快速內切酶是一系列能夠快速消化DNA的工程限制性酶。所有快速內切酶在通用CutOne中顯示出優(yōu)異的活性? 和CutOne? 彩色緩沖液，能夠在5~15分鐘內消化DNA。這使得任何限制性酶的組合都能在一個反應管中同時工作，并消除了連續(xù)消化的需要。FlyCut? 酶已通過多項嚴格的質量控制，可用于消化質粒、基因組和病毒DNA以及PCR產(chǎn)物。CutOne? Color Buffer包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料，可以將反應混合物直接裝載在凝膠上。CutOne的紅色染料? 彩色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中與2.5kb雙鏈DNA片段一起遷移，黃色染料在1%瓊脂凝膠中與10bp雙鏈DNA碎片一起遷移。

快速內切酶AgeI組成：

艾美捷快速內切酶AgeI：

Cat #: C-BSM3501

Size: 25 rxns

Storage: -20°C

推薦反應條件

1x CutOne“緩沖器；

在37°C下培養(yǎng)；

有關反應設置，請參閱“快速DNA消化方案”。

熱滅活

在80°C下培養(yǎng)20分鐘。

快速內切酶AgeI質量控制：

功能測試

在含有1μg p615 DNA和1μul FlyCut Agel的CutOne“”緩沖液中，在37°C下孵育15分鐘，反應20μl，瓊脂糖凝膠電泳測定完全消化。

長時間培養(yǎng)/星形活性測定

在含有1μg p615 DNA和1μl FlyCut’’Agel的CutOne’緩沖液中，在37℃下孵育3小時，反應20μl，瓊脂糖凝膠電泳檢測到DNA模式?jīng)]有可檢測的核酸酶降解。長期孵育可能導致星形活性。

結扎和清算

在37°C下用FlyCut“”Agel消化10倍后，>95%的DNA片段可以在22℃下與T4 DNA配體連接。在這些連接的片段中，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，>95%可以用FlyCut“”Agel重新切割。

非特異性核酸內切酶活性

在含有1μg超螺旋質粒和1μl FlyCut“”Agel的CutOne“緩沖液中，在37℃下孵育4小時，20μl反應導致通過瓊脂糖凝膠電泳測定的向刻痕或線性化形式的轉化率<10%。

藍/白篩選試驗：

用1μl FlyCut消化含有l(wèi)acZα基因的合適載體? 年齡1。將消化產(chǎn)物連接并轉化為大腸桿菌感受態(tài)細胞。在含有X-Gal、IPTG和適當抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產(chǎn)生藍色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產(chǎn)生白色菌落。FlyCut? 限制性內切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落

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