5-AMP活化蛋白激酶（AMPK）是細(xì)胞內(nèi)能量平衡的關(guān)鍵傳感器。AMPK 被激活以響應(yīng) AMP/ATP 比率的增加，這可能是由許多因素引起的，例如肌肉收縮、饑餓或缺氧。AMPK是一種異源三聚體蛋白復(fù)合物，由α-（63 kDa）、β-（38 kDa）和β-（38 kDa）亞基組成。對于每個亞基，已經(jīng)鑒定出亞型（alpha1，alpha2，1，2，1，2，3），理論上允許形成12種不同的蛋白質(zhì)。α亞基含有絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，調(diào)節(jié)亞基含有AMP和ATP（β亞基）和糖原（β亞基）的結(jié)合位點。AMPK在催化域內(nèi)通過Thr-172上的磷酸化被激活。與基礎(chǔ)水平相比，AMP 結(jié)合導(dǎo)致 AMPK 活性增加 2 至 5 倍。AMP 與 β 亞基的結(jié)合導(dǎo)致激酶的變構(gòu)活化并誘導(dǎo)激酶結(jié)構(gòu)域的構(gòu)象變化，從而保護(hù) AMPK 免受 Thr-172 的去磷酸化。

Genie 基于細(xì)胞的檢測 ELISA 可測量整個細(xì)胞中的磷酸化 AMPK，并將信號標(biāo)準(zhǔn)化為總蛋白質(zhì)含量。該抗體可識別α亞基，因此可用于來自所有組織（人，小鼠，大鼠）的細(xì)胞。這種簡單有效的檢測方法無需細(xì)胞裂解物制備，可用于研究短期和長期檢測中的 AMPK 調(diào)控。在該測定中，在96孔板中生長的細(xì)胞在孔中固定并透化。使用熒光ELISA測量AMPK磷酸化（pAMPK），然后在每個孔中測量總蛋白。用于培養(yǎng)細(xì)胞中AMPK磷酸化狀態(tài)的定量熒光免疫酶測定。

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