文獻解讀-AnaSpec-原代星形膠質(zhì)細胞對beta-淀粉樣蛋白（Amyloid-beta）1-42的攝取和清除

發(fā)布者：艾美捷科技發(fā)布時間：2025-02-11

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阿爾茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）是一種神經(jīng)退行性疾病，其主要病理特征之一是大腦中beta-淀粉樣蛋白（Amyloid-β, Aβ）的沉積。Aβ的積累被認為驅(qū)動了AD的發(fā)病過程，因此，清除Aβ成為治療AD的一個重要目標。星形膠質(zhì)細胞（Astrocytes）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的主要膠質(zhì)細胞類型，具有多種免疫效應(yīng)功能，能夠釋放多種生長因子、細胞因子和化學趨化因子，并參與抗氧化應(yīng)激和神經(jīng)元保護。研究發(fā)現(xiàn)，星形膠質(zhì)細胞能夠攝取Aβ，從而有助于清除腦中的Aβ沉積。然而，關(guān)于人星形膠質(zhì)細胞介導的Aβ清除機制的了解仍相對有限。特別是在胎兒和成人星形膠質(zhì)細胞在Aβ攝取方面的差異，以及α1-抗胰凝乳蛋白酶（α1-Antichymotrypsin, ACT）對Aβ攝取的影響方面，尚需進一步研究

“Binding and Uptake of Ab1-42 by Primary Human Astrocytes In Vitro”旨在探討胎兒和成人星形膠質(zhì)細胞對Aβ1-42的攝取能力，并研究ACT是否會影響這一過程。研究通過流式細胞術(shù)和共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）技術(shù)，對胎兒和成人星形膠質(zhì)細胞攝取FAM標記的Aβ1-42的能力進行了量化分析，并觀察了ACT對Aβ1-42攝取的影響。此外，研究還評估了Aβ1-42和ACT處理對星形膠質(zhì)細胞活性和炎癥因子釋放的影響。

實驗方法

1. 細胞培養(yǎng)：采用人體原代胎兒和成人星形膠質(zhì)細胞進行實驗。胎兒星形膠質(zhì)細胞在含有特定生長因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。成人星形膠質(zhì)細胞則從非癡呆和AD患者的死后腦組織中分離并培養(yǎng)。所有細胞均在無菌條件下培養(yǎng)，并定期更換培養(yǎng)基以保持細胞活力。

2. Aβ1-42與ACT的準備：Aβ1-42通過與anaspec品牌的5-(和-6)-羧基熒光素（FAM）標記的Aβ1-42混合制備熒光Aβ1-42（FluoAβ）。ACT則來源于血漿，并與FluoAβ以不同的摩爾比混合，以研究其對Aβ1-42攝取的影響。

貨號	23526-01	AS-23525-05
規(guī)格	0.1mg	0.5mg
名稱	β-Amyloid (1-42), FAM-labeled
序列	FAM-DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA
CAS號	1802087-78-0
圖片

3. 結(jié)合與攝取實驗：通過流式細胞術(shù)檢測星形膠質(zhì)細胞對Aβ1-42的結(jié)合與攝取情況。細胞與不同濃度的Aβ1-42孵育一定時間后，收集細胞并用流式細胞儀分析熒光強度，從而量化Aβ1-42的結(jié)合與攝取。此外，還通過CLSM觀察Aβ1-42在細胞內(nèi)的分布和攝取情況。

4. 細胞活性與炎癥因子檢測：為了評估Aβ1-42和ACT對星形膠質(zhì)細胞活性的影響，采用XTT試劑盒檢測細胞活性。同時，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測細胞培養(yǎng)上清中炎癥因子單核細胞趨化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1, MCP-1）的水平，以評估細胞的炎癥反應(yīng)。

5. 蛋白質(zhì)分析：通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和蛋白質(zhì)印跡（Western Blotting）分析Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物的蛋白質(zhì)組成。同時，通過電子顯微鏡觀察Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物的形態(tài)學特征。

實驗結(jié)果

1. Aβ1-42的結(jié)合與攝取：實驗結(jié)果顯示，無論是胎兒還是成人星形膠質(zhì)細胞，均能夠結(jié)合并攝取Aβ1-42。然而，胎兒星形膠質(zhì)細胞對Aβ1-42的攝取效率顯著高于成人星形膠質(zhì)細胞。此外，Aβ1-42的攝取量隨著孵育時間和Aβ1-42濃度的增加而增加。值得注意的是，無論是來自AD患者還是非癡呆患者的成人星形膠質(zhì)細胞，在Aβ1-42的攝取能力上均未見顯著差異。同時，ApoE基因型也未對Aβ1-42的攝取產(chǎn)生顯著影響。

通過流式細胞術(shù)（FACS）檢測星形膠質(zhì)細胞對FluoAb的攝取。（A）FluoAb處理濃度（1-20μM）與成年（n=14）和胎兒（n=3）星形膠質(zhì)細胞在過夜暴露后FluoAb陽性百分比的劑量-反應(yīng)關(guān)系。（B）暴露于10μM FluoAb不同時間（2小時、4小時、6小時或過夜）與胎兒（n=3）和成年（n=8）星形膠質(zhì)細胞FluoAb陽性百分比的時間-反應(yīng)關(guān)系。結(jié)果以平均值和標準差（須狀線）表示。

2. ACT對Aβ1-42攝取的影響：盡管ACT在體外和體內(nèi)均被證明能夠影響Aβ的聚集和清除，但在本實驗中，ACT并未顯著影響人體原代星形膠質(zhì)細胞對Aβ1-42的攝取。然而，ACT在一定程度上刺激了成人星形膠質(zhì)細胞釋放炎癥因子MCP-1，而對胎兒星形膠質(zhì)細胞則無此作用。這一發(fā)現(xiàn)可能暗示ACT在成人和胎兒星形膠質(zhì)細胞中的作用機制存在差異。

3. 細胞活性與形態(tài)學觀察：在長時間暴露于Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物后，星形膠質(zhì)細胞的活性并未受到顯著影響。然而，電子顯微鏡觀察顯示Aβ1-42和Aβ1-42/ACT混合物在形態(tài)上存在差異，這可能與ACT對Aβ1-42聚集狀態(tài)的影響有關(guān)。

4. 蛋白質(zhì)分析：SDS-PAGE和Western Blotting結(jié)果顯示Aβ1-42主要以單體和高分子量寡聚體的形式存在。在與ACT混合后，Aβ1-42的聚集狀態(tài)發(fā)生變化，形成了不同大小的SDS穩(wěn)定寡聚體。這些變化可能反映了ACT對Aβ1-42聚集狀態(tài)的調(diào)控作用。

該研究報道了人體原代胎兒和成人星形膠質(zhì)細胞對Aβ1-42的結(jié)合與攝取能力，并探討了ACT在此過程中的作用。研究結(jié)果表明胎兒星形膠質(zhì)細胞對Aβ1-42的攝取效率顯著高于成人星形膠質(zhì)細胞，而ACT并未顯著影響Aβ1-42的攝取但刺激了成人星形膠質(zhì)細胞釋放炎癥因子MCP-1。這些發(fā)現(xiàn)為深入理解Aβ在人體內(nèi)的清除機制提供了新的視角，并為AD的治療提供了新的思路。

在神經(jīng)退行性疾病，尤其是阿爾茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）的研究中，β-淀粉樣蛋白（Amyloid-β，Aβ）是淀粉樣斑塊的主要成分，在AD患者的大腦神經(jīng)元中積累。從AD大腦中分離出的淀粉樣肽的生物化學分析表明，Aβ(1-42)是與老年斑淀粉樣蛋白相關(guān)的主要種類,anaspec作為多肽生產(chǎn)專家，可以提供多種Aβ(1-42)：

貨號	名稱
AS-20276	β-Amyloid (1-42) - 1 mg
AS-20276-25	β-Amyloid (1-42) - 25 mg
AS-20276-5	β-Amyloid (1-42) - 5 mg
AS-21791	β-Amyloid (1-42) ? HCl - 0.5 mg
AS-21793	β-Amyloid (1-42) ? HCl - 1 mg
AS-23523-05	Biotin-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg
AS-23524-01	Biotin-β-Amyloid (1-42) - 0.1 mg
AS-23537	Cys-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg
AS-23538	Cys-β-Amyloid (1-42) - 1 mg
AS-24224-	β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg
AS-24640	Biotin-LC-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg
AS-24641-01	Biotin-LC-β-Amyloid (1-42) - 0.1 mg
AS-25231	β-Amyloid Peptide (1-42), mouse, rat - 1 mg
AS-25381	β-Amyloid Peptide (1-42), mouse, rat - 0.5 mg
AS-25382	Scrambled-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg
AS-25383	Scrambled-β-Amyloid (1-42) - 1 mg
AS-29903-01	[Pyr11]-β-Amyloid (11-42) - 0.1 mg
AS-29903-1	[Pyr11]-β-Amyloid (11-42) - 1 mg
AS-60476	β-Amyloid (1-42), TAMRA-labeled - 0.1 mg
AS-60479-01	β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 488-labeled - 0.1 mg
AS-60480-01	β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 555-labeled - 0.1 mg
AS-60883	β-Amyloid (1-42), sodium salt - 1 mg
AS-60883-01	β-Amyloid (1-42), sodium salt - 0.1 mg
AS-60892	β-Amyloid (1-42), Scrambled, 5-FAM labeled - 0.1 mg
AS-61226-05	GIP (1-42), human - 0.5 mg
AS-61226-1	GIP (1-42), human - 1 mg
AS-61484-01	β-Amyloid (1-42)-Lys(Biotin)-NH2 - 0.1 mg
AS-61484-05	β-Amyloid (1-42)-Lys(Biotin)-NH2 - 0.5 mg
AS-61967-05	[Gly22]-β-Amyloid (1-42), Arctic Mutation - 0.5 mg
AS-62142	[Gln22]-β-Amyloid (1-42), Dutch mutation - 0.5 mg
AS-62148	[Lys22]-β-Amyloid (1-42), Italian Mutation - 0.5 mg
AS-62478	[Met(O)35]-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg
AS-63317-	β-Amyloid (11-42) - 1 mg
AS-63323	[Arg6]-β-Amyloid (1-42), English Mutation - 0.5 mg
AS-63324	[Asn7]-β-Amyloid (1-42), Tottori-Japanese Mutation - 0.5 mg
AS-63327	β-Amyloid (11-42), HiLyte? Fluor 488-labeled - 0.1 mg
AS-63672-05	[Cys26]-β-Amyloid (1-42) - 0.5 mg
AS-63672-1	[Cys26]-β-Amyloid (1-42) - 1 mg
AS-63704	[Gly21]-β-Amyloid (1-42), Dutch Mutation - 0.5 mg
AS-63705	[Asn23]-β-amyloid (1-42), Iowa Mutation - 0.5 mg
AS-63738	ClearPoint? β-Amyloid (1-42), 13C, 15N-labeled at Arg & Lys - 50 ?g
AS-64129-05	β-Amyloid (1-42) ? HFIP - 0.5 mg
AS-64129-1	β-Amyloid (1-42) ? HFIP - 1 mg
AS-64161	β-Amyloid (1-42), HiLyte? Fluor 647-labeled - 0.1 mg
AS-64519	[Met]-β-Amyloid (1-42), 5-TAMRA labeled - 0.1 mg
AS-65178	[Pro19]-β-Amyloid (1-42) - 1 mg
AS-72216	AggreSure β-Amyloid (1-42), human - 0.25 mg
AS-65627	?-Amyloid (1-42), HiLexa? Fluor 488-labeled - 0.1 mg
AS-65662	GIP (1-42)-acetate, human - 0.1 mg
AS-GMP-20276-1	GMP β-Amyloid (1-42), human - 1 mg NET
AS-GMP-20276-5	GMP β-Amyloid (1-42), Human - 5 mg NET