研究表明，將從細胞分泌的Aβ寡聚體或從阿爾茨海默病（AD）患者大腦中提取的Aβ寡聚體注入大鼠腦內(nèi)，會引發(fā)突觸功能障礙和學習記憶能力的下降。此外，與健康個體相比，AD患者大腦中Aβ寡聚體的含量確實顯著升高。

艾美捷IBL-人淀粉樣蛋白β寡聚體（82E1特異性）檢測試劑盒：

貨號：27725-96Well

預(yù)期用途：研究用試劑

檢測方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

標記物：辣根過氧化物酶（HRP）

適用物種：人類

檢測樣本類型：EDTA血漿、血清、腦組織提取物

檢測范圍：18.98 ～ 1215 pmol/L

第一步反應(yīng)條件：2 - 8 ℃ 孵育60分鐘

第二步反應(yīng)條件：2 - 8 ℃ 孵育60分鐘

靈敏度：4.41 pmol/L

化合物交叉反應(yīng)性如下：

Aβ (1-16) 二聚體肽：100.0%

Aβ (1-40) 肽：0.27%

Aβ (N3pE-40) 肽：≦ 0.1%

Aβ (N3pE-42) 肽：≦ 0.1%

儲存條件：2 - 8 ℃

包裝規(guī)格：96孔板 × 1

試劑盒組成：

預(yù)包被板：抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG單克隆抗體親和純化 96孔 × 1

標記抗體濃縮液（30×）：HRP標記抗人Aβ（N）（82E1）小鼠IgG單克隆抗體親和純化 0.1 mL × 1

標準品：人Aβ (1-16) 二聚體 0.5 mL × 2

EIA緩沖液 30 mL × 1

標記抗體稀釋液 12 mL × 1

顯色底物：TMB溶液 15 mL × 1

終止液 12 mL × 1

洗滌緩沖液濃縮液 50 mL × 1

初次孵育用U型板（貼有標簽）96孔 × 1

檢測原理：

本試劑盒采用固相夾心ELISA法。首先將樣本與酶標記抗體在U型板中進行初步孵育反應(yīng)，然后將該混合物轉(zhuǎn)移至預(yù)包被板中進行第二步反應(yīng)。洗滌去除未與包被抗體結(jié)合的成分后，使用四甲基聯(lián)苯胺（TMB）作為顯色底物。顯色強度反映了與抗人Aβ（N）抗體（82E1）結(jié)合的分子的數(shù)量，該抗體特異性識別人類Aβ的N端，并能識別具有兩個或以上表位的分子（如寡聚體、聚合物等）。檢測結(jié)果以摩爾濃度表示，并以Aβ (1-16)二聚體為標準進行相對定量。

預(yù)期用途：

1、本ELISA試劑盒可檢測血清、EDTA血漿和腦組織提取物中，與抗人Aβ（N）（82E1）小鼠單克隆抗體結(jié)合并具有兩個或以上表位的人類Aβ分子（如寡聚體、聚合物等）。

2、由于檢測結(jié)果是以Aβ二聚體為標準進行摩爾濃度計算的，因此與所檢測分子的重量或數(shù)量并不直接成正比。

注意事項：

1）樣本應(yīng)在采集后盡快檢測。如需保存，請冷凍儲存，避免反復凍融。解凍時應(yīng)在低溫下進行，并在檢測前充分混勻。

2）如有需要，請使用“4號 EIA緩沖液”對樣本進行稀釋。

3）建議對樣本和標準品進行重復檢測。

4）樣本應(yīng)保持在中性pH范圍內(nèi)。有機溶劑的污染可能會影響檢測結(jié)果。

5）洗滌預(yù)包被板時，請僅使用本試劑盒提供的洗滌緩沖液。洗滌不充分可能導致檢測失敗。

6）洗滌后應(yīng)將板輕叩在紙巾上以去除殘留液體，切勿用紙巾擦拭孔壁。

7）“6號 顯色底物”對光敏感，應(yīng)避光保存，并避免與金屬接觸。

8）加入“7號 終止液”后，請在30分鐘內(nèi)完成檢測。

檢測結(jié)果計算方法：

在繪制標準曲線之前，請先從所有數(shù)據(jù)（包括標準品和待測樣本）中減去空白對照的吸光度值。然后，在雙對數(shù)坐標紙（log-log圖）上，以標準品的濃度為橫坐標，減去空白后的吸光度值為縱坐標，繪制標準品的吸光度與濃度的對應(yīng)點。通過這些點繪制一條最平滑的曲線，即為標準曲線。

根據(jù)繪制的標準曲線，讀取待測樣本對應(yīng)的濃度值。

※ 上述所示僅為典型的標準曲線示例，不能用于實際檢測結(jié)果的計算。每次實驗請務(wù)必自行繪制標準曲線。

文獻參考：

1. Xia W, Yang T, Shankar G, Smith IM, Shen Y, Walsh DM, Selkoe DJ. A specific enzyme-linked immunosorbent assay for measuring beta-amyloid protein oligomers in human plasma and brain tissue of patients with Alzheimer disease.Arch Neurol. 2009 Feb;66(2):190-9.

2. Walsh DM, Klyubin I, Fadeeva JV, Cullen WK, Anwyl R, Wolfe MS, Rowan MJ,Selkoe DJ. Naturally secreted oligomers of amyloid beta protein potently inhibit hippocampal long-term potentiation in vivo. Nature. 2002, 4;416(6880):535-9.

3. Shankar GM, Li S, Mehta TH, Garcia-Munoz A, Shepardson NE, Smith I, Brett FM, Farrell MA, Rowan MJ, Lemere CA, Regan CM, Walsh DM, Sabatini BL,Selkoe DJ. Amyloid-beta protein dimers isolated directly from Alzheimer's brains impair synaptic plasticity and memory. Nat Med. 2008, ;14(8):837-42.