Jena Bioscience 銅( 銅元素 (I))-catalyzed A 齊德 A Lk連 C 化學(xué)反應(yīng)( 夸亞克 描述通過(guò)三唑鍵形成穩(wěn)定共軛-B的與端基基官能分子b的異功能分子A的反應(yīng)。

由于終端烷類化合物相對(duì)而言對(duì)氮代化合物是無(wú)反應(yīng)的,所以夸AAC反應(yīng)的效率在很大程度上取決于銅離子等金屬催化劑在+1氧化狀態(tài)(CU(I))下的存在。

可以使用不同的銅源、還原劑和 Cu(I) 穩(wěn)定配體，但是，對(duì)于大多數(shù)生物共軛應(yīng)用，可將 Cu(II) 鹽 CuSO 4作為銅源、水溶性 Cu(I) 穩(wěn)定配體（例如 BTTAA）和推薦使用抗壞血酸鈉作為還原劑。[1-3]

使用Picolyl-Azide試劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)的Azide試劑可以進(jìn)一步提高反應(yīng)效率，并由于內(nèi)部銅螯合部分而降低所需的最終CuSO 4濃度。[4]

CuAAC 反應(yīng)的設(shè)置基于以下一般三步程序：

在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)緩沖液中制備炔烴和疊氮官能化分子的混合物。

制備 CuSO 4 : Cu(I)-配體預(yù)混物，將其添加到疊氮化物-炔烴溶液中并短暫混合。

最后加入抗壞血酸鈉作為還原劑開始反應(yīng)。

JenaBioscience-CuAAC 細(xì)胞反應(yīng)緩沖液試劑盒（基于 BTTAA）提供足夠的量，使用 100 mM 磷酸鈉反應(yīng)緩沖液中的 2 mM CuSO 4、10 mM BTTAA 和 100 mM 抗壞血酸鈉進(jìn)行 50 次 CuAAC 實(shí)驗(yàn) à 500 μl。

下面概述了用于標(biāo)記含有代謝功能化炔烴或疊氮化物修飾生物分子的固定和透化細(xì)胞的通用方案（參見(jiàn) 3）。但是，不同的 CUAAC 標(biāo)記實(shí)驗(yàn)以及關(guān)鍵反應(yīng)參數(shù)（例如最終 CuSO4）可能需要單獨(dú)優(yōu)化4濃度，CuSO 4 :BTTAA比值，檢測(cè)試劑濃度。

洪等人。[2]和普雷索爾斯基等人。[1]提供了有關(guān) CuSO 4濃度、CuSO 4 ：配體比率和反應(yīng)緩沖液類型影響的有用背景信息，如果需要優(yōu)化，可以將其用作起點(diǎn)。

[1] Presolski et al. (2011) Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Click Chemistry for Bioconjugation. Current Protocols in Chemical Biology 3:153.

[2] Hong et al. (2011) Analysis and Optimization of Copper-Catalyzed Azide-Alkyne Cycloaddition for Bioconjugation. Angew. Chem. Int. Ed. 48:9879.

[3] Besanceney-Webler et al. (2011) Increasing the Efficiacy of Bioorthogonal Click Reactions for Bioconjugation: A Comparative Study. Angew. Chem. Int. Ed. 50:8051.

[4] Uttamapinant et al. (2012) Fast, Cell-Compatible Click Chemistry with Copper-Chelating Azides for Biomolecular Labeling. Angew. Chem. Int. Ed. 51:5852.

艾美捷Jena Bioscience CuAAC細(xì)胞反應(yīng)緩沖試劑盒（CLK-073）參數(shù)：

供一般實(shí)驗(yàn)室使用。

航運(yùn): 在常溫下裝運(yùn)

儲(chǔ)存條件: 在4°C儲(chǔ)存

短期暴露(累計(jì)1周)到環(huán)境溫度可能.

庫(kù)亞克細(xì)胞反應(yīng)緩沖盒(BTTAA基)適合于與含有代謝功能化基或氮代修飾生物分子的細(xì)胞進(jìn)行銅(CU(I))催化的偶氮堿點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)。

一個(gè)工具包提供足夠的金額 使用2mm庫(kù)索進(jìn)行50次夸亞克實(shí)驗(yàn) 4 (銅源),10mmBttaa(銅(I)-穩(wěn)定配體)和100mmNa-抗壞血酸酯(還原劑) 在100mm磷酸鹽反應(yīng)緩沖區(qū)。

Jena Bioscience-CuAAC細(xì)胞反應(yīng)緩沖試劑盒內(nèi)容:

銅來(lái)源:

2x10毫克庫(kù)索 4 (M = 159.6 g/mol), #CLK-MI004)

銅(一)穩(wěn)定配體:

5 x 25 mg BTTAA (M= 430.5 g/mol, #CLK-067)

還原劑:

4 x 200 mg Na-Ascorbate (M = 198.1 g/mol, #CLK-MI005)

反應(yīng)緩沖區(qū):

2x30毫升無(wú)菌100mm磷酸鹽緩沖液,PH7

10毫升無(wú)菌DDH 2 O

所需但未提供的材料:

炔或疊氮化物功能化的底物，例如含有代謝功能化的炔或疊氮化物修飾的生物分子的固定和透化細(xì)胞。

(吡啶基)-疊氮化物或炔烴檢測(cè)試劑和適當(dāng)?shù)娜軇ɡ鏒MSO）

用于標(biāo)記固定和透化的細(xì)胞：

洗滌溶液，例如含有 3% BSA 的 PBS

固定溶液，例如含有 3.7% 甲醛的 PBS

透化溶液，例如含有 0.5% Triton X-100 的 PBS

用于成像的封固劑

其他標(biāo)記試劑，例如核染色劑或抗體

JenaBioscience的主要產(chǎn)品包括核苷/核酸制品系列（包括合成的類似物）、重組蛋白及蛋白表達(dá)系統(tǒng)、點(diǎn)擊化學(xué)產(chǎn)品系列、在結(jié)構(gòu)學(xué)研究方面全面提供晶體篩選試劑盒、優(yōu)化試劑、工具和各類耗材等。此外，還提供分子生物學(xué)和生物化學(xué)研究的定制試劑與研究服務(wù)。艾美捷科技是Jena Bioscience的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。