無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成（CFPS）是一個(gè)易于使用、快速且高效的系統(tǒng)，它不包含膜結(jié)構(gòu)障礙，但包含了原生細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)制以及合成所需蛋白質(zhì)的外源資源（例如，氨基酸、核苷酸和二級(jí)能量底物）。1-5

CFPS（大腸桿菌）套件可以在幾小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生高水平和不同分子量的重組蛋白，并且可以用于高通量功能基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)。此外，它還可以提供蛋白質(zhì)以推動(dòng)生化和結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。

合成的蛋白質(zhì)可以通過(guò)SDS-PAGE、西方印跡和熒光檢測(cè)尺寸排除色譜（FSEC）進(jìn)行檢測(cè)，并且可以通過(guò)親和純化技術(shù)從反應(yīng)混合物中分離出來(lái)，以進(jìn)行進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)和/或功能特性分析。

艾美捷Cayman Chemical無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成（大腸桿菌）試劑盒：

貨號(hào)：41534

同義詞：CFPS（無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成）

儲(chǔ)存：-80°C

運(yùn)輸：在美國(guó)本土使用干冰運(yùn)輸；其他地區(qū)可能有所不同

穩(wěn)定性：至少1年

模板制備：

包含DNA的線性或環(huán)形質(zhì)粒或用于POl的PCR產(chǎn)物可以用作模板。環(huán)形質(zhì)粒DNA可以產(chǎn)生相對(duì)較高的產(chǎn)量，但在進(jìn)行高通量篩選時(shí)使用PCR產(chǎn)物更為方便。為了獲得最佳的蛋白質(zhì)產(chǎn)量，使用高純度和高濃度的質(zhì)粒DNA模板非常重要，并避免在DNA模板中加入高濃度的鹽或甘油。此外，建議在蛋白質(zhì)合成緩沖液中添加適當(dāng)?shù)暮怂崦敢种苿砸种迫魏挝廴镜腞Nase/DNase并穩(wěn)定線性DNA。為了方便，可以使用Control His-sfGFP Plasmid（產(chǎn)品編號(hào)400793）作為克隆載體。這個(gè)高拷貝數(shù)載體包含了所需的T7啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)（RBS）和T7終止子元素。sfGFP基因可以被其他感興趣的基因替換，以用于體外表達(dá)。

環(huán)形質(zhì)粒DNA作為模板

在此平臺(tái)上使用的質(zhì)粒必須包含以下元素和結(jié)構(gòu)特征：

圖：控制His-sfGFP質(zhì)粒的示意圖

目標(biāo)基因必須位于一個(gè)RBS（核糖體結(jié)合位點(diǎn)）上游的T7啟動(dòng)子的控制之下。

T7啟動(dòng)子與ATG起始密碼子之間的距離應(yīng)在20到100個(gè)核苷酸左右。

T7終止子必須位于終止密碼子下游。

文獻(xiàn)參考：

1. Silverman, A.D., Karim, A.S., and Jewett, M.C. Cell-free gene expression: An expanded repertoire of applications. Nat. Rev. Genet. 21(3), 151-170 (2020).

2. Garenne, D., Haines, M.C., Romantseva, E., et al. Cell-free gene expression. Nat. Rev. 1, 49 (2021).

3.Levine,M.Z.,Gregprio,N.E.,Jewett,M.C.,et al.Escherichia coli-basedcell-free protein synthesis:Protocols for a robust flexible,and accessibleplatform technology.J.Vis.Exp.144,e58882(2019).

4. Jewett, M.C., and Swartz, J.R. Mimicking the Escherichia coli cytoplasmic environment activates long-lived and efficient cell-free protein synthesis. Biotechnol. Bioeng. 86(1), 19-26 (2004).

5. Davanloo, P., Rosenberg, A.H., Dunn, J.J., et al. Cloning and expression of the gene for bacteriophage T7 RNA polymerase. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81(7), 2035-2039 (1984).

艾美捷科技是Cayman Chemical的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。