在神經(jīng)科學(xué)研究中，準(zhǔn)確識別和定位抑制性神經(jīng)元及其突觸結(jié)構(gòu)是理解中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能環(huán)路的基礎(chǔ)。囊泡性GABA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（VGAT）是目前公認(rèn)的最可靠的抑制性神經(jīng)末梢標(biāo)志物，而基于該靶點(diǎn)開發(fā)的抗體工具直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本文介紹的由艾美捷代理Synaptic Systems推出的VGAT抗體（Cat. No. 131 308）是一種經(jīng)過優(yōu)化的嵌合重組抗體，在保留經(jīng)典單克隆抗體特異性的同時(shí)，提升了實(shí)驗(yàn)操作的兼容性。

一、靶點(diǎn)生物學(xué)意義：為何選擇VGAT

VGAT，又稱囊泡性抑制性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（VIAAT），是負(fù)責(zé)將GABA和甘氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入突觸囊泡的關(guān)鍵蛋白。與位于質(zhì)膜上的神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體不同，VGAT定位于突觸囊泡膜，利用囊泡膜兩側(cè)的質(zhì)子電化學(xué)梯度驅(qū)動底物轉(zhuǎn)運(yùn)，從而實(shí)現(xiàn)抑制性遞質(zhì)在突觸前末梢的儲存與定量釋放。

在哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，抑制性突觸傳遞主要依賴GABA能或甘氨酸能神經(jīng)元。由于目前尚未發(fā)現(xiàn)其他功能性異構(gòu)體，VGAT已成為識別這兩類抑制性神經(jīng)末梢的通用且特異的分子標(biāo)志物。無論是用于突觸亞細(xì)胞定位、抑制性環(huán)路示蹤，還是病理狀態(tài)下抑制性突觸可塑性的研究，高質(zhì)量的VGAT抗體都是不可或缺的研究工具。

二、產(chǎn)品設(shè)計(jì)與技術(shù)優(yōu)勢

該抗體（克隆號Gp117G4）基于經(jīng)典的鼠單克隆抗體117G4改造而來，是一種嵌合重組抗體。其重鏈和輕鏈的恒定區(qū)被替換為豚鼠特異性序列，而抗原結(jié)合的可變區(qū)保持不變。這一設(shè)計(jì)帶來以下優(yōu)勢：

1. 兼容性提升：改造后的抗體可兼容標(biāo)準(zhǔn)的抗豚鼠二抗體系，為免疫組化、免疫細(xì)胞化學(xué)等基于二抗檢測的實(shí)驗(yàn)提供了更多選擇，尤其適合多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中需與小鼠來源抗體進(jìn)行區(qū)分的場景。

2. 重組表達(dá)體系：抗體在哺乳動物細(xì)胞中重組表達(dá)，避免了雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的批次間差異，確保產(chǎn)品的一致性與可重復(fù)性。

3. 敲除驗(yàn)證：產(chǎn)品經(jīng)過基因敲除（K.O.）驗(yàn)證，證明其識別特異性，排除了與非靶蛋白的交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)，這是抗體質(zhì)量控制的關(guān)鍵標(biāo)準(zhǔn)。

三、產(chǎn)品規(guī)格與儲存條件

產(chǎn)品以凍干粉形式提供，每管含50 g純化的重組IgG。配方中添加了白蛋白和疊氮鈉以維持穩(wěn)定性。凍干狀態(tài)下應(yīng)儲存于+4℃，切勿冷凍。使用前需用50 l無菌水復(fù)溶，得到濃度為1 mg/ml的TBS緩沖液體系，之后可分裝保存于-20℃至-80℃。分裝后可避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的效價(jià)下降，分裝后的工作液建議在短期內(nèi)使用完畢。

四、應(yīng)用驗(yàn)證與推薦稀釋比例

該抗體在多種檢測體系中均通過驗(yàn)證，具體推薦稀釋比例如下：

免疫印跡（WB）：1:1000，采用堿性磷酸酶（AP）染色體系。需特別注意，為避免蛋白質(zhì)聚集，樣本在SDS-PAGE前不應(yīng)進(jìn)行加熱處理。這是因?yàn)閂GAT蛋白在加熱條件下可能形成聚集體，影響電泳分離和抗體識別。

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）：1:500，適用于培養(yǎng)細(xì)胞中VGAT的定位分析。

免疫組織化學(xué)（IHC）：1:500，適用于冷凍切片的常規(guī)免疫組化染色。

石蠟切片免疫組化（IHC-P）：1:400，適用于福爾馬林固定、石蠟包埋組織的抗原檢測。

上述稀釋比例為起始優(yōu)化推薦值，實(shí)際實(shí)驗(yàn)中可根據(jù)樣本豐度、固定條件、檢測系統(tǒng)靈敏度等因素進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。

五、種屬反應(yīng)性與免疫原信息

該抗體識別位于大鼠VGAT氨基末端附近的一段合成肽段（對應(yīng)UniProt ID O35458）。經(jīng)驗(yàn)證，其可檢測人類（Q9H598）、大鼠（O35458）、小鼠（O35633）、豚鼠及猿類的VGAT蛋白，涵蓋主要嚙齒類動物模型及人類樣本，為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究提供了跨種屬應(yīng)用的便利。

ICC文獻(xiàn)：

MAD2B promotes podocyte injury through regulating Numb-dependent Notch 1 pathway in diabetic nephropathy.

Li MR, Lei CT, Tang H, Yin XJ, Hao Z, Qiu Y, Xie YR, Zeng JY, Su H, Zhang C

International journal of biological sciences (2022) 185: 1896-1911. 131 308 ICC; tested species: rat

The synaptic scaffold protein MPP2 interacts with GABAA receptors at the periphery of the postsynaptic density of glutamatergic synapses.

Schmerl B, Gimber N, Kuropka B, Stumpf A, Rentsch J, Kunde SA, von Sivers J, Ewers H, Schmitz D, Freund C, Schmoranzer J, et al.

PLoS biology (2022) 203: e3001503. 131 308 ICC; tested species: rat

IHC文獻(xiàn)：

Repetitive concussions promote microglia-mediated engulfment of presynaptic excitatory input associated with cognitive dysfunction.

Chahin M, Mutschler J, Dzhuleva SP, Dieterle C, Jimenez LR, Bhattarai SR, Van Steenbergen V, Bareyre FM

Communications biology (2025) 81: 335. 131 308 IHC; tested species: mouse

Astrocyte specification in the mouse septum is shaped by both developmental origin and local signals.

Xie Y, Reid CM, Turrero Garc?a M, Dale-Huang F, Granados AA, Lu Y, Li J, Hanson SM, Mancia Leon WR, Liu J, Adam M, et al.

Nature neuroscience (2025) 288: 1676-1687. 131 308 IHC; tested species: mouse