抗甲型肝炎ELISA是一種檢測甲型肝炎抗體的酶免疫測定法人血清中的病毒。僅供研究使用。不用于診斷程序。

艾美捷抗-HAV ELISA定性/定量（22-HAVHU-E01）檢測原理：

抗HAV ELISA是一種假性競爭酶免疫測定。血清或血漿樣品被加入到預(yù)先涂有滅活HAV抗原的微孔板孔中，并在37°C下孵育2小時(shí)。抗-HAV抗體與抗原結(jié)合。然后加入結(jié)合物（過氧化物酶標(biāo)記的抗-HAV），并在37°C下再次孵育1小時(shí)。抗原的自由結(jié)合位點(diǎn)被結(jié)合物結(jié)合。多余的結(jié)合物從板上洗去，加入底物并在室溫下孵育30分鐘。結(jié)合的結(jié)合物將底物的顏色改變?yōu)樗{(lán)色。通過加入終止液來終止反應(yīng)。顏色變?yōu)辄S色。在微孔板讀取器上測量有色反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度。吸光度與抗-HAV滴度成反比。用于定量測定時(shí)，請使用所包含的血清標(biāo)準(zhǔn)品來準(zhǔn)備滴定曲線。

結(jié)果評估：

首先，使用選定的參考波長（>590 nm）確定的吸光度從450 nm的每個(gè)吸光度值中減去，無論選擇的評估方法如何。之后，從所有值中減去空白的吸光度（A1/A2）。得到的測量值是所有進(jìn)一步分析的基礎(chǔ)。

抗-HAV ELISA定性/定量測試分析：

為了在人血清樣品中定性測定抗-HAV抗體，產(chǎn)品開發(fā)過程中創(chuàng)建了一種方法，該方法能夠以98.3%（n=801）的靈敏度區(qū)分陽性和陰性樣品。為此，根據(jù)以下公式從陽性對照和陰性對照的信號計(jì)算截止值：

截止值 = （陽性對照的平均吸光度 + 陰性對照的平均吸光度） / 2

平均吸光度值高于截止值的樣品為陰性。

吸光度值低于截止值的樣品為陽性。吸光度在截止值的±10%附近的樣品應(yīng)重新測定。

表1顯示了一個(gè)示例性測試結(jié)果。陰性和陽性對照之間的吸光度差異大于0.4（1.390至0.24）。截止值的計(jì)算結(jié)果如下：

截止值 = (NK + PK) / 2 = (1.390 + 0.024) / 2 = 0.707

因此，截止值是0.707。這樣，所有信號高于這個(gè)值的樣品被歸類為陰性（不含抗-HAV抗體），所有信號低于0.707的樣品被評估為陽性（含抗-HAV抗體）。

血清樣品1的吸光度大于截止值，因此它是陰性的。血清樣品2的吸光度小于截止值，因此它是陽性的。血清樣品3的吸光度在0.778 - 0.636（0.707的±10%）范圍內(nèi)，必須在上述示例中重復(fù)測定。

表1：定性抗-HAV測定結(jié)果示例。

測試有效，因?yàn)榉弦韵聴l件：

陰性對照（NK）和陽性對照（PK）之間的消光差>0.4

半定量測試分析：

抗體滴度計(jì)算

除了使用定義的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算抗體含量（mIU/mL）外，還可以通過測定抗體滴度進(jìn)行半定量分析。在這種ELISA中，使用不同稀釋度的未知樣品。根據(jù)預(yù)期的抗體水平，對樣品進(jìn)行稀釋。對于這些稀釋，使用包含10%陰性血清（VPN）的稀釋液。為了確定（截止值）的滴度，使用以下公式：

截止值 = （陽性對照的平均吸光度 + 陰性對照的平均吸光度） / 2

吸光度直接低于截止值的血清稀釋度代表抗體滴度。

抗-HAV ELISA定性/定量文獻(xiàn)參考：

1) Flehmig, B.: Hepatitis A. Baillière`s Clinical Gastroenterology, Vol.4 No. 3, p. 707,1990.

2) Ambrosch, F. et al.: Comparison of HAV-Antibodies Induced by Vaccination,Passive Immunization, and Natural Infection. Viral Hepatitis and Liver Disease. S.98 (1990). (Editors: Hollinger, Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).

3) Delem, A. et al.: Characterization of the immune response of volunteers vaccinated with a killed vaccine against hepatitis A. Vaccine, Vol. 11, Issue 4, S.479 (1993).

4) Heinricy, U. et al.: Schedule-dependent Immune Response to Hepatitis A Vaccination. Viral Hepatitis and Liver Disease. S. 108 (1990). (Editors: Hollinger,Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).