對(duì)于您的超分辨成像研究，有什么比頂級(jí)質(zhì)量的一抗更好呢？這些一抗經(jīng)世界各地知名研究人員驗(yàn)證，結(jié)合高質(zhì)量染料，專門設(shè)計(jì)以完美滿足STED超分辨顯微鏡的特定要求。在這里，SYSY呈現(xiàn)了在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域中最廣泛使用的SYSY一抗系列，直接與匹配的abberior STAR染料偶聯(lián)，經(jīng)過(guò)優(yōu)化以適用于STED顯微鏡。

簡(jiǎn)介

揭示突觸的結(jié)構(gòu)和功能長(zhǎng)期以來(lái)取得了成功。然而，傳統(tǒng)顯微技術(shù)中的衍射限制了分辨率，從而限制了對(duì)突觸結(jié)構(gòu)和功能的洞察。超分辨顯微鏡技術(shù)實(shí)現(xiàn)了前所未有的精度，可以可視化突觸結(jié)構(gòu)。這種能力轉(zhuǎn)變了我們檢查突觸間隙、活躍區(qū)和 postsynaptic 密度內(nèi)蛋白質(zhì)的空間組織的能力，可以極為詳細(xì)地展示。它促進(jìn)了對(duì)分子水平上突觸組分的異質(zhì)性和動(dòng)態(tài)性的研究。

神經(jīng)遞質(zhì)/化學(xué)突觸的結(jié)構(gòu)

神經(jīng)元必須快速而準(zhǔn)確地傳遞信息；它們負(fù)責(zé)從我們身體各個(gè)部位，從腳趾尖到大腦，迅速傳遞信號(hào)，然后在大腦中處理這些信息。為了實(shí)現(xiàn)如此快速和精準(zhǔn)的溝通，突觸優(yōu)化其處理高需求和間歇信號(hào)處理的能力。

化學(xué)突觸是脊椎動(dòng)物中主要發(fā)現(xiàn)的一種突觸類型，是一個(gè)不連續(xù)的結(jié)構(gòu)，由一個(gè)突觸前神經(jīng)元和一個(gè)突觸后神經(jīng)元組成，它們之間被大約15-20納米寬的突觸間隙分隔。化學(xué)突觸中的信號(hào)傳遞是通過(guò)突觸囊循環(huán)進(jìn)行的。突觸囊和活躍區(qū)中發(fā)現(xiàn)的專門蛋白質(zhì)在協(xié)調(diào)突觸囊循環(huán)中起著關(guān)鍵作用。SNARE蛋白，如Syntaxin、Synaptobrevin和SNAP-25，參與了突觸囊與質(zhì)膜的融合。像Bassoon、Piccolo和RIM這樣的支架蛋白組織和招募突觸囊靠近質(zhì)膜。Synapsins通過(guò)與細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合幫助突觸囊的移動(dòng)，而complexins防止囊泡的自發(fā)融合。此外，CAPS（鈣激活分泌蛋白）促進(jìn)了鈣信號(hào)與突觸囊融合的耦合（Chua等，2010年；Jahn和Fasshauer，2012年）。

突觸后密度（PSD）是一個(gè)富含蛋白質(zhì)的特殊區(qū)域，對(duì)于接收來(lái)自突觸前神經(jīng)元的神經(jīng)遞質(zhì)信號(hào)并啟動(dòng)突觸后反應(yīng)至關(guān)重要。PSD中豐富的是神經(jīng)遞質(zhì)受體，每個(gè)突觸中主要由突觸前神經(jīng)元釋放的神經(jīng)遞質(zhì)決定。這種受體釋放的神經(jīng)遞質(zhì)配對(duì)決定了每個(gè)特定突觸的電學(xué)特性。此外，各類支架蛋白，如PSD-95、Shank和Homer，在錨定和組織信號(hào)分子、受體和結(jié)構(gòu)蛋白在突觸后密度中發(fā)揮關(guān)鍵作用（Takamori等，2006年；Chua等，2010年）。

突觸間隙主要充滿細(xì)胞外基質(zhì)和其他非蛋白成分。其中包括細(xì)胞粘附分子，如cadherins、integrins、neuroligins（存在于突觸后膜中）和neurexins（存在于突觸前膜中）。它們共同介導(dǎo)突觸粘附，并在突觸形成和功能中發(fā)揮作用。額外的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白如laminins、collagens和proteoglycans有助于組織和穩(wěn)定突觸連接（Dankovich和Rizzoli，2022年）。

顯微鏡技術(shù)的進(jìn)步，特別是超分辨技術(shù)，使我們能夠以驚人的細(xì)節(jié)觀察突觸。這些技術(shù)使科學(xué)家能夠觀察特定蛋白質(zhì)相互作用以及突觸和突觸囊的異質(zhì)性，大大加深了我們對(duì)這些復(fù)雜生物結(jié)構(gòu)的理解（Binotti等，2024年；Upmanyu等，2022年；Nishimune等，2016年；Willig等，2006年）。然而，許多突觸結(jié)構(gòu)和功能方面仍未解決。例如，前突觸活躍區(qū)（AZ）的精細(xì)結(jié)構(gòu)，分子簇的重要性以及突觸囊循環(huán)背后的動(dòng)態(tài)和分子機(jī)制仍未完全描述（Nosov等，2020年）。

STED顯微鏡

在納米級(jí)光顯微鏡技術(shù)出現(xiàn)之前，特別是STED（受激發(fā)射消融）顯微鏡技術(shù)的發(fā)展之前，研究人員受到傳統(tǒng)光顯微鏡的衍射限制。這個(gè)限制將分辨率限制在大約200-300納米橫向和約500-700納米軸向。STED顯微鏡的概念由Stefan Hell和Jan Wichmann于1994年提出，并于2000年進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證（Hell和Wichmann，1994年，Klar等，2000年）。STED顯微鏡基于傳統(tǒng)共焦激光掃描配置，但除了一個(gè)激發(fā)激光外，還包括一個(gè)第二個(gè)紅移和環(huán)形STED激光，其中心為零強(qiáng)度。這樣，除了環(huán)形中心的分子外，所有分子都被消融。這種配置確保了由中央光束激發(fā)的熒光分子會(huì)被STED光束迅速去激發(fā)，而來(lái)自STED環(huán)形中心的任何熒光則得以保留。熒光信號(hào)被銳化，達(dá)到了30-70納米的橫向分辨率。衍射屏障被突破。

成功進(jìn)行STED成像的先決條件

良好的成像結(jié)果取決于兩個(gè)條件：良好的熒光染料和特異性抗體。用于STED的理想熒光探針必須具備幾個(gè)關(guān)鍵屬性：對(duì)STED光束的響應(yīng)以實(shí)現(xiàn)高效去激發(fā)、優(yōu)化的吸收和發(fā)射光譜與STED系統(tǒng)中可用的激光線匹配、在反復(fù)激發(fā)和去激發(fā)循環(huán)中耐光漂白。為了實(shí)現(xiàn)最佳的STED成像效果，STED染料的先驅(qū)公司abberior提供了經(jīng)過(guò)特別優(yōu)化的熒光染料。以其卓越的光穩(wěn)定性、定制的光譜特性、高效的去激發(fā)能力、高量子產(chǎn)額、與生物樣品兼容性以及最小的背景噪音而聞名，abberior STAR ORANGE和STAR RED是775納米雙色STED的完美組合。 在STED顯微鏡中實(shí)現(xiàn)高空間分辨率，所使用的用于染色活體或固定樣本的抗體的選擇至關(guān)重要。SYSY抗體具有高特異性和親和力，使其成為您顯微鏡分析的精確而強(qiáng)大的工具。使用經(jīng)過(guò)充分表征的單克隆抗體，具有高特異性結(jié)合到單一抗原表位，可以減少染色模式的變異性，減少與其他蛋白質(zhì)或分子的交叉反應(yīng)的可能性。

直接偶聯(lián)的優(yōu)勢(shì)

與使用標(biāo)記的二抗間接標(biāo)記相比，直接偶聯(lián)顯示出一系列重大優(yōu)勢(shì)。除了消除對(duì)二抗的需求外，直接偶聯(lián)還減少了空間位阻，這在間接標(biāo)記中可能降低了一抗對(duì)靶標(biāo)的親和力和特異性。此外，通過(guò)減少非特異性二級(jí)結(jié)合到非靶蛋白（交叉反應(yīng)）的背景噪音，減少了熒光團(tuán)與抗原之間的距離，并防止多個(gè)二級(jí)抗體結(jié)合到單個(gè)一級(jí)抗體而掩蓋單個(gè)分子的空間排列（Früh等，2021年）。

Figure 3: 一抗的直接偶聯(lián)（一步，B）減少了空間位阻、熒光團(tuán)距離和表位掩蔽，這可能使用耗時(shí)的二抗兩步染色（A）發(fā)生。

使用與abberior STAR染料結(jié)合的SYSY原代抗體，進(jìn)一步提升您的STED顯微鏡體驗(yàn)。

SYSY抗體符合STED超分辨顯微鏡的特定要求。

引用：

Binotti et al., 2024: ATG9 resides on a unique population of small vesicles in presynaptic nerve terminals. PMID: 37881948

Chua et al., 2010: The architecture of an excitatory synapse. PMID: 20200227

Dankovich and Rizzoli, 2022: The Synaptic Extracellular Matrix: Long-Lived, Stable, and Still Remarkably Dynamic. PMID: 35350469

Früh et al., 2021: Site-Specifically-Labeled Antibodies for Super-Resolution Microscopy Reveal In Situ Linkage Errors. PMID: 34184536

Hell and Wichmann, 1994: Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission: stimulated-emission-depletion fluorescence microscopy. PMID: 19844443

Jahn and Fasshauer 2012: Molecular machines governing exocytosis of synaptic vesicles. PMID: 23060190

Klar et al., 2000: Fluorescence microscopy with diffraction resolution barrier broken by stimulated emission. PMID: 10899992

Nishimune et al., 2016: Dual-color STED microscopy reveals a sandwich structure of Bassoon and Piccolo in active zones of adult and aged mice. PMID: 27321892

Nosov et al., 2020: The Decade of Super-Resolution Microscopy of the Presynapse. PMID: 32848695

Takamori et al., 2006: Molecular anatomy of a trafficking organelle. PMID: 17110340

Upmanyu et al., 2022: Colocalization of different neurotransmitter transporters on synaptic vesicles is sparse except for VGLUT1 and ZnT3. PMID: 35263617

Willig et al., 2006: STED microscopy reveals that synaptotagmin remains clustered after synaptic vesicle exocytosis. PMID: 16612384