用于通過發(fā)光免疫法直接定量測定人血清中的游離睪酮。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品游離睪酮LIA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

游離睪酮LIA, 96孔試驗(yàn)原理：

以下化學(xué)發(fā)光免疫測定的原理遵循典型的競爭性結(jié)合場景。未標(biāo)記的抗原（存在于校準(zhǔn)品、對照品和患者樣本中）和酶標(biāo)記的抗原之間發(fā)生競爭，爭奪微孔板上有限數(shù)量的抗體結(jié)合位點(diǎn)。洗滌和潷析程序可以去除未捆綁的材料。在洗滌步驟之后，加入發(fā)光基板。相對發(fā)光（RLU）在微量滴定板光度計(jì)上測量。RLU值與樣品中游離睪酮的濃度成反比。使用一組校準(zhǔn)器繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從中可以直接讀取患者樣本和對照中游離睪酮的量。該檢測系統(tǒng)中使用的標(biāo)記睪酮（結(jié)合物）對SHBG和人血清白蛋白沒有結(jié)合特性。使用低結(jié)合能力（Keq x濃度）的高度特異性兔抗睪酮多克隆抗體來最小化睪酮蛋白平衡的干擾。測試系統(tǒng)中的其他組件也經(jīng)過優(yōu)化，不會(huì)改變原始的游離睪酮濃度。

臨床應(yīng)用

睪酮是一種C-19類固醇，男性由睪丸和腎上腺皮質(zhì)分泌，女性則由腎上腺皮質(zhì)和卵巢分泌。睪酮也可以由外周組織從雄烯二酮轉(zhuǎn)化而來，這在男性中生理意義不大。然而，在女性中，大約一半的循環(huán)睪酮來源于此。睪酮測量主要用于男性性腺功能減退和女性高雄激素狀態(tài)的臨床評估。睪酮在血液中與三種蛋白質(zhì)結(jié)合：性激素結(jié)合球蛋白（60-80%）、白蛋白和皮質(zhì)醇結(jié)合球蛋白。只有大約1-2%的總循環(huán)睪酮保持未結(jié)合或游離狀態(tài)。盡管仍在研究之中，但大多數(shù)研究者接受游離睪酮測定作為生物活性部分的衡量標(biāo)準(zhǔn)。推薦測定游離睪酮以克服運(yùn)輸?shù)鞍鬃兓瘜偛G酮濃度的影響。

測定程序

重要提示：

- 使用前所有試劑必須達(dá)到室溫。

- 校準(zhǔn)品、對照品和樣本應(yīng)以雙份進(jìn)行測定。

- 一旦開始程序，所有步驟都應(yīng)連續(xù)完成，不得中斷。

1. 準(zhǔn)備游離睪酮-HRP結(jié)合物、洗滌緩沖液和LIA底物的1X工作溶液（參見提供的試劑和準(zhǔn)備部分）。

2. 取出所需的孔條數(shù)量。重新密封袋子，并將任何未使用的孔條放回冷藏。

3. 向相應(yīng)標(biāo)記的孔中分別準(zhǔn)確移液25 μL的每種校準(zhǔn)品、對照品和樣本（建議使用多通道移液管）。

4. 向每個(gè)孔中準(zhǔn)確移液100 μL的結(jié)合物工作溶液。（建議使用多通道移液管）。

5. 覆蓋板子，然后在37°C下孵育板子1小時(shí)。

6. 用稀釋后的洗滌緩沖液每個(gè)孔300 μL洗滌孔3次，并用吸水紙牢固拍打板子以確保其干燥。（建議使用洗滌器）。

7. 用每個(gè)孔300 μL的沖洗液再次洗滌孔3次，并用吸水紙牢固拍打板子以確保其干燥。

8. 向每個(gè)孔中準(zhǔn)確移液130 μL的LIA工作底物溶液。（建議使用多通道移液管）。

9. 在加入底物后10-30分鐘內(nèi)，在微孔板化學(xué)發(fā)光儀上測量每個(gè)孔的相對發(fā)光單位（RLUs）。

典型校準(zhǔn)器曲線

僅示例曲線。請勿用于計(jì)算結(jié)果。

文獻(xiàn)參考：

1. Winter SJ, et al. The Analog Free Testosterone Assay: Are the Results in Men ClinicallyUseful. Clin Chem. 1998; 44(10):2178–82.

2. Ooi DS, et al. Establishing Reference Interval for DPC’s Free TestosteroneRadioimmunoassay. Clin Biochem. 1998; 31(1):15–21.

3. Marcus GJ, Dumford R. A Simple Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Testosterone.Steroids. 1985; 46:975–86.

4. Joshi UM, et al. A Sensitive Specific Enzyme Immunoassay for Serum Testosterone.Steroids. 1979; 34(1):35–46.

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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