首先描述的半胱天冬酶，半胱天冬酶-1隨后被發(fā)現(xiàn)與Ced-3同源，Ced-<>是秀麗隱桿線蟲半胱天冬酶對(duì)細(xì)胞凋亡至關(guān)重要。

半胱天冬酶-1 （ICE） 測(cè)定（目錄 #BML-SE168）：測(cè)定緩沖液：（50mM HEPES，pH 7.4，100mM 氯化鈉，0.1% CHAPS，1mM EDTA，10% 甘油，10mM DTT）

半胱天冬酶-1 （BML-SE168）：

在使用前在測(cè)定緩沖液中稀釋至 10 U/μl。

AC-YVAD-pNA （ALX-260-026） 比色底物：（測(cè)定緩沖液中的 400 μM 儲(chǔ)備溶液;儲(chǔ)存在-20°C。 使用前加熱至測(cè)定溫度。向5mg凈肽（MW = 629）加入159μlDMSO，以制備50mM儲(chǔ)備液。用檢測(cè)緩沖液將 50mM 儲(chǔ)備液稀釋至 400 μM。

反應(yīng)條件：

1）將45μl測(cè)定緩沖液加入1/2體積微量滴定板中。允許平衡以測(cè)定溫度。

2）向每個(gè)適當(dāng)?shù)目字屑尤?μl半胱天冬酶-1（10U / μl）。包括2個(gè)空白（5μl測(cè)定緩沖液而不是半胱天冬酶-1）。

3）要開始反應(yīng)，加入50μlAc-YVAD-pNA底物（400μM在測(cè)定緩沖液中）。最終底物濃度=200μM。

4）持續(xù)監(jiān)測(cè)A405nm。

5）數(shù)據(jù)分析：繪制OD與時(shí)間的關(guān)系圖，并確定曲線線性部分的斜率。使用10，500M-1cm-1的硝基苯胺消光系數(shù)，并調(diào)整樣品的光程（在0/5體積，100孔板的孔中，96μl~<>.<>cm）將OD / min轉(zhuǎn)換為底物/分鐘的速率。

作為Enzo全國(guó)總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Enzo熱銷產(chǎn)品胱天蛋白酶—1（人），（重組）。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

胱天蛋白酶—1（人），（重組）詳情：

替代名稱：白細(xì)胞介素1β轉(zhuǎn)化酶，IL-1β轉(zhuǎn)化酶，ICE

分子量：~20 + 10kDa

源：產(chǎn)于大腸桿菌。cDNA編碼的殘基與Genbank入庫(kù)號(hào)的Asn120-His 404（C末端）相同。M87507，除了Asp381到Glu的變化外，引入以穩(wěn)定酶以防止自體蛋白水解。

統(tǒng)一認(rèn)證：P29466

配方：液。在 50mM HEPES，pH 7.4 中，含有 100mM 氯化鈉、0.5% CHAPS、1mM EDTA、10% 甘油和 10mM DTT。

純度：≥90% （SDS 頁(yè)面）

純度細(xì)節(jié)：通過多步色譜純化。

活動(dòng)：100 U/μl

具體活動(dòng)：一個(gè)U=1 pmol/min，使用Ac-YVAD-pNA（200μM;產(chǎn)品編號(hào)。ALX-260-026）為底物，在30°C下。

應(yīng)用說明：研究酶調(diào)節(jié)和動(dòng)力學(xué)、切割目標(biāo)底物、篩選抑制劑的有用工具。

航運(yùn)：干冰

長(zhǎng)期儲(chǔ)存：-80°C

使用/穩(wěn)定性：初次解凍后，將產(chǎn)品分裝到單獨(dú)的試管中，并在 -80°C 下重新冷凍。 避免重復(fù)冷凍/除霜循環(huán)。該酶在冰上穩(wěn)定，通常需要建立實(shí)驗(yàn)所需的時(shí)間（30-60分鐘），但長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在冰上可能會(huì)失去活性。建議在測(cè)定開始前盡可能短的時(shí)間內(nèi)解凍和稀釋酶。剩余的、未稀釋和未使用的酶應(yīng)通過例如在干冰乙醇浴或液氮中快速冷凍來快速重新冷凍。該酶至少在 4 次凍融循環(huán)中保持穩(wěn)定。

部分相關(guān)文獻(xiàn)：

A small molecule inhibitor of caspase-1 inhibits NLRP3 inflammasome activation and pyroptosis to alleviate gouty inflammation: D.Y. Cao, et al.; Immunol. Lett. 244, 28 (2022), 

The colonic pathogen Entamoeba histolytica activates caspase-4/1 that cleaves the pore-forming protein gasdermin D to regulate IL-1β secretion: S. Wang, et al.; PLoS Pathog. 18, e1010415 (2022),

An Essential Role for SHARPIN in the Regulation of Caspase 1 Activity in Sepsis: M.V. Nastase, et al.; Am. J. Pathol. 186, 1206 (2016)

Enzo Life Sciences, Inc.是研究和診斷市場(chǎng)中標(biāo)記和檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域公認(rèn)的領(lǐng)導(dǎo)者。提供蛋白質(zhì)、抗體、肽、小分子、標(biāo)記探針染料和試劑盒組合等產(chǎn)品線，為生命科學(xué)研究/生物制藥提供用于目標(biāo)識(shí)別/驗(yàn)證、高含量分析、基因表達(dá)分析、核酸檢測(cè)、蛋白質(zhì)生物化學(xué)檢測(cè)以及細(xì)胞分析的諸多工具。