該ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）試劑盒用于定量測(cè)定血漿樣本中胰高血糖素樣肽-1（7-36）[GLP-1（7—36）]和（9—36）[GLP1（9—36]的總值。GLP-1肽的一級(jí)氨基酸序列在哺乳動(dòng)物物種中是相同的，即大鼠、小鼠、豬、人等。該試劑盒僅用于研究目的

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷(xiāo)產(chǎn)品GLP-1(7-36和9-36)ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

GLP-1(7-36和9-36)ELISA, 96孔檢測(cè)原理：

ALPCO STELLUX? C肽化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種夾心類(lèi)型的免疫測(cè)定法。96孔微孔板被涂覆有特異性針對(duì)C肽的單克隆抗體。標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣本被添加到微孔板孔中，同時(shí)加入檢測(cè)緩沖液。然后，微孔板在室溫下放置在微孔板振蕩器上，以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩。第一次孵育完成后，孔被洗滌緩沖液清洗并吸干。然后添加檢測(cè)抗體，微孔板再次在微孔板振蕩器上以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度孵育，之后進(jìn)行清洗和吸干。接著向孔中添加鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶，進(jìn)行第三次孵育，同樣在室溫下以700-900轉(zhuǎn)每分鐘的速度振蕩，然后清洗并吸干。加入化學(xué)發(fā)光底物，并通過(guò)化學(xué)發(fā)光板讀數(shù)器在一分鐘內(nèi)讀取微孔板。產(chǎn)生的光強(qiáng)度與樣本中C肽的含量成正比。

樣本收集

1. 在樣本收集前，無(wú)需對(duì)個(gè)體進(jìn)行特殊準(zhǔn)備。然而，空腹樣本和非空腹/葡萄糖誘導(dǎo)樣本可能會(huì)顯著影響總GLP-1水平。

2. 至少在樣本收集前48小時(shí)內(nèi)，不應(yīng)從服用含有生物素的多種維生素或飲食補(bǔ)充劑的供體中采集樣本。

3. 可以使用BD? P700血液收集和保存系統(tǒng)（含有DPP-4蛋白酶抑制劑混合物）和紫色頂蓋的Vacutainer? EDTA-血漿管進(jìn)行樣本收集。

4. 如果使用Vacutainer? EDTA-血漿管進(jìn)行樣本收集，建議（但非必要）在收集后立即向收集的EDTA全血中加入適量的DPP-4抑制劑。請(qǐng)參閱DPP-4抑制劑制造商的說(shuō)明。倒轉(zhuǎn)管子混合均勻，并將管子放置在冰浴中。在冷藏離心機(jī)中以1000 g離心10分鐘。注意：由于強(qiáng)烈建議使用DPP-4抑制劑的樣本來(lái)測(cè)量活性GLP-1 (7-36)，如果同一樣本將用于活性GLP-1 (7-36)和總GLP-1的測(cè)量，則應(yīng)在樣本收集中包含DPP-4抑制劑。

5. 如果在收集后3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行測(cè)試，血漿樣本應(yīng)存放在2-8°C。對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的存儲(chǔ)，建議將血漿樣本存放在-70°C。如有必要，可在冷凍前分裝樣本。

結(jié)果解釋

1. 計(jì)算每對(duì)重復(fù)測(cè)試結(jié)果的平均吸光度。

2. 從所有其他讀數(shù)的平均吸光度中減去STD 1（0 ng/mL）的平均吸光度，以獲得校正吸光度。

3. 通過(guò)使用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)紙，將所有標(biāo)準(zhǔn)水平的校正吸光度（縱坐標(biāo)）與標(biāo)準(zhǔn)濃度（橫坐標(biāo)）相對(duì)應(yīng)，生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用適當(dāng)?shù)挠?jì)算機(jī)輔助數(shù)據(jù)縮減程序來(lái)計(jì)算結(jié)果。我們建議使用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)或二次曲線擬合。使用各自的校正吸光度直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取對(duì)照品和測(cè)試樣本的GLP-1 (7-36)濃度。

本酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的設(shè)計(jì)、開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)旨在定量測(cè)量血漿樣本中的GLP-1（7-36）和（9-36）。該試驗(yàn)采用雙位點(diǎn)“夾心”技術(shù)，使用兩種選定的GLP-1抗體。本試驗(yàn)使用與活性GLP-1（7-36）ELISA（產(chǎn)品編號(hào)43-GP1HU-E01）相同的校準(zhǔn)品和示蹤抗體。

試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和測(cè)試樣本直接添加到涂有鏈霉親和素的微孔板孔中。隨后，向每個(gè)孔中添加生物素標(biāo)記的GLP-1特異性抗體和辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的GLP-1特異性抗體的混合物。在第一次孵育期后，形成“鏈霉親和素-生物素抗體-GLP1(7-36)/(9-36)-HRP偶聯(lián)抗體”的“夾心”免疫復(fù)合物，并附著在板壁上。在隨后的洗滌步驟中去除未結(jié)合的HRP偶聯(lián)抗體。

為了檢測(cè)這個(gè)免疫復(fù)合物，每個(gè)孔隨后與底物溶液孵育一段時(shí)間的反應(yīng)，并在分光光度計(jì)微孔板讀數(shù)器中進(jìn)行測(cè)量。微孔板孔壁上與GLP-1（7-36）/（9-36）結(jié)合的免疫復(fù)合物的酶活性與樣本中總GLP-1的含量成正比。

文獻(xiàn)參考：

1. Levy JC. Therapeutic intervention in the GLP-1 pathway in Type 2 diabetes. Diabet Med.2006 Mar;23 Suppl 1:14-9.

2. Mannucci E, Ognibene A, Cremasco F, Bardini G, Mencucci A, Pierazzuoli E, Ciani S,Fanelli A, Messeri G, Rotella CM. Glucagon-like peptide (GLP)-1 and leptin concentrationsin obese patients with Type 2 diabetes mellitus. Diabet Med. 2000 Oct;17(10):713-9.

3. Nauck MA, Weber I, Bach I, Richter S, Orskov C, Holst JJ, Schmiegel W. Normalizationof fasting glycaemia by intravenous GLP-1 ([7-36 amide] or [7-37]) in type 2 diabeticpatients. Diabet Med. 1998 Nov;15(11):937-45.

4. Byrne MM, G?ke B. Human studies with glucagon-like-peptide-1: potential of the guthormone for clinical use.

5. Mannucci E, Tesi F, Bardini G, Ognibene A, Petracca MG, Ciani S, Pezzatini A, Brogi M,Dicembrini I, Cremasco F, Messeri G, Rotella CM. Effects of metformin on glucagon-likepeptide-1 levels in obese patients with and without Type 2 diabetes. Diabetes Nutr Metab.2004 Dec;17(6):336-42. 

ALPCO產(chǎn)品種類(lèi)多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

作為ALPCO在中國(guó)區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶(hù)提供全面的ALPCO產(chǎn)品。