固氮酶參與氮向可同化氨的生物固定。

本品為重組蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，來(lái)源：Nostoc/Anabaena 7120。

作為Agrisera全國(guó)總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Agrisera熱銷產(chǎn)品NifH|陽(yáng)性對(duì)照/定量標(biāo)準(zhǔn)品。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

NifH|陽(yáng)性對(duì)照/定量標(biāo)準(zhǔn)品：

格式：凍干粉

數(shù)量：100微升

復(fù)溶：復(fù)溶時(shí)加入90微升無(wú)菌水。請(qǐng)注意，本產(chǎn)品含有10%甘油，可能看起來(lái)像液體，但提供時(shí)是凍干的。

儲(chǔ)存：凍干/復(fù)溶后儲(chǔ)存于-20°C；一旦復(fù)溶，請(qǐng)分裝以避免反復(fù)凍融。請(qǐng)?jiān)诖蜷_前短暫離心管，以避免由于凍干物料粘附在管蓋或管壁上而造成的任何損失。

測(cè)試應(yīng)用：西方印跡（WB）

推薦稀釋：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：建議加載3個(gè)樣本量（0.5、2和4微升）。

對(duì)于大多數(shù)應(yīng)用，0.2微克葉綠素的樣本量將在這個(gè)范圍內(nèi)給出NifH信號(hào)。

陽(yáng)性對(duì)照：對(duì)于大多數(shù)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)，每個(gè)孔加載2微升是最佳的。

該標(biāo)準(zhǔn)品已穩(wěn)定，準(zhǔn)備就緒，上凝膠前不需要加熱。

請(qǐng)注意，本產(chǎn)品含有10%甘油，可能看起來(lái)像液體，但提供時(shí)是凍干的。加水后請(qǐng)?jiān)试S產(chǎn)品幾分鐘時(shí)間溶解。徹底但輕柔地混合。每次使用前請(qǐng)?zhí)貏e注意徹底混合，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)在冷凍后會(huì)因更密集的層而沉淀。

預(yù)期/表觀分子量：

34 kDa（由于添加了His標(biāo)簽，比天然蛋白大）

不反應(yīng)于：目前沒(méi)有已知的預(yù)測(cè)反應(yīng)性例外。

額外信息：

NifH蛋白標(biāo)準(zhǔn)品可以與全球抗NifH抗體結(jié)合使用，以定量從廣泛的藍(lán)細(xì)菌物種中定量NifH蛋白。全球抗體是針對(duì)NifH蛋白中發(fā)現(xiàn)的高度保守的15個(gè)氨基酸序列產(chǎn)生的。

定量西方印跡：詳細(xì)方法描述，視頻教程

額外信息（應(yīng)用）：

濃度：加入90微升超純水后，該標(biāo)準(zhǔn)的最終濃度為0.15 pmoles/ul，該試劑已準(zhǔn)備好使用并加載到凝膠上。

蛋白標(biāo)準(zhǔn)緩沖液成分：甘油10%，Tris堿141 mM，Tris HCl 106 mM，LDS 2%，EDTA 0.51 mM，SERVA? Blue G250 0.22 mM，酚紅0.175 mM，pH 8.5，0.1mg/ml PefaBloc蛋白酶抑制劑（Roche），50mM DTT。

該標(biāo)準(zhǔn)品已準(zhǔn)備好加載，不需要任何添加或加熱。使用前需要完全解凍并徹底混合。避免劇烈渦旋，因?yàn)榫彌_液中含有洗滌劑。混合后，在微量離心機(jī)中短暫脈沖以收集管蓋的物質(zhì)。

該標(biāo)準(zhǔn)品已穩(wěn)定，準(zhǔn)備就緒，上凝膠前不需要加熱。

請(qǐng)注意，本產(chǎn)品含有10%甘油，可能看起來(lái)像液體，但提供時(shí)是凍干的。加水后請(qǐng)?jiān)试S產(chǎn)品幾分鐘時(shí)間溶解。徹底但輕柔地混合。每次使用前請(qǐng)?zhí)貏e注意徹底混合，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)在冷凍后會(huì)因更密集的層而沉淀。

NifH|陽(yáng)性對(duì)照/定量標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用示例：

用Agrisera蛋白提取緩沖液PEB（AS08 300）提取的Trichodesmium sp.總蛋白提取物（泳道6-11，負(fù)載80 pmol葉綠素）和NifH蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（泳道1-5，0.05，0.1，0.3，0.75和1.5 pmol標(biāo)準(zhǔn)品）在4-12%NuPage（Invitrogen）LDS-PAGE上分離，并用PVDF印跡1小時(shí)。在室溫下攪拌下，在含有0.1%（v/v）吐溫-20（TBS-T）的20mM Tris、137mM氯化鈉（pH 7.6）中的2%阻斷劑中轉(zhuǎn)移1小時(shí)后，立即阻斷印跡。在室溫下攪拌下，將印跡在1:40000稀釋的第一抗體中孵育1小時(shí)。傾析抗體溶液，短暫沖洗印跡兩次，然后在室溫下攪拌下在TBS-T中洗滌一次15分鐘，洗滌三次5分鐘。在室溫下攪拌下，將印跡在2%封閉溶液中稀釋至1:50000的二抗（抗母雞IgY辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)物）中孵育1小時(shí)。如上所述洗滌印跡，并根據(jù)制造商的說(shuō)明，用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑在極端菲莫圖檢測(cè)中顯影5分鐘。使用CCD成像儀（FluorMax-Bio-Rad）和Quantity One軟件（Bio-Rad）獲得印跡圖像。

注：根據(jù)目標(biāo)蛋白的豐度，使用每條凝膠通道的適度樣品負(fù)載（通常為0.5至2.5 ug總蛋白）可以實(shí)現(xiàn)最佳定量。

定量：當(dāng)印跡中包含定量標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，可以使用可用軟件對(duì)樣品進(jìn)行定量。使用Bio-Rad QuantityOne軟件在Bio-Rad Fluor-S-Max或同等儀器上捕獲的圖像可以獲得出色的定量結(jié)果。輪廓工具用于選擇定量區(qū)域，并減去背景值，得出每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的調(diào)整后計(jì)數(shù)體積。使用上述協(xié)議，在目標(biāo)負(fù)載的1-1.5個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)生成線性標(biāo)準(zhǔn)曲線。值得注意的是，免疫檢測(cè)通常顯示出強(qiáng)烈的S形信號(hào)-負(fù)載響應(yīng)曲線，其中低負(fù)載的痕量檢測(cè)區(qū)域、偽線性范圍和高負(fù)載的飽和響應(yīng)區(qū)域。對(duì)于免疫定量，樣品中的靶蛋白和標(biāo)準(zhǔn)曲線必須落在偽線性范圍內(nèi)。我們使用該協(xié)議的總檢測(cè)范圍跨越了2個(gè)數(shù)量級(jí)，但可量化的范圍更窄。

定量蛋白質(zhì)印跡：詳細(xì)的方法描述。

文獻(xiàn)參考：

Levitan et a. (2010). Regulation of nitrogen metabolism in the marine diazotroph Trichodesmium IMS101 under varying temperatures and atmospheric CO concentrations. Environ. Microbiol (Epub ahead of print)

Agrisera 公司提供的植物領(lǐng)域的抗體涵蓋擬南芥、萊茵衣藻、藍(lán)藻、松柏類、硅藻、大豆、大麥、蒺藜苜蓿、煙草、稻、菜豆、小立碗蘚、楊樹、豌豆、番茄、馬鈴薯、菠菜、小麥、玉米、葡萄等多個(gè)物種，此外還有水生生物類（藻類、魚）抗體，細(xì)菌、昆蟲、真菌抗體。Agrisera 公司以提供高品質(zhì)、優(yōu)服務(wù)在歐洲樹立了優(yōu)秀的品牌形象，并成為瑞典 Umeå Plant Science Centre的抗體供貨商，同時(shí)還積極拓展全球市場(chǎng)，每年都有大批采用該公司抗體產(chǎn)品的高質(zhì)量研究論文發(fā)表于各類學(xué)術(shù)刊物，受到全球科研工作者的一致認(rèn)可。作為Agrisera在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供全面的Agrisera產(chǎn)品以及客戶訂制化服務(wù)。