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熒光素衍生物具有高吸收率,出色的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性,是流式細(xì)胞儀和免疫熒光法等生物檢測(cè)中最常用的熒光標(biāo)記之一。最廣泛使用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)(特別是抗體)的異硫氰酸熒光素(FITC)和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素(5-FAM和5(6)-FAM)。 我們提供各類的熒光素染料,底物和結(jié)合物,以及一系列具有改良特性的卓越iFluor™熒光標(biāo)記染料,這些染料針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記和檢測(cè)進(jìn)行了優(yōu)化。
光譜性質(zhì):
表1. 5-異硫氰酸熒光素(5-FITC)的光譜性質(zhì)
| 指標(biāo) | 數(shù)值 |
| 激光線: | 488 nm激光 |
| 篩選器集: | FITC |
| Ex / Em(nm): | 494/525 nm |
| 消光系數(shù)(ε): | 75,000 cm-1 M -1 |
| 量子產(chǎn)率(Φ): | 0.79 |

圖1. 5-異硫氰酸熒光素(5-FITC)* CAS 3326-32-7 *(Cat:121)的激發(fā)和發(fā)射光譜。
iFluor™488-FITC:AlexaFluor®488的卓越替代品
盡管基于熒光素的染料和綴合物有亮綠色熒光,但仍可能會(huì)限制其在某些應(yīng)用中的使用。具有相同光譜特性的iFluor™488染料可在較寬的摩爾范圍內(nèi)產(chǎn)生更亮,更光穩(wěn)定的結(jié)合物,且對(duì)pH值不敏感。iFluor™488染料分子能以高摩爾比與生物分子結(jié)合,同時(shí)產(chǎn)生最小的自發(fā)淬滅(圖2和圖3)。

圖2. 用GAM IgG-FITC和GAM IgG-iFluor™488標(biāo)記的HeLa細(xì)胞之間的熒光強(qiáng)度比較。

圖3. iFluor™488山羊抗小鼠IgG和FITC山羊抗小鼠IgG的光漂白速率的比較。HeLa細(xì)胞的微管蛋白用iFluor™488 GAM-IgG(頂部)或FITC GAM-IgG(底部系列)標(biāo)記。在Keyence X710熒光顯微鏡上以60秒的間隔拍攝圖像。TFI代表由ImageJ軟件計(jì)算的總熒光強(qiáng)度。
表2. 用于標(biāo)記生物分子的可用iFluor™488反應(yīng)染料
| 產(chǎn)品 | 化學(xué) 反應(yīng)性 | 反應(yīng) 部分 | Ex (nm) | Em (nm) | ε1 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| iFluor™488琥珀酰亞胺酯 | 胺 | 琥珀酰亞胺酯 | 491 | 516 | 75000 | 1mg | 1023 |
| iFluor™488馬來(lái)酰亞胺 | 硫醇 | 馬來(lái)酰亞胺 | 491 | 516 | 75000 | 1mg | 1062 |
| iFluor™488炔烴 | 疊氮化物 | 炔烴 | 491 | 516 | 75000 | 1mg | 999 |
| iFluor™488胺 | 醛,羧酸,酮 | 胺 | 491 | 516 | 75000 | 1mg | 1072 |
| iFluor™488疊氮化物 | 炔烴 | 疊氮化物 | 491 | 516 | 75000 | 1mg | 1000 |
| iFluor™488酰肼 | 醛,羧酸,酮 | 酰肼 | 491 | 516 | 75000 | 1mg | 1082 |
注意:ε= 在其最大吸收波長(zhǎng)處的摩爾消光系數(shù)(單位= cm -1 M -1)
1. 熒光素相關(guān)產(chǎn)品
我們提供廣泛的熒光素產(chǎn)品選擇,包括反應(yīng)性熒光素和熒光素衍生物,用于標(biāo)記抗體,核酸和其他生物分子,結(jié)合物,指示劑以及用于檢測(cè)細(xì)胞,組織勻漿和溶液中酶活性的底物。
熒光素標(biāo)準(zhǔn)品:
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
| 熒光素* CAS 2321-07-5 * | 1 |
| 熒光素,二鈉鹽* CAS 518-47-8 * | 2 |
FRET組件:
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
| FMOC-Lys(5-FITC)-OH(普通供體染料) | 5070 |
| FMOC-Lys(TQ2)-OH(熒光素淬滅染料) | 5256 |
| FMOC-Asp(TQ2)-OH(熒光素淬滅染料) | 5206 |
| FMOC-Glu(TQ2)-OH(熒光素淬滅染料) | 5236 |
熒光素前體:
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
| 4-氟間苯二酚* CAS#:103068-41-3 * | 4022 |
| 2,4-二氟間苯二酚* CAS 195136-71-1 * | 4023 |
DNA測(cè)序構(gòu)建塊
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
| 5-羧基-4'-氨基甲基熒光素 | 207 |
| 6-羧基-4'-氨基甲基熒光素 | 208 |
校準(zhǔn)品
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) |
| AMP-熒光素共軛物校準(zhǔn)物 | 13610 |
| GMP-熒光素共軛物校準(zhǔn)物 | 13611 |
2. 反應(yīng)性熒光素染料
反應(yīng)性熒光素和熒光素衍生物廣泛用于共價(jià)標(biāo)記生物分子,例如抗體,碳水化合物,核酸,蛋白質(zhì),肽和寡核苷酸。熒光素綴合物可產(chǎn)生強(qiáng)烈的明亮和穩(wěn)定的綠色熒光,當(dāng)與藍(lán)色,黃色或紅色熒光探針結(jié)合使用時(shí),通常用作檢測(cè)酶活性或在彩色熒光研究中提供對(duì)比的底物。熒光素和熒光素衍生物很容易在各種染料標(biāo)記化學(xué)中用到,主要包括:
琥珀酰亞胺酯/ NHS酯-用于標(biāo)記抗體,蛋白質(zhì),肽,胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離胺(-NH?)
馬來(lái)酰亞胺-用于標(biāo)記抗體,蛋白質(zhì)和肽上的巰基
疊氮化物-通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)方法(click chemistry)標(biāo)記乙烯基
炔烴-通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)方法標(biāo)記疊氮化物
酰肼-用于標(biāo)記醛基和酮基
羧酸-用碳二亞胺預(yù)活化后標(biāo)記胺,或用于醇的酯化
胺-用于標(biāo)記各種親電子化合物,例如活化的酯
四嗪-用于通過(guò)反電子需求Diels-Alder反應(yīng)標(biāo)記反式環(huán)辛烯(TCO)化合物
亞磷酰胺-標(biāo)記寡核苷酸
表3. 反應(yīng)性熒光素和熒光素衍生物(可用于標(biāo)記生物分子)
| 產(chǎn)品 | 化學(xué) 反應(yīng)性 | 反應(yīng) 部分 | Ex (nm) | Em (nm) | ε1 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 5(6)-FAM,SE * CAS 117548-22-8 * | 胺 | 琥珀酰亞胺酯 | 493 | 517 | 83000 | 25mg | 110 |
| 5(6)-FAM * CAS 72088-94-9 * | 碳二亞胺預(yù)活化后的胺 | 羧酸 | 493 | 517 | 83000 | 1g | 100 |
| 5(6)-FAM乙二胺 | 醛,羧酸,酮 | 乙二胺 | 493 | 517 | 83000 | 100mg | 123 |
| SE,5-FAM | 胺 | 琥珀酰亞胺酯 | 493 | 517 | 83000 | 10mg | 113 |
| 5-FAM-X,SE * CAS 148356-00-7 * | 胺 | 琥珀酰亞胺酯 | 493 | 517 | 83000 | 5mg | 113 |
| 5-FAM疊氮化物 | 炔烴 | 疊氮化物 | 493 | 517 | 83000 | 10mg | 131 |
| 5-FAM炔烴 | 疊氮化物 | 炔烴 | 493 | 517 | 83000 | 10mg | 132 |
| 5-FAM * CAS 76823-03-5 * | 碳二亞胺預(yù)活化后的胺 | 羧酸 | 493 | 517 | 83000 | 100mg | 103 |
| 5-FAM乙二胺 | 醛,羧酸,酮 | 乙二胺 | 493 | 517 | 83000 | 100mg | 124 |
| 6-FAM,SE * CAS 92557-81-8 * | 胺 | 琥珀酰亞胺酯 | 493 | 517 | 83000 | 10mg | 116 |
3. 熒光素標(biāo)記的酶底物
熒光素和熒光素衍生物經(jīng)常用于制備用于檢測(cè)細(xì)胞和溶液中酶活性的熒光底物。當(dāng)被目的酶水解時(shí),熒光素修飾的底物顯示出與酶活性成線性比例的熒光強(qiáng)度增加。AAT Bioquest提供了多種熒光素修飾的底物,用于檢測(cè)胱天蛋白酶,蛋白酶,肽酶,磷酸酶等的活性。
表4. 可用熒光素標(biāo)記的酶底物
| 產(chǎn)品 | 生物功能 | Ex(nm) | Em(nm) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| FDG [熒光素二-β-D-吡喃半乳糖苷] | β-半乳糖苷酶底物 | 498 | 517 | 1g | 14001 |
| FDP [二氟熒光素,四銨鹽] * CAS 217305-49-2 * | 磷酸酶底物 | 498 | 517 | 5mg | 11600 |
| FCB [Fluoresceindi-β-D-cellobioside] | 纖維素酶(例如β-葡萄糖苷酶,內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶)底物 | 498 | 517 | 1mg | 14025 |
| 酪蛋白,F(xiàn)ITC綴合 | 通用蛋白酶底物 | 498 | 517 | 5mg | 13440 |
| FAM-VAD-FMK | 多聚半胱氨酸蛋白酶抑制劑(胱天蛋白酶1、2、3、6、8、9或10) | 493 | 517 | 25 tests | 13470 |
| FITC-C6-DEVD-FMK | Caspase 3底物 | 491 | 516 | 100ug | 13408 |
| FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK | Caspase 3底物 | 491 | 516 | 100ug | 13417 |
| FITC-C6-LEHD-FMK | Caspase 9底物 | 491 | 516 | 100ug | 13409 |
| FDGlcU [熒光素二-β-D-葡糖醛酸苷] | β-葡萄糖醛酸酶底物 | 498 | 517 | 1mg | 14002 |
| 葡萄糖-UDP-熒光素結(jié)合物 | 葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶底物 | 498 | 517 | 100ug | 11705 |
4. 熒光素標(biāo)記的綴合物
熒光素標(biāo)記的綴合物因其亮綠色熒光和出色的光穩(wěn)定性而在生物成像和生物標(biāo)記中具有廣泛的應(yīng)用。熒光素衍生物可以標(biāo)記抗體,鏈霉親和素,鬼筆環(huán)肽, Annexin v,右旋糖酐和其他生物分子,以研究細(xì)胞凋亡,標(biāo)記細(xì)胞器或通過(guò)放大微弱信號(hào)來(lái)提高測(cè)定靈敏度。
表5.可用熒光素標(biāo)記的熒光綴合物。
| 產(chǎn)品 | 生物功能 | Ex(nm) | Em(nm) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 生物素-4-熒光素* CAS 1032732-74-3 * | 以高親和力與鏈霉親和素四聚體結(jié)合 | 492 | 518 | 5mg | 3006 |
| Annexin V,F(xiàn)ITC標(biāo)記 | 檢測(cè)細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸 | 491 | 516 | 100 tests | 20030 |
| 鬼筆環(huán)肽-熒光素結(jié)合物 | 標(biāo)記肌動(dòng)蛋白絲(F-肌動(dòng)蛋白) | 498 | 517 | 300 tests | 23101 |
| FITC-鏈霉親和素偶聯(lián)物 | 間接結(jié)合生物素化的一抗,放大信號(hào) | 491 | 516 | 1mg | 16910 |
| 熒光素生物素 | 以高親和力與鏈霉親和素四聚體結(jié)合 | 498 | 517 | 5mg | 3017 |
| FITC山羊抗小鼠IgG(H + L) | 間接檢測(cè)小鼠一抗 | 491 | 516 | 1mg | 16852 |
| FITC山羊抗小鼠IgG(H + L)*交叉吸附* | 間接檢測(cè)小鼠一抗 | 491 | 516 | 1mg | 16860 |
| FITC山羊抗兔IgG(H + L) | 間接檢測(cè)兔一抗 | 491 | 516 | 1mg | 16868 |
| FITC山羊抗兔IgG(H + L)*交叉吸附* | 間接檢測(cè)兔一抗 | 491 | 516 | 1mg | 16876 |
| FITC-葡聚糖結(jié)合物(平均分子量=?20K) | 心血管,微循環(huán),灌注,細(xì)胞膜通量示蹤劑 | 491 | 516 | 25mg | 21700 |
5. 熒光素指示劑
熒光素指示劑是生物化學(xué)和細(xì)胞研究中的重要工具。它們已用于熒光成像的所有主要類型,包括流式細(xì)胞儀,熒光顯微鏡和基于熒光板的分析。AAT Bioquest提供了多種熒光素指示劑,可用于測(cè)量細(xì)胞的pH值,鈣濃度,細(xì)胞增殖,細(xì)胞活力等。
表6.可用的熒光素指示劑
| 產(chǎn)品 | 生物功能 | Ex (nm) | Em(nm) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| FDA [氟乙酸甘油酯] * CAS 596-09-8 * | 細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 1g | 22020 |
| 熒光素二辛酸酯[熒光素二辛酸酯] | 細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 100mg | 22019 |
| 熒光素二辛酸酯*水溶性* | 細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 5mg | 22018 |
| CFSE [5-(和6)-羧基熒光素二乙酸酯,琥珀酰亞胺酯] * CAS 150347-59-4 * | 細(xì)胞增殖指標(biāo),細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 25mg | 22022 |
| CDCFDA,SE [5-(和-6)-羧基-2',7'-二氯熒光素二乙酸酯,琥珀酰亞胺酯] *混合異構(gòu)體* | 細(xì)胞增殖指標(biāo),細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 25mg | 22026 |
| ReadiUse™CFSE [5-(和6)-羧基熒光素二乙酸酯,琥珀酰亞胺酯] * CAS 150347-59-4 * | 細(xì)胞增殖指標(biāo),細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 5 x 500mg | 22028 |
| CDCFDA [5-(and-6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate] *混合異構(gòu)體* | 細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 100mg | 22025 |
| CFDA [5-(和6)-羧基熒光素二乙酸酯] *混合異構(gòu)體* | 細(xì)胞活力指標(biāo) | 498 | 517 | 100mg | 22021 |
| 二乙酸二氫熒光素[二乙酸氟樹(shù)脂] * CAS 35340-49-9 * | 細(xì)胞活力指標(biāo),氧化還原指標(biāo) | 498 | 517 | 100mg | 15203 |
| BCECF,AM | 細(xì)胞滲透性pH指示劑 | 504 | 527 | 1mg | 21202 |
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