞死

4. 線粒體膜電位染料

圖14.Biotium提供14種膜不通透的胺基結(jié)合死活染料，結(jié)合穩(wěn)定，適用于固定破膜的胞內(nèi)分析實(shí)驗(yàn)。

流式輔助試劑

光譜流式

光譜流式細(xì)胞術(shù)是一種快速發(fā)展的技術(shù)，與傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)相比，它的復(fù)用能力顯著增強(qiáng)。傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀可以檢測(cè)最多二十幾色的多色實(shí)驗(yàn)，而光譜流式已經(jīng)做到40色以上。

Biotium提供的CF染料就有獨(dú)特的光譜分布，進(jìn)一步豐富了染料的選用范圍，其中活性染料Live-or-Dye?510/550, 665/685, 375/600, 和 615/740可很好地應(yīng)用于光譜流式。如下SI(相似性)矩陣供參考（Cytek儀器上測(cè)得）：

Reference

CF Dyes - Next Generation Fluorescent Dyes for Biological Research (biotium.com)