ADP/ATP比率測定試劑盒應用程序說明

ADP/ATP比率的變化已被用于區分細胞死亡和存活的模式。ATP水平升高和ADP水平降低表示細胞增殖。相反，ATP水平的降低和ADP水平的增加導致細胞凋亡或壞死，其中ATP的減少和ADP的增加在壞死中比在細胞凋亡中更明顯。Assay Genie LumiDazzle ADP/ATP比率檢測試劑盒提供了一種快速測量ADP和ATP水平的方法，用于篩選哺乳動物細胞的凋亡、壞死和細胞增殖。化驗包括兩個步驟。在第一步中，工作試劑裂解細胞以釋放ATP和ADP。在熒光素酶存在的情況下，ATP立即與底物D-熒光素反應產生光。光強度是細胞內ATP濃度的直接測量。

艾美捷 ADP/ATP比率測定試劑盒：

目錄代碼：BA0127

包裝尺寸：100assays

僅供研究使用

ADP/ATP比率測定試劑盒主要功能：

1、安全非放射性化驗。

2、均勻方便。“混合培養測量”型測定。不涉及清洗和試劑轉移步驟。堅固且適用于HTS：在96孔和384孔板中常規觀察到0.5及以上的Z’因子。可以在HTS液體處理系統上實現

3、完全自動化，每天處理數千個樣本。

應用程序

細胞凋亡和壞死的測定。

細胞增殖：細胞因子、生長因子、營養物質的影響。藥物發現：抗癌藥物的高通量篩選。

試劑盒內容：

測定緩沖液：10 mL

基質：120μl

共基質：120μl

ATP酶：120μl

ADP酶：120μL

儲存條件：試劑盒在冰上運輸。將所有試劑儲存在-20℃。本產品以干冰裝運。保質期：12

收到后數月。

注意事項：試劑僅供研究使用。使用試劑時，應采取實驗室試劑的常規預防措施。有關詳細信息，請參閱材料安全數據表。

化驗程序：

可以在試管或96孔板中進行分析。為了保持一致性，建議三個發光測量對于所有樣品是相同的。

測試程序：

可以在試管或96孔板中進行測試。為了保持一致性，建議所有樣品的三次發光測量之間的時間相同。

1.樣品制備。對于懸浮細胞，將10μL培養的細胞（10?-10'）轉移到白色不透明的96孔板中。

粘附細胞：在白色不透明微孔板中培養10?-104個細胞。在測定時，在加入90μL ATP試劑之前立即除去培養基（見下文）。

2.ATP測定。將測定緩沖液、底物和共底物置于室溫。在冰上或4℃下解凍酶。建議進行FreshReconstitution。將未使用的試劑（包括酶）儲存在20°C下。

ATP試劑。對于每個96孔，將95μL測定緩沖液與1μL底物、1μL共底物和1μL ATP酶混合。向每個孔中添加90μL ATP試劑，并通過輕敲平板進行混合。1分鐘后，讀取鋁量計上的發光（RLU A）。

3.ADP測定。制備ADP試劑：對于每個96孔，混合5μL dH?O與1μL ADP酶作用。

在讀取ATP（RLU A）的發光后10分鐘，再次讀取樣品（RLU B）的發光。該測量在測量ADP（即殘余ATP信號）之前提供背景。

讀取RLU B后，立即向每個孔中添加5μL ADP試劑，并通過輕敲板或上下移液進行混合。1分鐘后，在光度計上讀取發光（RLU C）。

4.ADP/ATP比值的計算。從RLU C中減去RLU B，然后除以RLU A：RLUC-RLUB ADP/ATP比率=RLU A

文獻參考：

1.Schafer ZT,et al.(2009). Antioxidant and oncogene rescue of metabolic defects caused by loss of matrix attachment.Nature.461(7260):109-113.

2.Bekeredjian R, et al.(2010). Conditional HIF-1alpha expression produces a reversible cardiomyopathy. PLos One. 5(7):

e11693.

3. Chandak PG, et al.(2010). Efficient phagocytosis requires triacylglycerol hydrolysis by adipose triglyceride lipase.JBiolChem.285(26):20192-201.

Assay Genie是一家來自愛爾蘭的生物科研試劑供應商，可提供超過180000種產品，產品種類豐富。公司主要有三條產品線：ELISA Genie，Assay Genie，Antibody Genie 。旗下涵蓋了15種種屬的高品質的ELISA試劑盒及多種抗體，可檢測的指標種類豐富，覆蓋免疫、代謝和分子等多種研究領域，是科學研究中便捷的小助手。