過去十年來，生物制劑越來越多地被用作治療藥物。對于抗體藥物偶聯(lián)物(Antibody-Drug Conjugates，ADC)，抗體的內(nèi)化是一種強(qiáng)有力的作用機(jī)制，可以使ADC從靶細(xì)胞質(zhì)膜上的結(jié)合位點(diǎn)轉(zhuǎn)移至溶酶體的裂解環(huán)境內(nèi)，從而激活與其相連的毒素。   

內(nèi)化過程的效率與ADC的治療指數(shù)直接相關(guān)，，提供便捷高效且易于使用的研究內(nèi)化的抗體標(biāo)記工具。   

上期我們介紹了基于生物毒素皂草素(ZAP)二級偶聯(lián)物的抗體內(nèi)化檢測方案：抗體內(nèi)化，抗體藥物篩選經(jīng)典方案（中文操作指南） 

今天我們給大家?guī)硪豢罨跓晒鈭蟾嫣结樀目贵w內(nèi)化檢測工具——pHast(替代pHrodo技術(shù))，pHast偶聯(lián)物是定量檢測抗體的特異性、結(jié)合情況和內(nèi)化水平的最快工具之一，可在1天內(nèi)獲得結(jié)果，pHast是一種pH依賴性熒光報告探針，這種熒光報告探針在胞外中性pH下幾乎無熒光，一旦內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞后可發(fā)出明亮的熒光。pHast于二抗形成pHast偶聯(lián)物，可以很方便的檢測抗體的內(nèi)化水平。  

pHast偶聯(lián)物檢測原理及應(yīng)用示例：

         我們可以提供不同種屬來源，完整IgG以及Fab片段的pHast綴合物：   

  除了抗體pHast偶聯(lián)物，同時我們還可以提供鏈霉親和素pHast偶聯(lián)物（PH-03）,鏈霉親和素pHast與生物素化蛋白結(jié)合，通過pH依賴性熒光報告探針（pHast）來檢測藥物內(nèi)化水平：

       引文賞析：

       Shramm PA, Ancheta L (2019) Streptavidin-pHast: A readily conjugatable, pH-sensitive dye to screen for internalization. Cancer Res 79(13 Suppl):2177. Proceedings of the American Association for Cancer Research Annual Meeting, Atlanta GA.

       Kinneer K, Meekin J, Tiberghien AC, Tai YT, Phipps S, Kiefer CM, Rebelatto MC, Dimasi N, Moriarty A, Papadopoulos KP, Sridhar S, Gregson SJ, Wick MJ, Masterson L, Anderson KC, Herbst R, Howard PW, Tice DA (2018) SLC46A3 as a potential predictive biomarker for antibody-drug conjugates bearing noncleavable linked maytansinoid and pyrrolobenzodiazepine warheads. Clin Cancer Res 24(24):6570-6582. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-18-1300

       Shramm PA, Ancheta L, Higgins D, Lappi DA (2017) A rapid, pH-sensitive screening method to detect internalization of cell surface markers for development of antibody-based pharmaceuticals to treat brain tumors. Neuroscience 2017 Abstracts 566.24 / H7. Society for Neuroscience, Washington, DC.

       Ancheta L, Shramm PA, Lappi DA (2017) Method for screening neuronal tumor cell surface markers for high specificity and rapid internalization as potential oncologic treatments. Neuroscience 2017 Abstracts 612.11 / SS46. Society for Neuroscience, Washington, DC.