次氯酸根陰離子（ClO-）及其質(zhì)子化形式次氯酸（HClO）是生物系統(tǒng)中的關(guān)鍵活性氧（ROS）。次氯酸鹽（次氯酸）的不受控制的產(chǎn)生會導(dǎo)致組織損傷和疾病，包括關(guān)節(jié)炎、腎功能衰竭和癌癥。此外，次氯酸鈉（NaClO）已被廣泛用作漂白劑，用于我們?nèi)粘Ｉ钪械谋砻媲鍧崱⒊艉退尽＝佑|大量次氯酸鈉會導(dǎo)致中毒，癥狀包括嚴重的呼吸問題、胃部刺激、皮膚和眼睛發(fā)紅和疼痛。因此，對次氯酸鹽（次氯酸）的高選擇性和高靈敏度檢測具有毒理學(xué)和環(huán)境重要性。Amplite?比色次氯酸鹽（次氯酸）檢測試劑盒提供了一種靈敏的基于吸收的檢測方法，用于高特異性地測量次氯酸鹽。在與次氯酸鹽（次氯酸鹽）發(fā)生選擇性反應(yīng)后，無色Oxirite?次氯酸鹽傳感器會產(chǎn)生強烈的顏色產(chǎn)物。顏色信號可以通過吸收微孔板閱讀器在~580nm處測量。使用此比色次氯酸（次氯酸）檢測試劑盒，可以檢測到痕量的次氯酸鹽。

艾美捷AAT Bioquest-Amplite比色次氯酸(次氯酸)檢測試劑盒（#13845）方案概要：

1. 準備次氯酸工作溶液（50 ?L）

2. 添加次氯酸標準品或待測樣品（50 ?L）

3. 在室溫下孵化3-5分鐘

4. 在OD為555 ± 5 nm時監(jiān)測吸光度增加

重要?在實驗開始前，在室溫下解凍每個試劑盒組分的一個小瓶。

儀器：吸光度微孔板讀取器

吸光度：555 ± 5 nm

推薦板：透明底部

圖：使用Amplite比色次氯酸/次氯酸檢測試劑盒在96孔透明底板中測量次氯酸鹽。孵育3-5分鐘后檢測到低至0.5uM的次氯酸鈉（NaClO）。

樣品實驗方案：

表1. 在96孔透明底部微孔板中次氯酸標準品和待測樣品的布局。H = 次氯酸標準品（H1 - H7，0.001%至1%），BL = 空白對照，TS = 待測樣品。

BL BL TS TS

H1 H1 ... ...

H2 H2 ... ...

H3 H3    

H4 H4    

H5 H5    

H6 H6    

H7 H7    

表2. 每個孔的試劑組成。

孔 體積 試劑

H1-H7 50 ?L 系列稀釋（0.001%至1%）

BL 50 ?L 測定緩沖液（組分B）

TS 50 ?L 待測樣品

如表1和表2所示，在96孔透明底部微孔板中準備次氯酸標準品（H）、空白對照（BL）和待測樣品（TS）。對于384孔板，每個孔使用25 ?L試劑代替50 ?L。

向次氯酸標準品、空白對照和待測樣品的每個孔中添加50 ?L次氯酸工作溶液，使每個孔的次氯酸測定總體積為100 ?L。對于384孔板，每個孔中添加25 ?L工作溶液，總體積為50 ?L/孔。

在避光的條件下，室溫下孵化反應(yīng)3-5分鐘。

使用吸光度板讀取器在OD = 555 ± 5 nm時監(jiān)測吸光度增加。

部分文獻參考：

Concentration-dependent effect of sodium hypochlorite on stem cells of apical papilla survival and differentiation

Authors: Martin DE, De Almeida JF, Henry MA, Khaing ZZ, Schmidt CE, Teixeira FB, Diogenes A.

Journal: J Endod (2014): 51

Effect of hypochlorite oxidation on cholinesterase-inhibition assay of acetonitrile extracts from fruits and vegetables for monitoring traces of organophosphate pesticides

Authors: Kitamura K, Maruyama K, Hamano S, Kishi T, Kawakami T, Takahashi Y, Onodera S.

Journal: J Toxicol Sci (2014): 71

A simple yet effective chromogenic reagent for the rapid estimation of bromate and hypochlorite in drinking water

Authors: Zhang J, Yang X.

Journal: Analyst (2013): 434

Use of pyrogallol red and pyranine as probes to evaluate antioxidant capacities towards hypochlorite

Authors: Perez-Cruz F, Cortes C, Atala E, Bohle P, Valenzuela F, Olea-Azar C, Speisky H, Aspee A, Lissi E, Lopez-Alarcon C, Bridi R.

Journal: Molecules (2013): 1638

Effect of hypochlorite-based disinfectants on inactivation of murine norovirus and attempt to eliminate or prevent infection in mice by addition to drinking water

Authors: Takimoto K, Taharaguchi M, Sakai K, Takagi H, Tohya Y, Yamada YK.

Journal: Exp Anim (2013): 237

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