骨鈣素（完整）ELISA是一種用于定量測量的免疫酶測定法血清中完整的人骨鈣素（OST）。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品骨鈣素（完整）ELISA。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

骨鈣素（完整）ELISA檢測原理：

骨鈣素（完整型）酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是一種在易碎的微孔板（microtiterplates）上進(jìn)行的固相酶放大靈敏度免疫測定。該測定使用針對人骨鈣素不同表位的單克隆抗體（MAbs）。校準(zhǔn)品和樣品與涂覆在微孔板上的捕獲單克隆抗體（MAb 1）以及與辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的單克隆抗體（MAb 2）反應(yīng)。經(jīng)過一段時間的孵育，形成夾心結(jié)構(gòu)：涂覆的MAb 1 - 人骨鈣素 - MAb 2 - HRP，然后洗滌微孔板以去除未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體。通過顯色反應(yīng)測量結(jié)合的酶標(biāo)記抗體。添加顯色溶液（TMB即用型）并進(jìn)行孵育。通過添加終止液來停止反應(yīng)，然后讀取微孔板在適當(dāng)波長下的吸光度。通過測量吸光度來比色測定底物轉(zhuǎn)化量，該吸光度與骨鈣素濃度成正比。

繪制校準(zhǔn)曲線，并通過校準(zhǔn)曲線插值確定樣品中骨鈣素的濃度。

生物活性：

骨鈣素或骨Gla蛋白（B.G.P）是骨基質(zhì)的主要非膠原蛋白

分子量為5800Da并且含有49個氨基酸。骨鈣素是由成骨細(xì)胞在骨中合成的。之后

在生產(chǎn)過程中，它部分被納入骨基質(zhì)，其余部分則存在于血液循環(huán)中。

骨鈣素的確切生理功能尚不清楚。大量研究表明

骨鈣素的循環(huán)水平反映了骨形成的速度。

試劑準(zhǔn)備：

1. 校準(zhǔn)品：用1.0毫升蒸餾水重懸零校準(zhǔn)品和其他校準(zhǔn)品。

2. 控制品：用1.0毫升蒸餾水重懸控制品。

3. 工作用抗骨鈣素-HRP結(jié)合物：通過向2毫升結(jié)合物緩沖液中加入40微升濃縮的抗骨鈣素-HRP結(jié)合物來準(zhǔn)備足夠的結(jié)合物溶液。使用漩渦混合器混合均勻。使用前立即準(zhǔn)備。

4. 工作洗滌液：通過向1體積的洗滌液（200倍）中加入199體積的蒸餾水來準(zhǔn)備足夠的1倍工作洗滌液。使用磁力攪拌器混合均勻。當(dāng)天結(jié)束時丟棄未使用的1倍工作洗滌液。

試劑的儲存和有效期：

? 在開封或重懸之前，如果儲存在2-8°C的環(huán)境中，所有試劑組分在瓶簽上標(biāo)明的有效期前都是穩(wěn)定的。

? 未使用的孔必須儲存在2-8°C的環(huán)境中，并放在含有干燥劑的密封袋中，直到有效期。

? 重懸后，校準(zhǔn)品和控制品非常不穩(wěn)定，重懸后立即使用。對于更長時間的儲存，應(yīng)分裝并在-20°C下保存，最長不超過6周。使用后立即冷凍，不要等到所有樣品都移液后再冷凍。避免后續(xù)的凍融循環(huán)。

? 濃縮洗滌液在常溫下直到有效期前都是穩(wěn)定的。

? 新鮮配制的1倍工作洗滌液應(yīng)在當(dāng)天內(nèi)使用。

? 第一次使用后，如果儲存在原始密閉瓶中2-8°C的環(huán)境中，濃縮結(jié)合物在有效期前是穩(wěn)定的。

? 如果試劑組分的物理外觀發(fā)生變化，可能表明不穩(wěn)定或變質(zhì)。

樣品收集和準(zhǔn)備：

? 通過靜脈采血，注意避免溶血；樣品必須保存在冰浴中。在3小時內(nèi)將血清與細(xì)胞分離，推薦使用冷藏離心機(jī)。離心后立即向血清中加入100微升的Trasylol?（10000 IU/mL）（以獲得每毫升樣品1000 IU Trasylol?）。

? 經(jīng)過這種處理后，樣品在2-8°C下穩(wěn)定3天。如果需要更長時間的延遲，樣品必須冷凍（-20°C），但樣品只能解凍一次！對于重復(fù)測試，應(yīng)分裝冷凍樣品，并在第一次解凍后丟棄每個樣品。

? 不要使用溶血或脂血的樣品。

文獻(xiàn)參考：

1. J.P. BROWN, P.D. DELMAS and al. (May 19, 1984)."Serum BGP: a specific marker for bone formation in postmenopausal osteoporosis". The Lancet, 1091-1093.

2. P.A. PRICE. (1985). "Vitamin K-dependent formation of osteocalcin and its function".Vitamins and hormones, 42,65-108.

3. R.E. COLEMAN, G. MASHITER and al. (1988). "Osteocalcin: a potential marker of metastatic bone disease and response to treatment".Eur. J. Cancer Clin. Oncol., 24,1211-1217.

4. S. MINISOLA and al. (1988). "Serum osteocalcin in primary hyperparathyroidism: shortterm effect of surgery". Mineral Electrolyte Metab., 14,201-207.

5. L.A. COULTON, C.J. PRESTON and al. (1988). "An evaluation of serum osteocalcin in Paget's disease of bone and its response to diphosphonate treatment". Arthritis and Rheumatism, 31,9,1142-1147. 

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長。

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