ALPCO科研級 Igf-1 elisa, 96孔，適用于廣泛的生物學應用

胰島素樣生長因子（IGF）I和II在調節許多細胞類型的增殖、分化和特定功能中起著關鍵作用（1-3）。IGF-I與生長調節素C（Sm-C）相同（4），分子量為7649道爾頓（5）。其主要調節因素是生長激素（GH）和營養（6），盡管特定組織中的其產生受到多種營養激素和其他肽類生長因子的影響。IGFs與特定的結合蛋白（IGFBP）緊密結合。目前已知有七種IGFBP（7,8,22）。IGF-I測量的一個主要問題是由于IGFBPs在測定中的干擾。在未處理的血清樣本中直接測定（11）會給出錯誤的值，因為在測定孵化過程中IGF-I/IGFBP-3復合物的解離極其緩慢。IGF-I在各種體液和許多細胞系的條件培養基中含量較低。然而，由于IGFBPs的存在，通常數量過多，這些樣本中IGF-I的測定尤其困難。IGFBP-阻斷的IGF-I ELISA避免了這些問題，允許在眾多樣本中簡單、正確、敏感地測定IGF-I，且時間花費最小。在測量前，采用了各種技術將IGF-I從其結合蛋白中物理分離，包括（a）酸性條件下的尺寸排除色譜法，（b）固相萃取，和（c）酸乙醇提取（2,12,13）。然而，這些技術要么不方便，耗時，要么給出不完整和不可重復的回收率。最廣泛使用的方法是非乙醇提取（13,14），由于共沉淀，只能回收70-80%的IGFBP結合IGF-I。因此，這種提取的絕對結果是錯誤的低值（15）。提取去除IGFBPs不充分，并由于提取過程中樣本的預稀釋，導致測定靈敏度降低。此外，剩余的IGFBP仍可能在測定中產生干擾。此外，酸乙醇提取在血清或血漿以外的樣本中無效（例如細胞培養基），在這些樣本中IGF-I的測定已經很困難，因為IGFBPs經常大量存在。為了避免這些挑戰，開發了一種不要求特殊樣本準備的簡單測定方法。

一種酶免疫測定法，用于定量測定人血清、血漿和細胞培養基中IGF-I的水平。僅供研究使用。不用于診斷程序。

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Igf-1 elisa, 96孔檢測原理：

為了將IGF-I從IGFBPs中解離，樣本必須在酸性緩沖液（樣本緩沖液SB）中稀釋（見圖1）。然后將稀釋后的樣本移入測定孔中。IGF-I抗血清溶解在一個緩沖液中，該緩沖液中和酸性樣本。在IGF-I抗體溶液中和樣本后，存在的過量IGF-II占據結合蛋白的IGF結合位點，從而允許測定結果中的游離IGF-I。通過這種方法，IGFBPs并沒有被移除，但是它們的功能，因此它們在測定中的干擾被中和。由于IGF-I抗體與IGF-II的交叉反應性極低，過量的IGF-II不會干擾第一抗體與IGF-I的相互作用。

IGF-I ELISA是一種所謂的夾心測定法，使用兩種特異性高親和力抗體。樣本中的IGF-I與涂覆在微孔板上的第一抗體結合，然后第二種特異性抗IGF-I抗體轉而與固定的IGF-I結合。第二種抗體是生物素標記的。隨后，鏈霉親和素過氧化物酶酶結合物將與之結合，在最終的底物孵化步驟中，顏色將根據樣本中IGF-I的水平定量發展。IGF-I ELISA的校準品是由重組IGF-I制備的，濃度分別為2、5、15、30和50 ng/mL。

樣本

1 樣本類型

血清和肝素/EDTA血漿產生可比較的數值。由于抗凝劑的相對含量高，檸檬酸血漿樣本中的IGF-I水平會降低。此外，細胞培養基已被評估并認定為合適的樣本類型。IGF-1可能會有相當大的變化，用戶必須確定最佳的稀釋比例。

2 樣本收集

血液樣本采集應使用標準靜脈穿刺。應避免溶血。

3 所需樣本體積：10 ?L

4 樣本穩定性

在緊閉的樣本瓶中：

- 儲存在20-25°C（68-77°F）：最長24小時

- 儲存在-20°C：最少2年

- 凍融周期最多3次

在-20°C（-4°F）儲存樣本2年以上對讀數沒有影響。應盡量減少樣本的冷凍和解凍。三次凍融周期對樣本沒有影響。

5 干擾

樣本中的甘油三酯、膽紅素和血紅蛋白在100 mg/mL、200 ?g/mL和1 mg/mL的濃度下不會干擾檢測。然而，用戶應驗證使用溶血、脂血或黃疸樣本。

6 樣本稀釋

- 稀釋：1:21與樣本緩沖液SB

- 在PE/PP管中移液200 ?L樣本緩沖液SB（建議在處理大量樣本時使用多通道移液器）；加入10 ?L樣本（稀釋1:21）。混合后在測定中使用2 x 20 ?L的這種稀釋液。

- 注意：血清和血漿樣本至少必須在樣本緩沖液SB中稀釋1:10，以實現樣本的充分酸化。

- 根據預期的IGF-I值，樣本可以在樣本緩沖液SB中進行更高稀釋。

- 樣本稀釋后的穩定性：在20-25°C（68-77°F）下最長2小時。

文獻參考：

1. Baxter RC. 1986 The somatomedins: insulin-like growth factors. Adv Clin Chem.25:49-115

2. Daughaday WH, Rotwein P. 1989 Insulin-like growth factors I and II. Peptide, messenger ribonucleic acid and gene structures, serum, and tissue concentrations. Endocr Rev. 10:68-91

3. Spencer EM (Ed.) 1991 Modern Concepts of Insulin-Like Growth Factors. New York: Elsevier.

4. Klapper DG, Svoboda ME, Van Wyk JJ. 1983 Sequence analysis of somatomedin-C:confirmation of identity with insulin-like growth factor-I. Endocrinology 112:2215-2217. 

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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