Biogradetech：泛素化蛋白-親和磁珠

背景 

泛素是一種小的多肽，可以通過其C-末端與目標蛋白質上的賴氨酸殘基的胺基團結合。這種結合被稱為單泛素化。額外的泛素結構可以通過泛素中存在的七個賴氨酸殘基之一與初始泛素結合。這些泛素鏈的形成被稱為多泛素化。泛素化是一種常見的調節蛋白的穩定性和功能的翻譯后修飾。 

蛋白的泛素化需要3種酶的參與，分別是泛素活化酶（ubiquitin-activating enzyme，E1）、泛素偶聯酶（ubiquitin conjugation enzyme，E2）和泛素連接酶（ubiquitin ligase，E3）。在3種酶的作用下，泛素（ubiquitin，ub）分子的C端羧基與底物蛋白賴氨酸（Lys）殘基的?氨基形成酰胺異構肽。同時，泛素也能發生泛素化修飾形成不同的泛素鏈，而不同的泛素鏈又介導不同的生物功能。泛素化修飾不僅參與底物蛋白的26S蛋白酶體降解過程，還參與基因轉錄、細胞周期、DNA損傷和免疫應激等生物過程。 

大規模富集泛素聚合物是研究泛素化系統的關鍵技術。傳統的泛素化蛋白質表征策略通常需要使用表位標簽對過表達的泛素進行免疫沉淀，或使用泛素抗體（適用于大規模研究，但成本較高）。另一種方法是使用特定的泛素結合相關結構域（UBA）來分離多泛素化蛋白質，但這些蛋白質對泛素的親和力較低。此外，這些策略需要包含去泛素化酶和蛋白酶體活性的抑制劑，以保護多泛素化蛋白質的完整性，這些條件可能會改變細胞生理狀態，從而可能對結果產生負面影響或引入實驗誤差。  

Biogradetech開發了串聯泛素親和磁珠系列產品來克服這些問題，串聯泛素親和磁珠本質上是串聯的UBA，其與四聚泛素的解離常數在納摩爾范圍內。實驗證明，即使在沒有抑制劑的情況下，它也能保護蛋白質免受去泛素化和蛋白酶體介導的降解的影響。其對多泛素化蛋白質的納摩爾親和力使得從細胞系和組織中高效分離和表征這些蛋白質成為可能。該系列產品的優越性使其能夠高效檢測多泛素化蛋白質的天然狀態，而其多功能性則滿足了廣泛的實驗需求。 

串聯泛素親和磁珠是將串聯的UBA結構域直接耦合到磁珠上，用于通過免疫印跡和/或下游蛋白質組學研究來鑒定和表征多泛素化蛋白質。串聯泛素親和磁珠方便地實現了多泛素化蛋白質的“一步式”下拉純化。   

產品優勢： 

1.可快速有效的實現泛素化蛋白的富集和純化 

2.相較于單個UBA結構域，對多泛素化蛋白質具有高達1000倍的親和力 

3.與泛素抗體相比有更高的特異性和親和力 

4.保護蛋白質不被去泛素化，同時可避免靶蛋白發生蛋白酶體介導的降解

5.避免過度表達帶表位標簽的泛素進行下拉純化 

6.磁珠使得下拉純化更加高效，并且背景信號更低

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