一、產(chǎn)品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產(chǎn)品為兔源抗人/小鼠PBEF（pre-B-cell colony enhancing factor 1，又稱NAMPT或Visfatin）蛋白特異性多克隆抗體（貨號(hào)：A300-372A）。PBEF是一種多功能蛋白，既可作為細(xì)胞因子（visfatin）分泌于細(xì)胞外，調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)和血糖代謝，又作為胞內(nèi)酶——煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（NAMPT），催化NAD?生物合成的限速步驟。PBEF在脂肪組織高度表達(dá)，其水平與肥胖、2型糖尿病正相關(guān)，同時(shí)也參與B細(xì)胞分化、炎癥應(yīng)答及細(xì)胞存活等過(guò)程。本抗體經(jīng)抗原親和純化，識(shí)別PBEF蛋白第400–450位氨基酸區(qū)域，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）等多種應(yīng)用，是代謝、炎癥及腫瘤研究領(lǐng)域的重要工具。

二、詳細(xì)規(guī)格

參數(shù) | 規(guī)格

靶標(biāo) | PBEF（NAMPT/Visfatin）

反應(yīng)種屬 | 小鼠、人

應(yīng)用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

免疫原 | 人PBEF蛋白第400–450位氨基酸之間的區(qū)域（Swiss-Prot P43490）

抗體類型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

儲(chǔ)存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09% 疊氮鈉

三、產(chǎn)品制備與質(zhì)量控制

本抗體采用固相載體固定的PBEF特異性表位進(jìn)行親和純化。免疫原對(duì)應(yīng)人PBEF（GeneID 10135，Swiss-Prot P43490）第400至450位氨基酸區(qū)域，該序列在人和小鼠之間高度保守。抗體經(jīng)抗原親和層析后，免疫球蛋白濃度通過(guò)比爾定律測(cè)定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）。

每批次質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：

Western blot：在人HEK293、HeLa或小鼠3T3-L1脂肪細(xì)胞裂解液中檢測(cè)到約55–60 kDa的特異性條帶（PBEF分子量約55 kDa）；使用重組PBEF蛋白作為陽(yáng)性對(duì)照。

免疫沉淀：6 ?g/mg裂解物可從細(xì)胞裂解液中有效富集內(nèi)源性PBEF，洗脫產(chǎn)物經(jīng)WB檢測(cè)信號(hào)明確。

免疫組化：對(duì)小鼠脂肪組織或人胎盤FFPE切片進(jìn)行染色，應(yīng)呈現(xiàn)胞漿及核周陽(yáng)性信號(hào)。

四、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

所有Western blot實(shí)驗(yàn)建議使用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液和抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過(guò)夜。以下為各應(yīng)用的推薦起始條件：

應(yīng)用 | 推薦稀釋度/用量 | 備注

Western Blot (WB) | 1:10,000 – 1:25,000 | 檢測(cè)細(xì)胞裂解液時(shí)，二抗推薦山羊抗兔IgG（H+L）（貨號(hào)A120-101P）；檢測(cè)免疫沉淀物時(shí)，二抗建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉液中加入5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）以消除重鏈干擾。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ?g/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ?l抗體（1 mg/ml濃度對(duì)應(yīng)6 ?g）。推薦與Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠孵育2–4小時(shí)或過(guò)夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:2,000 – 1:10,000 | 對(duì)福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（高壓或微波）。建議進(jìn)行梯度滴定以確定最佳稀釋度。

五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：2 - 8°C，嚴(yán)禁冷凍。冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體聚集及活性喪失。

有效期：自收貨之日起1年，在2-8°C未稀釋、避光保存。

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸，收貨后請(qǐng)立即存放于2-8°C。

防腐劑：緩沖液含0.09%疊氮鈉，可抑制微生物生長(zhǎng)。注意：疊氮鈉會(huì)抑制HRP活性，若用于非HRP檢測(cè)系統(tǒng)（如熒光）則無(wú)影響；若需去除，可通過(guò)透析或脫鹽柱處理。

六、注意事項(xiàng)

1. 僅限科研使用：不得用于臨床診斷或治療。

2. 特異性驗(yàn)證：PBEF存在多種翻譯后修飾及剪切異構(gòu)體，建議在實(shí)驗(yàn)中使用已知陽(yáng)性對(duì)照（如3T3-L1脂肪細(xì)胞裂解液或重組PBEF蛋白）驗(yàn)證抗體識(shí)別條帶的正確分子量（~55 kDa）。

3. 樣品制備：檢測(cè)分泌型PBEF時(shí)，需收集細(xì)胞培養(yǎng)上清并濃縮；檢測(cè)胞內(nèi)PBEF時(shí)，推薦使用RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑）。

4. IHC抗原修復(fù)：對(duì)FFPE切片，必須進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（枸櫞酸鹽pH 6.0），否則信號(hào)減弱。建議同時(shí)進(jìn)行不含一抗的陰性對(duì)照。

5. 安全操作：疊氮鈉有毒，操作時(shí)請(qǐng)佩戴手套。廢液按有害物處理。

6. 應(yīng)用范圍：本抗體未經(jīng)驗(yàn)證用于ELISA或流式細(xì)胞術(shù)，若需使用請(qǐng)自行優(yōu)化。

七、相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品類型 | 貨號(hào)（示例） | 描述

二抗（WB） | A120-101P | 山羊抗兔IgG（H+L）HRP偶聯(lián)物

二抗（IP-WB） | 輕鏈特異性 | 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，需配合正常豬血清（S100-020）

陽(yáng)性對(duì)照裂解物 | 可咨詢 | 3T3-L1脂肪細(xì)胞裂解物或重組PBEF蛋白

阻斷肽 | A300-372P | 對(duì)應(yīng)免疫原的競(jìng)爭(zhēng)肽，用于抗體特異性驗(yàn)證