脂質(zhì)包被珠被設(shè)計(jì)用于蛋白質(zhì)下拉實(shí)驗(yàn)。用于檢測(cè)純化蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解物中蛋白質(zhì)的脂質(zhì)結(jié)合，或放射性標(biāo)記的體外翻譯產(chǎn)物的結(jié)合。

PI（3,4,5）P3珠由瓊脂糖組成，每毫升珠含有10納摩爾的結(jié)合PI（3,4-5）P2，足以進(jìn)行幾次蛋白質(zhì)結(jié)合實(shí)驗(yàn)。每1mL珠粒包括少量對(duì)照珠粒。更多數(shù)量的控制珠也可供購(gòu)買(mǎi)。

作為Biogradetech獨(dú)家代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Biogradetech熱銷(xiāo)產(chǎn)品PI(3,4,5)P3 瓊脂糖珠。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

脂質(zhì)珠 - 蛋白質(zhì)協(xié)議：

我們提供以下協(xié)議作為指南，并強(qiáng)烈鼓勵(lì)研究人員查閱科學(xué)文獻(xiàn)并進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，以確立對(duì)其感興趣的蛋白質(zhì)z有利的條件。

充分混合珠（不要使用渦旋）。將50 – 100 微升的50%珠懸液轉(zhuǎn)移到0.5 – 1.5 毫升的管中。

以1000 x g或更低的速度離心珠。小心移除上清液，避免丟失珠。

用10倍過(guò)量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復(fù)洗滌步驟兩次。

小心移除洗滌上清液，并將珠在含有您的蛋白質(zhì)的結(jié)合緩沖液中重新懸浮。 a. 對(duì)于純化的蛋白質(zhì)，使用1-10 微克的蛋白質(zhì)，用足夠的結(jié)合緩沖液稀釋形成50%脂質(zhì)珠懸液。 b. 對(duì)于細(xì)胞裂解物、提取物、亞細(xì)胞組分：使用大約1 毫克的總蛋白質(zhì)對(duì)1 毫升結(jié)合緩沖液。將整個(gè)1毫升的制備樣品加入到您洗滌過(guò)的珠中。

孵育蛋白質(zhì)-珠溶液1-3小時(shí)。孵育可以在室溫或4°C下進(jìn)行，取決于您蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。需要連續(xù)運(yùn)動(dòng)以保持珠懸浮。

離心珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用來(lái)監(jiān)測(cè)未結(jié)合的蛋白質(zhì)。

用10倍過(guò)量的洗滌緩沖液洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘。重復(fù)洗滌步驟五次。如果您選擇在結(jié)合緩沖液中使用牛血清白蛋白（BSA），請(qǐng)確保在進(jìn)行下一步之前將其徹底洗出。

在最后一次洗滌后，通過(guò)向珠中加入等體積的2X Laemmli樣品緩沖液（或類(lèi)似物）并加熱至70°C 10分鐘來(lái)洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。

加熱后，離心珠并移除上清液。將上清液儲(chǔ)存在4°C下，直到分析。丟棄珠。

蛋白質(zhì)可以通過(guò)SDS-PAGE分離，并通過(guò)凝膠的Coomassie藍(lán)染色、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移和免疫印跡來(lái)檢測(cè)感興趣的蛋白質(zhì)，或進(jìn)行自顯影。

文獻(xiàn)參考：

1) Hiromura, M., F. Okada, et al. (2004). “Inhibition of Akt kinase activity by a peptide spanning the betaA strand of the proto-oncogene TCL1.” J Biol Chem 279(51): 53407-18.

2) Craig, H. E., J. Coadwell, et al. (2010). “ARAP3 binding to phosphatidylinositol-(3,4,5)-trisphosphate depends on N-terminal tandem PH domains and adjacent sequences.” Cellular Signalling 22(2): 257-264.

3) Takahashi, K. and K. Suzuki (2010). “WAVE2 targeting to phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate mediated by insulin receptor substrate p53 through a complex with WAVE2.” Cellular Signalling 22(11): 1708-1716.

4) Gálvez-Santisteban, M., Rodriguez-Fraticelli, A. and Martin-Belmonte, F. (2014). Phosphoinositides Coated Beads Binding Assay. Bio-protocol 4(3): e1039. http://www.bio-protocol.org/e1039

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6) Lin, A., et al. (2017). “The LINK-A lncRNA interacts with PtdIns(3,4,5)P3 to hyperactivate AKT and confer resistance to AKT inhibitors.” Nat Cell Biol 19(3): 238-251.

7) Hawse, W. F. and R. T. Cattley (2019). “T cells transduce T-cell receptor signal strength by generating different phosphatidylinositols.” J Biol Chem 294(13): 4793-4805.

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國(guó)加利福尼亞州，早期以產(chǎn)品技術(shù)研發(fā)服務(wù)起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線，并將其商業(yè)化銷(xiāo)售，包括蛋白質(zhì)、抗體、酶、培養(yǎng)基、試劑盒和儀器。適用于細(xì)胞生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、診斷學(xué)、生物化學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、血液分析和高通量藥物篩選等領(lǐng)域。