時間分辨熒光共振能量轉移（TR-FRET）是一種基于熒光共振能量轉移（FRET，F(xiàn)luorescence Resonance Energy Transfer）和時間分辨熒光（TRF, Time-Resolved Fluorescence)的技術，作為一種方便靈活的均相檢測技術，TR-FRET現(xiàn)今已成為生命科學基礎研究和藥物研發(fā)中最為常用的檢測方法之一。

THUNDERTM TR-FRET由加拿大Bioauxilium公司研發(fā),THUNDER?產(chǎn)品均提供全面驗證數(shù)據(jù)。其產(chǎn)品線聚焦于細胞水平的檢測，如細胞信號通路相關的細胞因子，磷酸化蛋白，總蛋白，GPCR相關第二信使cAMP檢測等，也涉及適合方法學開發(fā)的工具抗體。
 

THUNDERTM TR-FRET技術原理圖

一、熒光共振能量轉移（FRET）

利用兩種熒光基團能量轉移，分別是能量供體Europium Chelate（Donor）和能量受體Far-red dye（Accpeptor）。當供體和受體相互靠近（1-10nm），320/340nm光激發(fā)Europium，光子能從供體轉移到受體上（615nm），受體發(fā)出熒光（665nm）。

二、時間分辨熒光（TRF）

利用鑭系元素（Eu）的獨特性質，其熒光半衰期長達ms級別。延遲50~100μs開始讀值后，未結合的受體熒光和背景熒光均已淬滅，即反映樣本真實情況。
 

三、THUNDERTM TR-FRET技術優(yōu)勢

①操作簡單、快速: 

均相檢測技術：無需洗板和包被，只需兩步加樣→檢測，1-2h快速檢測。

②反復讀板，信號穩(wěn)定:

實驗體系可支持反復讀值，過夜、48h后讀值亦可，如：1h，2h，4h，18h...適合預實驗摸索實驗條件。

③節(jié)省樣本：

實驗體系為20μl，樣本僅需15μl。

④高通量，兼容性強：

耗材：兼容94孔，384孔和1536孔微孔板，推薦使用潛孔板以獲得最佳窗口；

儀器：現(xiàn)售酶標儀，安裝有TR-FRET技術模塊均可檢測。

⑤嚴格驗證和篩選：

最優(yōu)的抗體對組合：全部抗體均從5~20對配對抗體中進行篩選后，進行專業(yè)嚴格驗證，以確定最終的抗體對。 

最大窗口：優(yōu)化供體、受體濃度得到最佳信噪比（S/B）。 

提供最適配的緩沖液和裂解液。

四、THUNDERTM TR-FRET細胞因子檢測試劑盒

THUNDER檢測細胞因子采用經(jīng)典雙抗夾心模型，抗體結合抗原后，用320/340nm光激發(fā)供體Eu，產(chǎn)生熒光共振能量轉移（FRET）后，進而激發(fā)受體產(chǎn)生665nm信號。信號強度與細胞因子濃度成正比。
 

取15μl樣本或標準品，加入空的微孔板中，再加入5μl的抗體Mix（供體抗體，受體抗體各2.5μl），孵育2h，酶標儀讀值。
 

熱門細胞因子/生物標志物檢測試劑盒：

五、THUNDERTM TR-FRET磷酸化/總蛋白檢測試劑盒

THUNDER檢測胞內磷酸化蛋白采用經(jīng)典雙抗夾心模型，抗體結合抗原后，用320/340nm光激發(fā)供體Eu，產(chǎn)生熒光共振能量轉移（FRET）后，進而激發(fā)受體產(chǎn)生665nm信號。信號強度與胞內蛋白磷酸化水平成正比。

第一步：細胞處理，需5分鐘或過夜，激動劑/抑制劑處理細胞；第二步：細胞裂解，15~60分鐘；第三步：檢測，加檢測抗體對，孵育1小時或過夜，酶標儀檢測。
 

熱門磷酸化與總蛋白試劑盒
 

六、THUNDERTM TR-FRET cAMP檢測試劑盒

THUNDER cAMP試劑盒采用競爭法檢測，Eu通過鏈霉親和素和生物素結合cAMP，受體FR-anti-cAMP特異性識別cAMP，當藥物作用于GPCR膜蛋白后，胞內產(chǎn)生cAMP會與FR-anti-cAMP抗體結合，競爭原有的信號，信號呈現(xiàn)倒S曲線，與cAMP濃度成反比。
 

首先進行細胞培養(yǎng)處理（給藥處理），細胞裂解后依次加入cAMP和檢測抗體對，孵育1小時，使用酶標儀進行檢測。
 

THUNDER cAMP檢測試劑盒：