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HaloTag是由Promega公司開發(fā)的一種基于蛋白結(jié)構(gòu)域的標(biāo)記技術(shù),它結(jié)合了蛋白結(jié)構(gòu)域的高親和性和化學(xué)標(biāo)記物的靈活性,使其成為一種出色的蛋白質(zhì)標(biāo)記工具。
HaloTag標(biāo)記蛋白質(zhì)的原理是基于融合蛋白標(biāo)簽和合成熒光配基之間共價(jià)鍵的形成,可用于標(biāo)記細(xì)胞或其他生化環(huán)境中的目的蛋白以表征和分析其定位及功能。HaloTag報(bào)告基因蛋白是33kDa的單體蛋白,是一種經(jīng)基因工程改造、無催化活性的水解酶衍生物,在生理?xiàng)l件下可以快速和 HaloTag熒光配體形成不可逆的共價(jià)鍵從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的高特異性標(biāo)記。
HaloTag技術(shù)具有許多優(yōu)勢(shì):
1、HaloTag標(biāo)記物的小尺寸使其能夠輕松地與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合,不會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生明顯的影響。
2、HaloTag標(biāo)記物具有極高的親和力,可以實(shí)現(xiàn)高效的蛋白質(zhì)標(biāo)記和純化。
3、HaloTag標(biāo)記物的化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣性,使得研究人員可以選擇適合自己實(shí)驗(yàn)需求的標(biāo)記物,如熒光染料、親和樹脂和質(zhì)譜標(biāo)記物等。這為蛋白質(zhì)功能研究、蛋白質(zhì)相互作用的鑒定以及蛋白質(zhì)定位提供了更多的可能性。
4、HaloTag技術(shù)還具有操作簡(jiǎn)便、高靈敏度和廣泛適用性等特點(diǎn)。它可以用于多種生物樣本,包括細(xì)胞系、原代細(xì)胞、組織和活體模型等。

艾美捷HaloTag蛋白標(biāo)簽熒光配體(CA-SiR):
CA-SiR Ligand是一款以四甲基硅羅丹明為母體的遠(yuǎn)紅發(fā)射熒光配體,基于其在溶液中無色親酯的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)和標(biāo)記在HaloTag 蛋白后熒光的兩性離子結(jié)構(gòu)之間的高效轉(zhuǎn)換,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)蛋白的“免洗”標(biāo)記。
CA-TMR Ligand和 CA-R110 Ligand是以氧羅丹明為母體的熒光配體,二者皆具有良好的熒光亮度、較高的光穩(wěn)定性、較低的光毒性和較好的細(xì)胞膜滲透能力;目前已廣泛應(yīng)用于寬場(chǎng)、共聚焦、單分子定位示蹤和SIM超分辨成像等多種模態(tài)的成像系統(tǒng)中,其較好的生物相容性使其可以應(yīng)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物、細(xì)菌、酵母等生物體系的熒光成像。
相較于CA-TMR Ligand 和CA-R110 Ligand熒光配體,CA-SiR Ligand熒光配體不僅具有良好的熒光亮度、較高的光穩(wěn)定性和較低的光毒性,其極佳的生物相容性和高效的細(xì)胞膜滲透能力,使得CA-SiR Ligand熒光配體在哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物、細(xì)菌、酵母和活體模式動(dòng)物等生物體系中有著廣泛的應(yīng)用,并可在除寬場(chǎng)、共聚焦、單分子定位示蹤和 SIM 之外的STED超分辨成像體系中進(jìn)行活細(xì)胞熒光成像。
浦海景珊生物技術(shù)有限公司(Genvivo Biotech)是一家提供高端成像試劑的公司,Genvivo的目標(biāo)是開發(fā)一系列適應(yīng)于超分辨成像的染料技術(shù)。PKMITO 系列線粒體染料,Gen Fluor 系列熒光染料及抗體是他們先推出的適應(yīng)于超分辨熒光成像產(chǎn)品。目前他們正在繼續(xù)深耕新一代產(chǎn)品研發(fā),旨在為科研用戶和企業(yè)用戶提供特別的成像體驗(yàn)。其開發(fā)的拳頭產(chǎn)品PKMITO 系列線粒體染料是基于北京大學(xué)學(xué)術(shù)成果轉(zhuǎn)化,是市面上持續(xù)時(shí)間特別長,細(xì)胞毒性特別小的超分辨率的線粒體探針。
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