牛 IgA ELISA 試劑盒/Bovine IgA ELISA Kit是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于測(cè)量牛生物樣品中的IgA。如果ELISA在預(yù)期用途之外使用，則用戶可能需要針對(duì)所述用途進(jìn)行優(yōu)化。

在該測(cè)定中，樣品中存在的IgA與已吸附在聚苯乙烯微量滴定池表面的抗IgA抗體反應(yīng)。在通過洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）綴合的抗IgA抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與先前結(jié)合的IgA形成復(fù)合物。在另一個(gè)洗滌步驟之后，通過添加顯色底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來測(cè)定與免疫吸附結(jié)合的酶。結(jié)合酶的量與所測(cè)試樣品中IgA的濃度直接相關(guān)；因此，在450nm處的吸光度是測(cè)試樣品中IgA濃度的測(cè)量值。試驗(yàn)樣品中IgA的量可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行插值，并根據(jù)樣品稀釋度進(jìn)行校正。

艾美捷Bovine lgA ELISA試劑盒（E-10A）：

抗體類型 ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）

反應(yīng)性 牛/奶牛

宿主 兔子

特異性/目標(biāo) IgA（免疫球蛋白A）

大小 1.0

檢測(cè)范圍 12.5 納克/毫升 400 納克/毫升

靈敏度 7.009 納克/毫升

檢測(cè)時(shí)間 90 分鐘

樣本類型 牛奶、血漿、血清

儲(chǔ)存條件 2-8攝氏度

量化樣品中的總牛IgA

Bovine lgA ELISA試劑盒產(chǎn)品組分：

抗體包被微孔板

酶聯(lián)檢測(cè)抗體

校準(zhǔn)液

稀釋液濃縮液

洗滌液濃縮液

顯色底物溶液（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)）

終止液

測(cè)定程序：

1. 所有樣本和標(biāo)準(zhǔn)品都應(yīng)進(jìn)行雙份測(cè)定。

2. 應(yīng)盡快將標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣本（s）裝入ELISA孔中，以避免吸光度(OD)讀數(shù)的偏移。使用多通道移液管可以減少這種情況的發(fā)生。將以下標(biāo)準(zhǔn)品和樣本各取100 μL（雙份）吸入預(yù)指定的孔中：

標(biāo)準(zhǔn)0（0.0 ng/mL）雙份

標(biāo)準(zhǔn)1（6.25 ng/mL）雙份

標(biāo)準(zhǔn)2（12.50 ng/mL）雙份

標(biāo)準(zhǔn)3（25 ng/mL）雙份

標(biāo)準(zhǔn)4（50 ng/mL）雙份

標(biāo)準(zhǔn)5（100 ng/mL）雙份

標(biāo)準(zhǔn)6（200 ng/mL）雙份

樣本（雙份）注入預(yù)指定的孔中。

3. 將微孔板在室溫下孵育六十（60 ± 2）分鐘。孵育期間要保持板蓋蓋好并保持水平。

4. 孵育后，吸去孔中的內(nèi)容物。

5. 用適當(dāng)稀釋的洗滌液完全填滿每個(gè)孔，然后吸去。重復(fù)三次，總共進(jìn)行四次洗滌。如果手動(dòng)洗滌：用洗滌緩沖液完全填滿孔，然后將板倒置，將內(nèi)容物倒入或搖晃到廢液容器中。然后在吸水紙上用力敲擊孔以去除殘留的緩沖液。重復(fù)三次，總共進(jìn)行四次洗滌。

6. 將100 μL適當(dāng)稀釋的酶-抗體結(jié)合物吸入每個(gè)孔中。在室溫下孵育二十（20 ± 2）分鐘。孵育期間要保持板蓋蓋好，避光并保持水平。

7. 如步驟5/6所述洗滌并吸干孔中的內(nèi)容物。

8. 將100 μL的TMB底物溶液吸入每個(gè)孔中。

9. 在避光條件下，在室溫下精確孵育十分鐘（10）。

10. 十分鐘后，向每個(gè)孔中加入100 μL的終止液。

11. 在30分鐘內(nèi)測(cè)定每個(gè)孔中內(nèi)容物的吸光度（450 nm）。根據(jù)制造商的規(guī)格校準(zhǔn)板式讀取器。

結(jié)果計(jì)算：

1. 從每個(gè)樣本的測(cè)試值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的吸光度平均讀數(shù)）。

2. 計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)讀數(shù)的平均值，并使用這些結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來減少數(shù)據(jù)來構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合將不那么精確。

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值測(cè)試樣本值。校正血清稀釋因子，以得出原始樣本中的IgA濃度。

僅用于研究。非診斷用途。僅限體外使用。