Sephadex G25 是以葡聚糖為基質(zhì)的凝膠過濾層析介質(zhì)，其工作原理主要是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的葡聚糖凝膠分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)不同分子大小進(jìn)行分離篩選。層析時(shí)，大于凝膠孔徑的大分子，被阻于凝膠相外，沿著凝膠顆粒之間的間隙走，下移速度最快，故最先洗脫下來，中分子物質(zhì)部份進(jìn)入凝膠內(nèi)部，洗脫速度為其次，而小分子物質(zhì)因全部進(jìn)入凝膠，受到阻力最大，故最后被洗脫下來。Sephadex G25葡聚糖層析介質(zhì)分離范圍為1～5kD(球形蛋白)，主要用于多肽的分離以及大分子蛋白質(zhì)的脫鹽和緩沖液替換。   

脫鹽介質(zhì)&脫鹽柱

備注：按凝膠介質(zhì)粒徑不同，Sephadex G25系列介質(zhì)可分為四類，分別為：Sephadex G25粗， Sephadex G25中等，Sephadex G25細(xì)和 Sephadex G25超細(xì)，上表的Sephadex G25屬于Sephadex G25（M）中等。  

產(chǎn)品特性

層析色譜圖如下：

應(yīng)用實(shí)例 

色譜柱：XK16/30脫鹽柱，柱床高度25 cm。

平衡緩沖液：20 mM PB+150 mM NaCl pH 7.0，0.45 μm濾膜過濾。

流速：2 mL/min。

柱平衡：將色譜柱連接至純化儀器，使用平衡緩沖液沖洗脫鹽柱 2-3 倍柱體積（Column Volume，以下簡稱 CV）。

加載樣品：某蛋白樣品，上樣體積為1 mL。為盡可能增加層析柱的使用壽命，樣品上樣前須進(jìn)行澄清處理，如 10000 g 離心10min 或0.45um 濾膜過濾。

洗脫：使用平衡緩沖液沖洗脫鹽柱 2 CV 以上，使用流速不要超過推薦的最大流速。 

使用方法 

Sephadex G25 系列介質(zhì)常用于蛋白溶液的脫鹽、緩沖液交換和不同分子量蛋白的分離等。 

根據(jù)不同的用途其上樣量也不盡相同，進(jìn)行緩沖液置換或脫鹽時(shí)最高可上樣 20%柱體積。

1、 介質(zhì)溶脹 

以干態(tài)供應(yīng)的 Sephadex G25 系列介質(zhì)，使用前必須在過量的溶液中充分溶脹，如 10 g 介質(zhì)溶脹時(shí)加入 100-150 mL 水，溶脹 3 h 以上。沸水浴可加速溶脹速度（如 90℃ 1 h 即可），但要避免劇烈攪拌，以防凝膠破碎。

2、 層析柱填裝 膠懸液的準(zhǔn)備：

計(jì)算所需溶脹介質(zhì)的量（柱床體積為 1 L 時(shí)所需 100%沉降膠約為 1.15 kg）。（例如：裝填 16/20 柱，柱床高度 10 cm，所需溶脹介質(zhì)的量為 π×(1.6/2)2×10×1.15=23.11 g 稱取 23.11g介質(zhì)于干凈燒杯中，加入一定量（如 12 mL）的裝柱溶液，攪拌使其形成均勻的膠懸液。）

裝柱： 

1）檢查層析柱，確保各部件完整、干凈。安裝下柱頭，擰緊 O 型圈后，將層析柱垂直固 定在鐵架臺(tái)上，用水平儀檢查并調(diào)整，使層析柱保持水平。 

2）層析柱中加入適量的裝柱溶液，以除去柱子中的空氣。擰上底部的堵頭，柱內(nèi)保留 1-2 cm高度的裝柱溶液。 

3）用玻璃棒緊靠柱內(nèi)壁引流，將膠懸液連續(xù)倒入層析柱中，以減少氣泡的產(chǎn)生。介質(zhì)自然沉降至體積不再變化，此時(shí)介質(zhì)和溶液出現(xiàn)分層，上層溶液完全澄清。 

4）連接上柱頭至低壓層析系統(tǒng)，開泵以一定流速排出管路中殘留的空氣，暫停系統(tǒng)，將上柱頭安裝至層析柱上，柱頭下端距離膠面約 1 cm，擰緊 O 型圈，開泵以 300-500 cm/h 流速壓柱至柱床體積不再變化，繼續(xù)壓柱 5-10 min，用記號(hào)筆標(biāo)定膠面所在位置。 

5）暫停系統(tǒng)，擰上底部的堵頭，使層析柱上端和泵斷開，向下轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)桿，至記號(hào)處以 下 0-0.5 cm 停止，擰上上端堵頭。裝柱完成。

3、 清洗及再生 

在位清洗：為除去變性蛋白、脂蛋白或脂質(zhì)，需要對(duì)介質(zhì)進(jìn)行在位清洗。常用的清洗液為 0.2 M NaOH 或非離子型去垢劑，清洗 2-3 CV。

4、 保存條件 

20%乙醇或 0.01 M NaOH，室溫保存。   

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