PDF1（植物防御素1）對病原體具有廣譜抗性，并具有抗真菌活性。替代名稱：花藥特異性蛋白S18同源物、富含半胱氨酸的抗真菌蛋白1、AFP1、低分子量富含半胱氨酸的蛋白67、蛋白LCR67。

作為Agrisera全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Agrisera熱銷產(chǎn)品抗PDF 1|植物防御素1.1。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

抗PDF 1|植物防御素1.1：

免疫原：

與KLH共軛的合成肽，源自擬南芥PDF1.1蛋白序列，UniProt: P30224-1, TAIR: At1g75830。

該肽序列在以下擬南芥亞型中完全保守：PDF1.2c、PDF1.2b、PDF1.2A、PDF1.3。PDF2亞型序列在BLAST中未找到。

宿主：兔

克隆性：多克隆

純度：在PBS pH 7.4中的親和純化血清

格式：凍干粉

數(shù)量：50微克

復(fù)溶：復(fù)溶時加入50微升無菌水。

儲存：將凍干粉/復(fù)溶后的抗體存儲在-20°C；一旦復(fù)溶，請分裝以避免反復(fù)凍融。請在使用前短暫離心管，以避免由于凍干物質(zhì)粘附在管蓋或管壁上而造成的任何損失。

測試應(yīng)用：西方印跡（WB）

推薦稀釋度：

1:1000（WB）

預(yù)期/表觀分子量：8.7千道爾頓

確認的反應(yīng)性：擬南芥，番茄

預(yù)測的反應(yīng)性：擬南芥，甘藍型油菜，金縷梅，薺菜，高粱屬。

樣品：

使用的標(biāo)記是Euroclone公司的預(yù)染色蛋白SHARPMASS?VI蛋白MW標(biāo)記（5-245 kDa）。

樣品1：感染灰霉病菌后0小時，從野生型葉片中提取40?g擬南芥總蛋白（陰性對照）；

樣品2:40?g來自突變?nèi)~片的擬南芥總蛋白（誘導(dǎo)PDF1 mRNA表達），感染灰霉病菌后0小時（陽性對照）；

樣品3:40?g野生型擬南芥葉片在感染灰霉病菌24小時后的總蛋白（陽性對照，PDF1預(yù)計由實驗中使用的病原體誘導(dǎo)）；

樣品4:40?g來自灰霉病菌感染后24小時突變?nèi)~片（誘導(dǎo)PDF1 mRNA表達）的擬南芥總蛋白（陽性對照）；

樣品“-”，10?g在黑暗條件下生長的擬南芥總蛋白野生型幼苗（陰性對照）

用提取緩沖液（125 mm Tris，pH 6.8，4%[w/v]SDS，20%[v/v]甘油，0.02%[w/v]溴酚藍，10%[v/v]β-巰基乙醇）從擬南芥6周大的葉子中新鮮提取高達40?g/孔的總蛋白，并在95°C下變性7分鐘，在4-20%Mini-PROTEAN?TGX?預(yù)制蛋白凝膠（biorad）SDS-PAGE上分離，并使用Trans-Blot Turbo Transfer System（Bio-Rad）在PVDF（孔徑0.2?m）上印跡1小時。在攪拌下用5%牛奶阻斷印跡1小時/RT。將印跡在稀釋度為1:1000的第一抗體中孵育過夜（約16小時），在PBS-T中攪拌，攪拌溫度為+4°C。傾析抗體溶液，將印跡短暫沖洗兩次，然后在室溫下在PBS-T中攪拌洗滌一次15分鐘和三次5分鐘。在攪拌下，將印跡在稀釋至1:10000的Agrisera匹配的第二抗體（抗兔IgG辣根過氧化物酶偶聯(lián)）中孵育2h/RT。如上所述洗滌印跡，并用Agrisera ECL SuperBright with ChemiDoc Imaging Systems（Bio-Rad）顯影3分鐘。曝光時間為10秒。

左膜：蛋白質(zhì)印跡檢測。右膜：染色。

意大利羅馬大學(xué)Sapienza分校Ricardo Lorrani博士提供

文獻參考：

Nikoloudakis et al. (2020). Structural Diversity and Highly Specific Host-Pathogen Transcriptional Regulation of Defensin Genes Is Revealed in Tomato. Int J Mol Sci. 2020 Dec 9;21(24):9380. doi: 10.3390/ijms21249380. PMID: 33317090; PMCID: PMC7764197.

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