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免疫熒光(Immunofluorescence, IF)是一種技術(shù),它允許在任何給定的組織或細胞類型中可視化多種成分。這種廣泛的能力是通過特定抗體與熒光染料結(jié)合實現(xiàn)的,抗體能夠特異性地識別目標(biāo)分子,而熒光染料則使得這些分子在熒光顯微鏡下可見。免疫熒光技術(shù)在醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用,例如在癌癥研究中,它可以用來識別和定量腫瘤微環(huán)境中的不同細胞類型,從而幫助理解腫瘤的免疫景觀和制定治療策略。

在免疫熒光技術(shù)中,二抗的選擇對于實驗的成功至關(guān)重要。Jackson ImmunoResearch 提供了超過3000種二抗,適用于包括免疫熒光在內(nèi)的多種應(yīng)用,如Western blot、共聚焦顯微鏡(免疫組織化學(xué)、免疫細胞化學(xué)和免疫熒光)、ELISA、流式細胞術(shù)和電子顯微鏡等。這些抗體具有廣泛的物種和特異性選擇,以及全IgG、F(ab')2和Fab片段形式,允許在多樣化的實驗條件下進行高度特異性的檢測。此外,Jackson ImmunoResearch 的Alexa Fluor 594偶聯(lián)抗體在可見光譜的深紅區(qū)域提供明亮、光穩(wěn)定且親水性強的熒光,是免疫熒光檢測的最佳選擇。以下列出了較為常規(guī)的熒光染料的選擇:
跨光譜的最亮信號
JIR 提供廣泛的熒光偶聯(lián)物,涵蓋從藍光到紅外光發(fā)射的最常用激發(fā)光源和濾光片組合。
Alexa Fluor 熒光染料
Alexa Fluor 熒光染料被廣泛認可為卓越的熒光染料,以其亮度和光穩(wěn)定性受到尊重。它們具有高度的水溶性,并且在 pH 4 到 pH 10 的范圍內(nèi)都能保持熒光,使您能夠產(chǎn)生精美的圖像。正如 Jackson 的研究指出,Alexa Fluor 染料在多種實驗條件下都能保持穩(wěn)定的熒光強度,即使在長時間的光照下,其熒光衰減速度也遠低于其他同類染料,這使得它們在長時間觀察的實驗中尤為適用。這種光穩(wěn)定性對于需要長時間成像的細胞生物學(xué)研究,如活細胞成像,具有重要意義。
Brilliant Violet 染料
BV421 和 BV480 是聚合物鏈,可以被視為一系列光學(xué)片段的集合,每個片段都有吸收光和發(fā)出熒光信號的能力。這使得這些染料具有明亮的熒光信號,從而實現(xiàn)卓越的分辨率和靈敏度。Jackson 的實驗數(shù)據(jù)表明,Brilliant Violet? 染料在復(fù)雜的生物樣品中仍能保持高亮度,即使在高背景熒光的組織切片中,也能清晰地分辨出目標(biāo)信號。這種高亮度和低背景熒光的特性,使得它們在多色流式細胞術(shù)和熒光顯微鏡成像中表現(xiàn)出色,能夠有效減少信號重疊和背景干擾。
花青素染料(Cy?3 和 Cy?5)
花青素染料可以很好地承受用于將切片安裝在非極性塑料安裝介質(zhì)中所需的嚴酷脫水和嵌入條件。與在水性介質(zhì)中相比,花青素染料在非極性環(huán)境中更亮,這使得在這些條件下與其他染料相比,采集時間得以減少。Jackson 在其研究中提到,花青素染料在非極性環(huán)境中的熒光增強特性,使其在某些特殊的組織學(xué)應(yīng)用中具有獨特的優(yōu)勢,尤其是在需要將切片安裝在特定介質(zhì)中的情況下。這種特性使得花青素染料在免疫組織化學(xué)和原位雜交等實驗中,能夠提供更清晰的熒光信號,有助于提高實驗的準(zhǔn)確性和可靠性。
熒光蛋白 - 藻紅蛋白(R-PE)、PerCP 和別藻藍蛋白(APC)
藻紅蛋白(R-PE)、PerCP 和別藻藍蛋白(APC)可以被可見光譜范圍內(nèi)較寬范圍的光激發(fā),具有高度的水溶性,相對較低的等電點,并且缺乏可能具有粘性的碳水化合物。它們是流式細胞術(shù)中細胞表面標(biāo)記的絕佳選擇,因為它們相對較高的分子量可能限制了它們在需要良好穿透細胞和組織的程序中的使用。Jackson 的實驗結(jié)果也證實了這些熒光蛋白在流式細胞術(shù)中的優(yōu)異表現(xiàn),它們的高熒光強度和特異性結(jié)合能力,使得細胞表面標(biāo)記更加清晰,有助于提高流式細胞術(shù)的檢測效率和準(zhǔn)確性。這些熒光蛋白的特性使其在細胞表面標(biāo)志物的檢測和細胞分選等應(yīng)用中表現(xiàn)出色,能夠有效減少非特異性結(jié)合和背景熒光。
| Fluorophore | Excitation Peak (nm) | Emission Peak (nm) |
| DyLight 405 | 400 | 421 |
| Brilliant Violet 421* | 407 | 421 |
| Aminomethylcoumarin, AMCA | 350 | 450 |
| Brilliant Violet 480* | 436 | 478 |
| Alexa Fluor 488 | 493 | 519 |
| Fluorescein, FITC/DTAF | 492 | 520 |
| Indocarbocyanine, Cy3 | 550 | 570 |
| R-Phycoerythrin, R-PE | many, 488 | 580 |
| Alexa Fluor 555 | 552 | 572 |
| Rhodamine Red-X, RRX | 570 | 590 |
| Alexa Fluor 568 | 577 | 602 |
| Alexa Fluor 594 | 591 | 614 |
| Allophycocyanin, APC | many, 650 | 660 |
| Alexa Fluor 647 | 651 | 667 |
| Indocarbocyanine, Cy5 | 650 | 670 |
| Peridinin-Chlorophyll-Protein, PerCP | many, 488 | 675 |
| Alexa Fluor 680 | 684 | 702 |
| Alexa Fluor 790 | 792 | 803 |
綜上所述,Jackson ImmunoResearch 提供的高質(zhì)量二抗產(chǎn)品,不僅適用于免疫熒光技術(shù),還覆蓋了多種生物學(xué)研究領(lǐng)域。這些抗體的多樣性和特異性確保了實驗的準(zhǔn)確性和可靠性,為科研人員提供了強有力的工具。通過選擇合適的二抗,研究人員可以更有效地進行生物標(biāo)記和檢測,推動科學(xué)發(fā)現(xiàn)和醫(yī)學(xué)進步。Jackson ImmunoResearch 致力于不斷優(yōu)化產(chǎn)品,以滿足不斷變化的科研需求。
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