磷酸二酯酶（PDEs）在通過水解作用動態(tài)調(diào)節(jié)第二信使cAMP（環(huán)狀腺苷酸）和cGMP（環(huán)狀鳥苷酸）的信號傳導中發(fā)揮著重要作用。PDE超家族由11個家族組成，其中PDE4、7和8是cAMP特異性水解酶，從而調(diào)節(jié)對cAMP的正向和負向反應(yīng)。PDE5在多種組織中表達，如肺、腦、腎、心肌細胞、血小板和陰莖海綿體。它通過磷酸化激活，并通過亞硝基化靶向降解。PDE5在血管張力、視覺、腎和腸道功能、蠕動、細胞生長和凋亡、癌癥等方面發(fā)揮著作用。其功能使其成為藥物干預的首選靶點。抑制劑的開發(fā)，主要是針對催化結(jié)構(gòu)域的競爭性抑制劑，促成了西地那非、他達拉非、伐地那非和阿伐那非的商業(yè)化，這些藥物用于治療勃起功能障礙、肺動脈高壓和下尿路癥狀（LUTS）。PDE5抑制劑還顯示出作為癌癥治療的潛力，當在結(jié)直腸癌（CRC）術(shù)后使用PDE5抑制劑時，轉(zhuǎn)移風險降低。繼續(xù)了解PDE5的作用以及開發(fā)新的特異性治療工具，將為PDE5相關(guān)疾病開辟新的治療途徑。

PDE5A1檢測試劑盒是一種熒光偏振（FP）均相384孔板試劑盒，專為篩選和鑒定PDE5A1（磷酸二酯酶5A1）抑制劑而設(shè)計。該試劑盒利用了一種特定的熒光磷酸鹽結(jié)合納米顆粒。試劑盒包含足夠用于400次反應(yīng)的純化重組PDE5A1、熒光探針、PDE檢測緩沖液、結(jié)合劑和稀釋液。

檢測使用了標記有熒光素的環(huán)狀鳥苷酸單磷酸（cGMP-FAM用于PDE5A1），其中磷酸基團嵌入在環(huán)狀核苷酸中。這是一種非常小的分子，旋轉(zhuǎn)速度快（FP值低）。PDE5A1催化環(huán)狀核苷酸中磷酸二酯鍵的水解，釋放出磷酸基團。在第二步中，自由的磷酸基團被一種特定的磷酸鹽結(jié)合納米珠（結(jié)合劑）識別，形成一個大復合物，其運動受到限制（FP值高）。FP值與PDE5A1活性成正比。

該檢測需要一臺能夠測量熒光偏振（FP）的熒光微孔板讀取儀，并配備用于讀取FP信號的必要部件。如需了解更多關(guān)于FP技術(shù)的信息，請訪問我們的技術(shù)說明：FP、檢測原理及應(yīng)用。

艾美捷BPS Bioscience-PDE5A1檢測試劑盒：

貨號：60351

試劑盒格式：熒光偏振

物種：人類

產(chǎn)品形式：試劑盒包含足夠用于400次反應(yīng)的純化重組PDE5A1、熒光探針、PDE檢測緩沖液、結(jié)合劑和稀釋液。

儲存/穩(wěn)定性：如果按照說明儲存，該試劑盒在收到之日起6個月內(nèi)可達到最佳性能。

應(yīng)用范圍：用于研究酶動力學，并在高通量篩選（HTS）應(yīng)用中篩選小分子抑制劑以助力藥物發(fā)現(xiàn)。

運輸溫度：-80°C

科學分類：磷酸二酯酶

僅限研究使用

禁忌事項：

檢測中DMSO的最終濃度不應(yīng)超過1%。

具有熒光特性的化合物可能會根據(jù)其光譜激發(fā)和發(fā)射特性干擾檢測結(jié)果。

建議單獨測試化合物，以確定其是否會對檢測結(jié)果產(chǎn)生潛在干擾。

檢測結(jié)果示例：

圖：PDE5A1與不同濃度的伐地那非（#27776）在300 nM FAM-環(huán)狀-3'，5'-GMP底物存在下孵育。使用Tecan M1000熒光微孔板讀取儀測量熒光偏振，該儀器配備用于FP的裝置。結(jié)果以活性百分比表示，其中無抑制劑（陽性對照）時的FP值設(shè)為100%。

文獻參考：

Ahmed W., et al., 2021 Biomedicine & Pharmacotherapy 134:111128.

Huang W., et al., 2020 Nat Commun 11:3191.