脂肪酸（fatty acid，F(xiàn)A）是植物、動(dòng)物和微生物體內(nèi)脂質(zhì)（溶于脂肪的生物體內(nèi)組分）的重要成分。一般而言，脂肪酸由一條含有偶數(shù)個(gè)碳原子的直鏈組成，鏈的一端有氫原子，另一端有羧基（-COOH）,正是這個(gè)羧基使其成為酸（羧酸）。如果碳與碳之間的鍵都是單鍵，脂肪酸就是飽和的，如果其中任何一個(gè)鍵是雙鍵或三鍵，脂肪酸就是不飽和的。在自然界中脂肪酸不以游離狀態(tài)存在，通常它們與甘油結(jié)合形成甘油三酰的形式存在。脂肪酸是心臟和骨骼肌中用于維持收縮功能的主要燃料來(lái)源。為了滿足機(jī)體的能量需求，脂肪酸的攝取和β-氧化必須協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)，以確保線粒體β-氧化有足夠但不過(guò)量的供應(yīng)。  

圖1.位于線粒體外膜上的CPT1和位于線粒體內(nèi)膜上的CPT2在將長(zhǎng)鏈脂肪酸以酰基輔酶A形式運(yùn)輸?shù)骄€粒體基質(zhì)中的作用示意圖 

脂肪酸攝取

長(zhǎng)鏈脂肪酸(LCFA)作為β-氧化的底物是動(dòng)物重要的燃料來(lái)源，是許多不同細(xì)胞結(jié)構(gòu)的基石。長(zhǎng)鏈未酯化脂肪酸(LCFA)通過(guò)膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CD36、FABP等)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中，細(xì)胞中LCFA水平升高在糖尿病、肥胖相關(guān)疾病、心血管疾病和某些形式的癌癥中很常見(jiàn)。因此，脂肪酸攝取是代謝性疾病治療的重要靶點(diǎn)，也是代謝研究的重要課題。Assay Genie的基于細(xì)胞的脂肪酸攝取檢測(cè)試劑盒（cat#BA0184）利用熒光脂肪酸類似物，該類似物被脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白攝取并在細(xì)胞內(nèi)積累。加入熒光猝滅試劑以阻斷培養(yǎng)基中細(xì)胞外的熒光信號(hào)。細(xì)胞攝取脂肪酸類似物，通過(guò)檢測(cè)λex/em = 488/523nm處熒光信號(hào)的增加評(píng)估細(xì)胞中的脂肪酸攝取活性，并進(jìn)行激活劑和抑制劑的篩選。

圖2. 3T3-L1細(xì)胞脂肪酸攝取測(cè)定：將3T3-L1細(xì)胞以每孔60,000個(gè)細(xì)胞的密度接種，并進(jìn)行饑餓處理。左上方：在無(wú)胰島素和存在160 nM胰島素以及30 μM競(jìng)爭(zhēng)劑2-溴棕櫚酸酯的情況下，3T3-L1細(xì)胞的分化和未分化活性。右上方：3T3-L1脂肪細(xì)胞對(duì)胰島素的脂肪酸攝取增加。左下方：2-溴棕櫚酸酯的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)抑制曲線。抑制劑與工作試劑一起加入，而不是在30分鐘的預(yù)孵育期間加入。右下方：槲皮素的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)抑制曲線。抑制劑在運(yùn)行前孵育30分鐘。 

脂肪酸氧化

脂肪酸氧化（Fatty Acid Oxidation，F(xiàn)AO）是肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 1和2（CPT1和CPT2）將長(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體基質(zhì)后經(jīng)羥酰基輔酶a氧化為乙酰輔酶a、NADH和FADH2并生成能量的過(guò)程，脂肪酸氧化分為四步： 

1）酰基輔酶A脫氫酶催化脫氫反應(yīng)。

2）烯酰輔酶A水合酶催化水合作用，通過(guò)雙鍵添加水。 

3）3-羥酰基-輔酶A脫氫酶催化脫氫反應(yīng)，產(chǎn)生NADH。 

4）β-酮硫解酶催化硫酯裂解，裂解末端乙酰基輔酶A基團(tuán)并形成新的酰基輔酶 A，新酰基輔酶A比原酰基輔酶A短兩個(gè)碳原子。 

脂肪酸β-氧化系統(tǒng)在人類中的重要性通過(guò)一組稱為脂肪酸氧化障礙（FAODs）的遺傳疾病得到了體現(xiàn)。FAODs是一類脂肪酸運(yùn)輸和氧化缺陷的異質(zhì)性疾病群，以常染色體隱性遺傳方式傳遞，臨床表現(xiàn)范圍廣泛。此外，證據(jù)表明，胎兒發(fā)育期間對(duì)FAO活性的調(diào)節(jié)不僅對(duì)胎兒生命至關(guān)重要，而且對(duì)成年期的健康和疾病也有影響。因此，F(xiàn)AO活性的測(cè)量為許多疾病的病理生理和代謝基礎(chǔ)提供了有價(jià)值的見(jiàn)解。Assay Genie的非放射性FAO檢測(cè)試劑盒基于底物辛酰輔酶A的氧化反應(yīng)。產(chǎn)生的NADH與還原反應(yīng)產(chǎn)生的四唑鹽INT結(jié)合形成甲瓚。甲醛產(chǎn)物在492nm處表現(xiàn)出最大吸收，因此甲瓚的吸收強(qiáng)度與增加的FAO活性成正比。

圖3. 脂肪酸氧化檢測(cè):從健康倉(cāng)鼠心臟和與心力衰竭相關(guān)的TO2倉(cāng)鼠模型心臟制備組織裂解物。裂解物被用于測(cè)定，脂肪酸氧化水平被量化。

圖4. 脂肪酸氧化試檢測(cè)原理:辛烷酰輔酶a是底物，而不是反應(yīng)的產(chǎn)物。   

除了脂肪酸攝取和脂肪酸氧化檢測(cè)試劑盒，Assay Genie的游離脂肪酸檢測(cè)試劑盒提供了一個(gè)簡(jiǎn)單的，一步和高通量測(cè)定游離脂肪酸。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，游離脂肪酸被酶轉(zhuǎn)化為酰基輔酶a，隨后轉(zhuǎn)化為H₂O₂。所得的H₂O₂與特定的染料反應(yīng)形成粉紅色的產(chǎn)物。570nm處的光密度或熒光強(qiáng)度(530/585 nm)與樣品中游離脂肪酸濃度成正比。

Assay Genie是一家來(lái)自愛(ài)爾蘭的生物科研試劑供應(yīng)商，可提供超過(guò)180000種產(chǎn)品，產(chǎn)品種類豐富。公司主要有三條產(chǎn)品線：ELISA Genie，Assay Genie，Antibody Genie 。旗下涵蓋了15種種屬的高品質(zhì)的ELISA試劑盒及多種抗體，可檢測(cè)的指標(biāo)種類豐富，覆蓋免疫、代謝和分子等多種研究領(lǐng)域，是科學(xué)研究中便捷的小助手。