脂多糖（LPS），也稱為脂多糖，是由脂質(zhì)和多糖通過共價鍵連接而成的大分子；它們存在于革蘭氏陰性細(xì)菌的外膜中，作為內(nèi)毒素，能在動物中引起強烈的免疫反應(yīng)。LPS是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，對細(xì)菌的結(jié)構(gòu)完整性貢獻(xiàn)巨大，保護膜免受某些類型的化學(xué)攻擊。LPS還增加了細(xì)胞膜的負(fù)電荷，有助于穩(wěn)定整體膜結(jié)構(gòu)。它對革蘭氏陰性細(xì)菌至關(guān)重要，如果發(fā)生變異或被移除，它們將死亡。LPS是一種內(nèi)毒素，能引起正常動物免疫系統(tǒng)的強烈反應(yīng)。它還涉及細(xì)菌生態(tài)學(xué)的非致病方面，包括表面粘附、噬菌體敏感性和與捕食者（如阿米巴）的相互作用。LPS對于Omptin活性的正確構(gòu)象是必需的；然而，平滑LPS會立體阻礙omptins。LPS作為典型的內(nèi)毒素，因為它結(jié)合了CD14/TLR4/MD2受體復(fù)合物，這促進(jìn)了多種細(xì)胞類型中促炎細(xì)胞因子的分泌，尤其是在巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞中。在免疫學(xué)中，“LPS挑戰(zhàn)”一詞指的是將受試者暴露于可能作為毒素的LPS的過程。LPS也是一種外源性致熱原（外部發(fā)熱誘導(dǎo)物質(zhì)）。由于對革蘭氏陰性細(xì)菌至關(guān)重要，這些分子成為新抗菌劑的候選靶點。

熱苯酚水提取法通常用于提取LPS，但耗時長，程序復(fù)雜。當(dāng)我們試圖操縱如此少量的細(xì)胞時，該方法有主要局限性。LPS提取試劑盒旨在快速、方便地從細(xì)菌細(xì)胞中微量提取LPS，廣泛適用于不同的革蘭氏陰性細(xì)菌，適用于少量細(xì)胞。

第1步：裂解

細(xì)菌細(xì)胞通過有機溶液裂解。細(xì)胞膜的磷脂和蛋白質(zhì)組分被破壞，細(xì)胞組分釋放到溶液中。

第2步：LPS純化

在高鹽濃度溶液中純化LPS。

第3步：洗滌和洗脫

通過洗滌步驟短暫去除鹽分，以獲得高質(zhì)量的LPS。

作為Alpha Diagnostic International（ADI）在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦Alpha Diagnostic International（ADI）熱銷產(chǎn)品細(xì)菌脂多糖 （LPS） 提取試劑盒（最多 50 個樣品）。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

細(xì)菌脂多糖 （LPS） 提取試劑盒（最多 50 個樣品）使用前的注意事項

1. LPS提取的產(chǎn)量與培養(yǎng)體積的增加成正比。當(dāng)使用5毫升培養(yǎng)物時，LPS的產(chǎn)量最大。我們不推薦處理超過5毫升的細(xì)菌培養(yǎng)物。如果使用過量的培養(yǎng)體積，裂解將效率低下，產(chǎn)量將減少，細(xì)胞蛋白對LPS的污染將增加。通常，最佳培養(yǎng)體積為2毫升，OD為0.8-1.2。

2. 要從細(xì)菌細(xì)胞中獲得更高純度的LPS，按照以下程序用蛋白酶K處理提取的LPS。

LPS提取程序

步驟

1. 在室溫下以13,000rpm離心，收集2-5毫升的細(xì)菌細(xì)胞。

注意：去除所有上清痕跡。對于沉淀的細(xì)胞，在使用前通過反復(fù)敲擊管子徹底松動細(xì)胞團。細(xì)胞團未完全松動可能導(dǎo)致裂解效率低下和產(chǎn)量減少。

2. 加入1毫升裂解緩沖液并劇烈渦旋。注意：為了提高細(xì)菌細(xì)胞的裂解，直到細(xì)胞團消失為止，要劇烈渦旋。

3. 加入200微升氯仿后，劇烈渦旋10-20秒。并在室溫下孵育5分鐘。注意：在渦旋前觀察管子。當(dāng)加入氯仿時，會看到一條白線在上層（藍(lán)色層）下方形成，因為氯仿層向下移動。這個區(qū)域包含細(xì)胞碎片、蛋白質(zhì)和基因組DNA和RNA的混合部分。加入氯仿的目的是將苯酚層與水層分離，最終分離RNA和基因組DNA/蛋白質(zhì)。

4. 在4℃下以13,000rpm離心10分鐘。將400微升上清轉(zhuǎn)移到新的1.5毫升管中。

注意：在吸取上層時，注意不要形成任何白色沉淀。

5. 加入800微升純化緩沖液并混合均勻。在-20℃下孵育10分鐘。注意：這一步的目的是純化LPS，使其與其他細(xì)胞提取物（例如蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等）分離。

6. 在4℃下以13,000rpm離心溶液15分鐘后，去除上層以獲得LPS沉淀。

7. 加入1毫升70%乙醇，通過倒置管子2-3次洗滌LPS沉淀。在4℃下以13,000rpm離心混合物3分鐘。丟棄上層并干燥剩余的LPS沉淀。注意：這是洗滌階段，以去除鹽分等雜質(zhì)。在室溫下干燥沉淀。

8. 向LPS沉淀中加入30-50微升10mM Tris-HCl緩沖液（pH 8.0），并通過渦旋或吸取使其溶解。并通過煮沸2分鐘完全溶解LPS。

注意：要從細(xì)菌細(xì)胞中獲得更高純度的LPS，用蛋白酶K處理提取的LPS。每1微克LPS處理2.5微克蛋白酶K，并在50℃下孵育30分鐘。

Alpha Diagnostic International（ADI）公司于1993年成立， 是一家美國私營生物技術(shù)公司，總部位于德克薩斯州圣安東尼奧，具有USDA認(rèn)證的動物試驗設(shè)施。公司致力于開發(fā)、制造和供應(yīng)新型診斷和質(zhì)量控制試劑及檢測試劑盒，用于人類和動物的基礎(chǔ)生物學(xué)和疾病研究。同時，還提供多肽合成定制服務(wù)和多抗產(chǎn)品以及其他抗體相關(guān)服務(wù)，例如純化親和素，酶耦聯(lián)物，染料，熒光染料等。ADI旨在準(zhǔn)確了解科學(xué)研究人員和診斷測試界的需求，并迅速提供有效的解決方案，成為科學(xué)界值得信賴的創(chuàng)新試劑和解決方案提供商。

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