PhiCal?檢測(cè)是一種定量ELISA，用于測(cè)量人類(lèi)糞便中糞便鈣衛(wèi)蛋白的濃度，一種中性粒細(xì)胞蛋白，是粘膜炎癥的標(biāo)志。PhiCal?測(cè)試可用作體外測(cè)試診斷以幫助診斷炎性腸病（IBD）：克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎，并將IBD與腸易激綜合征區(qū)分開(kāi)來(lái)。

艾美捷Svar Life Science-PhiCal（#CPT400）檢測(cè)原理：

PhiCal?糞便鈣衛(wèi)蛋白免疫測(cè)定是一種酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定系統(tǒng)通過(guò)比色檢測(cè)。該測(cè)試使用了一種針對(duì)鈣衛(wèi)蛋白的多克隆抗體，該抗體與一種酶連接免疫吸附測(cè)定系統(tǒng)。稀釋樣品中存在的鈣衛(wèi)蛋白被吸附的抗體結(jié)合到塑料井的表面。酶偶聯(lián)抗體與捕獲的抗原結(jié)合隨后，酶催化底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物。強(qiáng)度顏色與結(jié)合的共軛物的量成正比，因此與捕獲的鈣衛(wèi)蛋白的量成比例。使用提供的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算樣品中鈣衛(wèi)蛋白的濃度。

Svar Life Science-PhiCal試劑盒包含的試劑：

抗體涂層板：12條條帶，每條帶8個(gè)孔，涂有針對(duì)鈣保護(hù)蛋白的抗體。該板存放在密封袋中，并附有干燥劑。

結(jié)合物：15毫升堿性磷酸酶標(biāo)記的免疫親和純化IgG抗體（來(lái)自兔子），針對(duì)鈣保護(hù)蛋白，溶解在含Proclin 300作為防腐劑的緩沖液中。

底物：1瓶含有15毫升底物的緩沖液。隨時(shí)可用。

洗滌液：50毫升20倍濃縮液，需要用蒸餾水稀釋。

稀釋液：20毫升10倍濃縮液，含Proclin 300作為防腐劑，需要用蒸餾水稀釋。

提取液：2瓶50毫升的2.5倍濃縮液，含Proclin 300作為防腐劑，需要用蒸餾水稀釋。該濃縮液對(duì)眼睛和皮膚有刺激性。

校準(zhǔn)品：5瓶各含1毫升已知濃度的鈣保護(hù)蛋白溶液（6.25、12.5、25、50和100 ng/ml），含Proclin 300作為防腐劑。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的值印刷在瓶標(biāo)簽上。

對(duì)照品：含Proclin 300作為防腐劑。

對(duì)照品1（低濃度）：1瓶含有1.0毫升。隨時(shí)可用。請(qǐng)勿稀釋。該批次的特定范圍值印刷在瓶標(biāo)簽上，以ng/ml表示。近似范圍 = 20-40 ng/ml 或（50-100 ?g/g）。

對(duì)照品2（高濃度）：1瓶含有1.0毫升。隨時(shí)可用。請(qǐng)勿稀釋。該批次的特定范圍值印刷在瓶標(biāo)簽上，以ng/ml表示。近似范圍 = 45-75 ng/ml 或（112.5-187.5 ?g/g）。

性能特征

水相線性：

水相線性通過(guò)稀釋Calprotectin參考材料（來(lái)自挪威奧斯陸的Magne Fagerhol博士）進(jìn)行測(cè)試。對(duì)每個(gè)稀釋水平進(jìn)行了三次重復(fù)測(cè)量。每個(gè)水平的平均觀察值與相應(yīng)的預(yù)期值進(jìn)行比較，如下圖所示。水相線性的評(píng)估表明，該檢測(cè)在6.25 - 100 ng/ml或15.625 - 250 ?g/g范圍內(nèi)具有可接受的線性和準(zhǔn)確性。這項(xiàng)研究還作為第二源標(biāo)定驗(yàn)證，因?yàn)橛糜跇?biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)隨試劑盒提供，而用于評(píng)估線性的標(biāo)準(zhǔn)則是稀釋的純化第二源材料。

功能靈敏度：

功能靈敏度（FS）與線性數(shù)據(jù)一起確定了結(jié)果準(zhǔn)確和精確的最低濃度；低于檢測(cè)的功能靈敏度的患者結(jié)果報(bào)告為<FS。為了確定PhiCal?測(cè)試的功能靈敏度，使用試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的3個(gè)濃度（12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.125 ng/ml）在6天內(nèi)進(jìn)行了三次或四次的測(cè)定；通過(guò)使用稀釋緩沖液將6.25 ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋獲得3.125 ng/ml水平。每個(gè)水平的%CV與其相應(yīng)的濃度進(jìn)行繪圖。對(duì)于測(cè)定的濃度3.125 ng/ml，6.25 ng/ml和12.5 ng/ml的準(zhǔn)確性和精確性是可接受的。可報(bào)告范圍將受限于最低校準(zhǔn)值：6.25 ng/ml。

在典型的樣本稀釋比例為1：2500的情況下，6.25 ng/ml相當(dāng)于每克糞便中的15.6（?g Calprotectin）/（g stool）。

Svar Life Science-PhiCal文獻(xiàn)參考：

1. Fagerhol MK, et al. Calprotectin (The L1 leukocyte protein) in: Smith V.L. and Dedman J.R. (eds.): Stimulus response coupling: The role of intracellular calcium-binding proteins. CRC Press, Boca Raton 1990,p.187-210

2. R?seth AG, et al. Assessment of the neutrophil dominating protein calprotectin in feces. A methodologic study. Scand J Gastroenterol 1992;27:793-798.

3. R?seth AG, et al. Correlation between faecal excretion of Indium-111-labelled granulocytes and

calprotectin, a granulocyte marker protein, in patients with inflammatory bowel disease. Scand J

Gastroenterol 1999;34:50-54.

4. Tibble J, et al. A simple method for assessing intestinal inflammation in Crohn’s disease. Gut 2000;47:506-513.

5. Bunn SK, et al. Fecal calprotectin: Validation as a noninvasive measure of bowel inflammation in childhood inflammatory bowel disease. J Pediatr Gastroenterol Nutr 2001;33:14-22

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