快速內(nèi)切酶ClaI是一系列能夠快速消化DNA的工程限制性酶。所有快速內(nèi)切酶ClaI在通用CutOne中顯示出優(yōu)異的活性? 和CutOne? 彩色緩沖液，能夠在5~15分鐘內(nèi)消化DNA。這使得任何限制性酶的組合都能在一個反應(yīng)管中同時工作，并消除了連續(xù)消化的需要。快速內(nèi)切酶ClaI已通過多項嚴格的質(zhì)量控制，可用于消化質(zhì)粒、基因組和病毒DNA以及PCR產(chǎn)物。CutOne? Color Buffer包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料，可以將反應(yīng)混合物直接裝載在凝膠上。CutOne的紅色染料? 彩色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中與2.5kb雙鏈DNA片段一起遷移，黃色染料在1%瓊脂凝膠中與10bp雙鏈DNA碎片一起遷移。

艾美捷快速內(nèi)切酶ClaI：

Cat #: C-BSM532

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

快速內(nèi)切酶ClaI組成：

推薦反應(yīng)條件：

1xCutOne“緩沖液；在37°C下培養(yǎng)；

熱滅活

在80°C下培養(yǎng)20分鐘。

質(zhì)量控制：

功能測試

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Clal的CutOne“”緩沖液中，在37℃下孵育15分鐘，反應(yīng)20μl，瓊脂糖凝膠電泳測定完全消化。

長時間培養(yǎng)/星形活性測定

在含有1μgλDNA（Dam）和1μl FlyCut“”Clal的CutOne“”緩沖液中，在37℃下孵育3小時，反應(yīng)20μl，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，結(jié)果是DNA模式?jīng)]有可檢測的核酸酶降解。較長的孵育時間可能導(dǎo)致星形活性。

結(jié)扎和清算

在37°C下用FlyCut“Clal消化10倍后，在22℃下，>95%的DNA片段可以與T4 DNA連接酶連接。在這些連接的片段中，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，>95%可以用FlyCut”“Clal重新切割。

非特異性核酸內(nèi)切酶活性

在含有1μg超螺旋質(zhì)粒和1μl FlyCut“”Clal的CutOne“”緩沖液中，在37℃下孵育4小時，反應(yīng)20μl，通過瓊脂糖凝膠電泳測定，轉(zhuǎn)化為刻痕或線性形式的轉(zhuǎn)化率<10%。

藍白篩選法：

1μl FlyCut酶切l(wèi)acZα基因載體? ClaI。將酶解產(chǎn)物連接并轉(zhuǎn)化為大腸桿菌感受態(tài)細胞。在含有X-Gal、IPTG和適當(dāng)抗生素的Luria Bertani培養(yǎng)板上，成功連接的β-半乳糖苷酶基因可以表達并產(chǎn)生藍色菌落，而中斷基因（即降解的DNA末端）產(chǎn)生白色菌落。飛剪? 限制性內(nèi)切酶必須產(chǎn)生少于1%的白色菌落。