一、產品概述

MAD2（mitotic arrest deficient 2，有絲分裂阻滯缺陷蛋白2）是紡錘體組裝檢查點的關鍵組分，負責確保在后期 onset 之前所有染色體正確排列在赤道板上。MAD2是MCC復合體（包含BubR1、Bub3、Cdc20和MAD2）的亞基之一，該復合體可抑制APC/C（后期促進復合物/ cyclosome）。MAD2受MAD1調控。MAD2功能異常可導致染色體不穩(wěn)定性，與腫瘤發(fā)生密切相關。

本文介紹的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔抗MAD2抗體（親和純化）（貨號：A300-301A） 是一款針對人源MAD2蛋白的高特異性多克隆抗體，可識別人和小鼠MAD2，適用于免疫沉淀和免疫印跡應用。

二、產品規(guī)格

參數 | 詳細信息

靶標 | MAD2

反應種屬 | 小鼠、人

應用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 位于第155位氨基酸至C末端之間的區(qū)域（具體映射至SwissProt Q13257編號下殘基150至C末端殘基205）

同種型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ?g/mL（1 mg/mL）

儲存條件 | 2–8°C

保質期 | 自收到之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09% 疊氮化鈉

生產流程 | 使用固定在固相載體上的MAD2特異性表位進行親和純化。免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280下吸光度為1.4）

三、推薦應用與實驗條件

本抗體經驗證可用于免疫沉淀和免疫印跡兩種應用類型。以下為推薦條件。

3.1 免疫印跡（Western Blot, WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000

封閉及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育條件：過夜孵育

二抗選擇：

檢測細胞裂解液：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（貨號A120-101P）

檢測免疫沉淀樣品：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉緩沖液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

3.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 細胞裂解物總蛋白

四、儲存與穩(wěn)定性

儲存溫度：2–8°C

有效期：自收到之日起1年內，按照指示條件儲存可保持最佳性能

緩沖液成分：Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液（pH 7–8），含0.09% 疊氮化鈉作為防腐劑

重要提示：疊氮化鈉會抑制過氧化物酶活性。若下游檢測采用HRP偶聯(lián)二抗及化學發(fā)光底物，建議在使用前通過脫鹽柱或透析去除疊氮化鈉。若采用熒光檢測或非酶促檢測體系，則無需去除

避免反復凍融：建議分裝保存于2–8°C，避免冷凍（反復凍融可能導致抗體變性）

五、產品優(yōu)勢總結

優(yōu)勢 | 說明

高濃度 | 1000 ?g/mL（1 mg/mL），滿足大量免疫沉淀和多次實驗需求

雙物種反應性 | 同時識別人和小鼠MAD2，擴展應用范圍

親和純化 | 抗原特異性純化，低非特異性背景

明確表位區(qū)域 | 免疫原位于155–C端（150–205），便于驗證和交叉反應預測

含輕鏈特異性檢測建議 | 提供免疫沉淀后Western Blot的優(yōu)化方案，避免輕鏈干擾（MAD2分子量與輕鏈接近）

長保質期 | 2–8°C穩(wěn)定儲存1年

六、注意事項總結

1. MAD2分子量（~24 kDa）與兔IgG輕鏈（~25 kDa）接近：免疫沉淀后的Western Blot必須使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗，否則輕鏈信號會嚴重遮擋目標條帶。

2. 疊氮化鈉干擾HRP檢測：使用前根據檢測體系決定是否去除。

3. 物種交叉反應：已驗證人、小鼠，其他物種需自行驗證。

4. 儲存：2–8°C，不可冷凍。

七、結論

兔抗MAD2抗體（親和純化）是一款高濃度（1 mg/mL）、高特異性的多克隆抗體，適用于人和小鼠樣本中MAD2蛋白的免疫沉淀和免疫印跡檢測。其免疫原位于MAD2的C端區(qū)域（150–205），可有效識別全長MAD2。特別值得注意的是，由于MAD2分子量與兔IgG輕鏈非常接近，產品說明書中明確提供了免疫沉淀后Western Blot的優(yōu)化檢測方案（使用抗兔IgG輕鏈HRP抗體及正常豬血清），這一細節(jié)設計對于獲取可靠的IP-WB數據至關重要。該抗體是研究紡錘體組裝檢查點、染色體不穩(wěn)定性及腫瘤發(fā)生機制的有力工具。研究者可參考上述推薦條件進行實驗優(yōu)化，以獲得高質量的檢測結果。