以下酶免疫測(cè)定測(cè)試的原理遵循典型的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合場(chǎng)景。競(jìng)爭(zhēng)發(fā)生在未標(biāo)記的抗原（存在于標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品中）和酶標(biāo)記的抗原（綴合物）用于微孔板上有限數(shù)量的抗體結(jié)合位點(diǎn)。這個(gè)洗滌和傾析程序去除未結(jié)合的材料。在洗滌步驟之后，將酶底物補(bǔ)充。通過(guò)加入終止溶液終止酶促反應(yīng)。測(cè)量吸光度我們的微量滴定板閱讀器。所形成的顏色的強(qiáng)度與樣品中的孕烯醇酮。標(biāo)準(zhǔn)一組標(biāo)準(zhǔn)用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和對(duì)照中的孕烯醇酮可以直接讀取。

艾美捷人孕烯醇酮ELISA Kit（BGT-KET-150）：用于通過(guò)酶免疫測(cè)定法直接定量測(cè)定人血清中的孕烯醇酮。

局限性：

1. 試劑盒內(nèi)的所有試劑均已校準(zhǔn)，僅用于直接測(cè)定人血清中的孕烯醇。試劑盒未校準(zhǔn)用于測(cè)定唾液、血漿或其他人源或動(dòng)物源樣本中的孕烯醇。

2. 不要使用明顯溶血、明顯脂血、黃疸或儲(chǔ)存不當(dāng)?shù)难濉?/p>

3. 任何含有疊氮化物或硫柳汞的樣本或?qū)φ昭迮c本試劑盒不兼容，因?yàn)樗鼈兛赡軐?dǎo)致虛假結(jié)果。

4. 只有標(biāo)準(zhǔn)A可用于稀釋任何高血清樣本。使用任何其他試劑可能導(dǎo)致虛假結(jié)果。

安全警告和注意事項(xiàng)：

潛在的生物危害材料：

用于制備標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的人血清已經(jīng)過(guò)測(cè)試，發(fā)現(xiàn)對(duì)乙型肝炎表面抗原無(wú)反應(yīng)，并且已經(jīng)測(cè)試了是否存在對(duì)丙型肝炎病毒(HCV)和人類免疫缺陷病毒(HIV)的抗體，結(jié)果為陰性。然而，沒(méi)有任何測(cè)試方法可以提供完全保證HIV、HCV和乙型肝炎病毒或任何傳染性因子的缺失。試劑應(yīng)被視為潛在的生物危害，并以與任何血液樣本相同的預(yù)防措施進(jìn)行處理。

化學(xué)危害：

避免與含有TMB（四甲基聯(lián)苯胺）、過(guò)氧化氫和硫酸的試劑接觸。如果接觸到這些試劑中的任何一種，請(qǐng)用大量水沖洗。TMB是可疑致癌物。

樣本收集與儲(chǔ)存：

每次重復(fù)測(cè)定需要大約0.2毫升的血清。將4-5毫升血液收集到適當(dāng)標(biāo)記的試管中并讓其凝固。離心后小心移除血清層。如果分析將在稍后進(jìn)行，可將其儲(chǔ)存在4°C下最多24小時(shí)，或儲(chǔ)存在-10°C或更低的溫度下。將所有人源樣本視為可能的生物危害材料，并在處理時(shí)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。

樣本預(yù)處理：

該測(cè)定是直接系統(tǒng)；不需要樣本預(yù)處理。

所需但未提供的試劑和設(shè)備：

1. 用于分配50、100、150和300微升的精密移液管

2. 一次性移液管尖

3. 蒸餾水或去離子水

4. 板式搖動(dòng)器

5. 帶有450納米濾光片和3.0或更高上OD限的微孔板閱讀器。

計(jì)算方法：

計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)樣本的平均光密度。

在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，平均光密度在Y軸上，標(biāo)準(zhǔn)品濃度在X軸上。如果使用免疫分析軟件，建議使用4參數(shù)或5參數(shù)曲線。

計(jì)算每個(gè)未知樣本重復(fù)測(cè)定的平均光密度。

直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取未知樣本的數(shù)值。

如果樣本測(cè)定結(jié)果超過(guò)25.6納克/毫升，則應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)A進(jìn)行稀釋，稀釋度不超過(guò)1:8。所得結(jié)果應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線：

這僅是一個(gè)樣本曲線，不要用來(lái)計(jì)算結(jié)果。

靈敏度：下限檢測(cè)限是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的，計(jì)算方法是確定標(biāo)準(zhǔn)A的平均OD（光密度，基于10次重復(fù)分析）的濃度減去2倍SD（標(biāo)準(zhǔn)差）。因此，孕烯醇ELISA試劑盒的靈敏度為0.05納克/毫升。