PhotoCol甲基丙烯酸酯膠原蛋白克釕試劑盒--獨特可調屬性

Advanced BioMatrix提供的PhotoCol甲基丙烯酸酯膠原蛋白克釕試劑盒，是一種純化的甲基丙烯酰化I型牛膠原蛋白套件，它提供了具有獨特可調屬性的類似天然3D膠原蛋白凝膠，這些凝膠在不同濃度下制備并以可見光交聯。

艾美捷PhotoCol甲基丙烯酸酯膠原蛋白克釕試劑盒（ABM-5271-1KIT）由純化的甲基丙烯酰化I型牛膠原蛋白作為核心組分，以及套件中的其他支持試劑組成。

PhotoCol甲基丙烯酸酯膠原蛋白克釕試劑盒制備說明：

注意：在整個制備和處理膠原蛋白及其他溶液的過程中，要采用無菌操作以保持產品的無菌性。

注意：建議在制備膠原蛋白期間將膠原蛋白和其他工作溶液冷藏，并保持在冰上。

注意：在任何步驟中均不推薦使用渦旋混合器。

1. 向凍干的甲基丙烯酰化膠原蛋白中加入20 mM醋酸的體積（如下所示），以達到所需的濃度。推薦的濃度范圍從3到8 mg/ml。

2. 在2-10°C的溫度下，在搖床或旋轉平臺上混合，直至完全溶解，或過夜。盡可能避免形成氣泡。

注意：較高濃度的膠原蛋白需要更長時間來溶解。

3. 確定所需的膠原蛋白體積。

4. 確定要與膠原蛋白混合的中和溶液（NS）的體積。為了達到Z終pH值7.0至7.4，按照表4或表5中的指南操作。注意：由于不同膠原蛋白濃度的粘度不同，以及通過移液管尖端的樣品保持時間不同，稱重與體積分配會有所差異。

5. 將所需的中和溶液（NS）體積轉移到無菌容器或管中，并短暫冷藏。注意 - 如果中和溶液冷藏時間過長，鹽分會從溶液中析出。

6. 如果需要光交聯，通過將膠原蛋白和中和溶液的總體積乘以0.02來計算所需的每種光引發劑的體積。如果結果是100 ul，您將添加100 ul的釕和100 ul的過硫酸鈉。

7. 在1X PBS或細胞培養基中，以37.4 mg/ml的濃度溶解所需的釕。

8. 在1X PBS或細胞培養基中，以119 mg/ml的濃度溶解所需的過硫酸鈉。

9. 將計算出的釕光引發劑體積添加到中和溶液（NS）中，并徹底混合。

10. 將計算出的過硫酸鈉光引發劑體積添加到膠原蛋白溶液中，并徹底混合。

11. 將冷藏的膠原蛋白/過硫酸鈉總體積轉移到冷藏的中和溶液/釕中。通過移液或旋轉容器或管快速且徹底地混合。不要使用渦旋混合器。

注意：在整個過程中保持膠原蛋白混合物冷藏。

注意：檢查確保pH值中性。由于這種材料的高粘度，可能更難混合。

12. 如果需要，將分散的冷藏細胞添加到膠原蛋白混合物中。通過移液或旋轉容器或管快速且徹底地混合。

注意：如果擔心氣泡問題，可以讓它在冰上靜置，直到氣泡上升到表面。

13. 將膠原蛋白混合物分配到所需的無菌板或培養容器中。

14. 在37°C下孵化超過30分鐘以形成凝膠。

15. 如果需要交聯，直接放置在400-450 nm的光源下。

注意：通過在具有良好光學特性且產生Z小光散射的玻璃底物上板凝膠，可以改善交聯的一致性和保真度。

PhotoCol甲基丙烯酸酯膠原蛋白克釕試劑盒文獻參考：

1. Gaudet, I. D., Characterization of MethacryatedType-I Collagen as a Dynamic PhotoactiveHydrogel, Biointerphases, 2012 Dec; 7(1): 25.

2. Drzewiecki K. E., Methacrylation Induces Rapid,Temperature-Dependent, Reversible Self-Assemblyof Type-I Collagen, Langmuir. 2014 Sep 23; 30(37):11204–11211.