刀豆蛋白A（ConA）是一種凝集素，能特異性結(jié)合各種糖、糖蛋白和糖脂中的某些結(jié)構(gòu)。Con A是一種眾所周知的T細(xì)胞有絲分裂原，可以激活免疫系統(tǒng)，招募淋巴細(xì)胞并引發(fā)細(xì)胞因子的產(chǎn)生。除了其促有絲分裂活性外，ConA還可以通過(guò)線粒體介導(dǎo)的凋亡和自噬誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。ConA也被報(bào)道可以激活NFAT（活化T細(xì)胞的核因子），NFAT是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子家族，在免疫系統(tǒng)的發(fā)育和功能中很重要，包括T細(xì)胞受體（TCR）的參與。ConA在生物學(xué)和生物化學(xué)中被廣泛用于表征各種細(xì)胞表面的糖蛋白和其他含糖實(shí)體。它還用于在凝集素親和層析中純化糖基化大分子，以及研究各種免疫細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)。ConA在B-聚糖分支結(jié)構(gòu)的末端位置特異性結(jié)合α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基殘基（兩種己糖，僅在碳2上的醇不同）。它有4個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)應(yīng)于4個(gè)亞基。刀豆蛋白A（Con A）是細(xì)胞生物學(xué)中應(yīng)用最廣泛的凝集素之一。iFluor?488標(biāo)記的刀豆球蛋白A選擇性結(jié)合A-吡喃甘露糖基和A-吡喃葡萄糖基殘基，并可能顯示出最亮的綠色熒光。

圖：活HeLa細(xì)胞用iFluor?488刀豆蛋白A偶聯(lián)物以5?g/mL的濃度染色30分鐘。使用FITC濾光片組通過(guò)熒光顯微鏡獲取圖像。

艾美捷AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶聯(lián)物：

單位大小：1 毫克

目錄編號(hào)：25580

分子量：不適用

溶劑：水

校正因子（260 納米）：0.21

校正因子（280 納米）：0.11

消光系數(shù)（厘米 -1 M -1）：750001

激發(fā)（納米）：491

發(fā)射（納米）：516

量子產(chǎn)率：0.9

H-短語(yǔ)：H303, H313, H333

危害符號(hào)：XN

預(yù)期用途：僅限研究使用（RUO）

R-短語(yǔ)：R20, R21, R22

儲(chǔ)存：冷凍（< -15°C）；盡量減少光照

UNSPSC：12171501

除非另有說(shuō)明，所有未使用的庫(kù)存溶液應(yīng)在制備后分成單次使用的小份，并儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融。

iFluor? 488-刀豆蛋白A標(biāo)記物庫(kù)存溶液（200倍）

將500微升的ddH2O加入粉末中，制成2毫克/毫升的庫(kù)存溶液。

注意     重懸后的共軛溶液可在2-8°C短期儲(chǔ)存，或在-20°C長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

工作溶液的準(zhǔn)備

iFluor? 488-刀豆蛋白A標(biāo)記物工作溶液（1倍）

將5微升的200倍共軛溶液加入1毫升HHBS緩沖液中。

注意     不同細(xì)胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。推薦的起始濃度為活細(xì)胞5-10微克/毫升。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

在打開(kāi)前將小瓶預(yù)熱至室溫并短暫離心。染色方案因應(yīng)用而異。應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定共軛物的適當(dāng)稀釋度。

活細(xì)胞染色

用HHBS緩沖液洗細(xì)胞兩次。

加入100微升iFluor? 488-刀豆蛋白A工作溶液。

在37°C下用工作溶液孵育細(xì)胞10-30分鐘。

用HHBS緩沖液洗細(xì)胞兩次。

使用FITC濾光片組在熒光顯微鏡下成像細(xì)胞。

固定細(xì)胞染色

刀豆蛋白A標(biāo)記物也可用于染色固定細(xì)胞。

用4%甲醛在PBS中固定細(xì)胞。

注意     對(duì)于固定細(xì)胞膜染色，建議不進(jìn)行通透化步驟。固定后的通透化步驟會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）結(jié)構(gòu)染色。

加入100微升iFluor? 488-刀豆蛋白A工作溶液。

在室溫下用刀豆蛋白A共軛物工作溶液孵育細(xì)胞10-30分鐘。

用HHBS緩沖液洗細(xì)胞兩次。

使用FITC濾光片組在熒光顯微鏡下成像細(xì)胞。

AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶聯(lián)物文獻(xiàn)參考：

Short-term high-fat diet intake leads to exacerbation of concanavalin A-induced liver injury through the induction of procoagulation state.

Authors: Nanizawa, Eri and Tamaki, Yuki and Sono, Reika and Miyashita, Rintaro and Hayashi, Yumi and Kanbe, Ayumu and Ito, Hiroyasu and Ishikawa, Tetsuya

Journal: Biochemistry and biophysics reports (2020): 100736

Montelukast ameliorates Concanavalin A-induced autoimmune hepatitis in mice via inhibiting TNF-α/JNK signaling pathway.

Authors: El-Kashef, Dalia H and Abdelrahman, Rehab S

Journal: Toxicology and applied pharmacology (2020): 114931

Acupuncture stimulation attenuates TNF-α production via vagal modulation in the concanavalin A model of hepatitis.

Authors: Lim, Hee-Don and Kim, Ki-Joong and Jo, Byung Gon and Park, Ji-Yeun and Namgung, Uk

Journal: Acupuncture in medicine : journal of the British Medical Acupuncture Society (2020): 964528420907338

Deficiency of O-linked-glycosylation regulates activation of T cells and aggravates Concanavalin A-induced liver injury.

Authors: Hao, Xiaohua and Gao, Meixin and He, Lingling and Ye, Xiaohui and Yang, Junru and Zhang, Fuyang and Liu, Ran and Wei, Hongshan

Journal: Toxicology (2020): 152411

Nicotine attenuates concanavalin A-induced liver injury in mice by regulating the α7-nicotinic acetylcholine receptor in Kupffer cells.

Authors: Zhao, Jing and Park, Surim and Kim, Jong-Won and Qi, Jing and Zhou, Zixiong and Lim, Chae Woong and Kim, Bumseok

Journal: International immunopharmacology (2020): 106071

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