3'-末端寡核苷酸標(biāo)記試劑盒包含了進(jìn)行DNA寡核苷酸（長(zhǎng)度：20 - 100 bp，每反應(yīng)5 pmol）高效3'-末端標(biāo)記所需的所有緩沖液和試劑，唯獨(dú)不包括待標(biāo)記的寡核苷酸模板和標(biāo)記核苷酸。標(biāo)記原理基于末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT），它能在CoCl2存在的條件下，非依賴模板地將標(biāo)記核苷酸轉(zhuǎn)移到單鏈DNA（例如一個(gè)寡核苷酸）的3'-OH基團(tuán)上。核苷酸的數(shù)量，從而標(biāo)記的結(jié)合，取決于核苷酸的類型（UTP/ddUTP）以及標(biāo)記的類型。標(biāo)記的UTP：平均1至3個(gè)標(biāo)記；標(biāo)記的dUTP：多重標(biāo)記（尾部長(zhǎng)度高度依賴于核苷酸特異性）；標(biāo)記的ddUTPs：1個(gè)標(biāo)記。所得的3'-末端標(biāo)記寡核苷酸非常適合用于涉及序列特異性蛋白結(jié)合或雜交的應(yīng)用，如電泳遷移率變化分析（EMSA）、Northern或Southern印跡。與內(nèi)部隨機(jī)標(biāo)記的探針相比，標(biāo)記僅位于3'-末端，不太可能干擾探針的結(jié)合。TdT對(duì)單鏈DNA（ssDNA）有偏好，相對(duì)于具有3'-懸垂或平端的雙鏈DNA（dsDNA）。為了制備標(biāo)記的dsDNA復(fù)合物，應(yīng)分別標(biāo)記每個(gè)互補(bǔ)的寡核苷酸，并在使用前退火它們。

作為Jena Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Jena Bioscience 3 '-末端寡核苷酸標(biāo)記試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

組成：

末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）：

- TdT酶：30 μl（每μl含20 U），溶于100 mM醋酸鉀（pH 6.8）、2 mM 2-巰基乙醇、0.01% Triton X-100（體積比）以及50%甘油（體積比）。

- 5倍TdT反應(yīng)緩沖液：400 μl，包含1 M醋酸鉀肼（pH 7.2）、0.125 M Tris、0.05% Triton X-100（體積比）、5 mM氯化鈷（CoCl?）。

- 未標(biāo)記對(duì)照寡核苷酸（60 bp）：250 μl，1 μM，溶于1倍TE緩沖液，pH 7.6。

- PCR級(jí)水：12.5 ml。

- 1倍TE緩沖液，pH 7.6：100 ml，包含10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA。

- 終止緩沖液：400 μl，0.5 M EDTA溶液，pH 8。

運(yùn)輸：放置在凝膠包裝中運(yùn)輸。

儲(chǔ)存條件：存儲(chǔ)于-20°C。

附加儲(chǔ)存條件：避免凍融循環(huán)。

保質(zhì)期：12個(gè)月。

1. 3' 末端寡核苷酸標(biāo)記反應(yīng)

- 除了TdT之外，將所有組分存放在冰上直至使用。

- 將TdT存放在-20°C直至使用。

- 最終測(cè)定體積：50 ?l

- 模板要求：通過(guò)HPLC或凝膠電泳純化的寡核苷酸/單鏈DNA，長(zhǎng)度為20 – 100 bp。

- 按照下面列出的順序在冰上添加所有組分。

- 通過(guò)輕輕上下吸液的方式混合反應(yīng)，不要渦旋混合！

- 在37°C下孵育30分鐘。

- 添加1 ?l終止緩沖液（0.5 M EDTA溶液，pH 8）以停止每個(gè)反應(yīng)。

- 將反應(yīng)存放在冰上以備后續(xù)使用（見3.）或在-20°C下長(zhǎng)期保存。

Jena Bioscience的主要產(chǎn)品包括核苷/核酸制品系列（包括合成的類似物）、重組蛋白及蛋白表達(dá)系統(tǒng)、點(diǎn)擊化學(xué)產(chǎn)品系列、在結(jié)構(gòu)學(xué)研究方面全面提供晶體篩選試劑盒、優(yōu)化試劑、工具和各類耗材等。此外，還提供分子生物學(xué)和生物化學(xué)研究的定制試劑與研究服務(wù)。

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